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Artigo de método

Um modelo de interposição venosa de coelho imitando cirurgia de revascularização usando enxertos de veia para avaliar hiperplasia intimal sob pressão arterial

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DOI:

10.3791/60931

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15 de maio de 2020

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Neste artigo

Resumo

O presente protocolo visa criar experimentalmente hiperplasia intimal venosa submetendo veias à pressão arterial arterial para o desenvolvimento de estratégias para atenuar a hiperplasia intimal venosa após cirurgia de revascularização usando enxertos venosos.

Resumo

Embora enxertos venosos tenham sido comumente usados como enxertos autólogos em cirurgias de revascularização para doenças isquêmicas, a patência a longo prazo permanece pobre devido à aceleração da hiperplasia intimal devido à exposição à pressão arterial. O presente protocolo é projetado para o estabelecimento de hiperplasia intimal venosa experimental interpondo veias jugulares de coelho às artérias carótidas ipsilaterais. O protocolo não requer procedimentos cirúrgicos profundos no tronco do corpo e a extensão da incisão é limitada, o que é menos invasivo para os animais, permitindo a observação a longo prazo após a implantação. Este procedimento simples permite aos pesquisadores investigar estratégias para atenuar a progressão da hiperplasia intimal dos enxertos venosos implantados. Utilizando este protocolo, reportamos os efeitos da transdução de microRNA-145 (miR-145), que é conhecida por controlar o fenótipo das células musculares lisas vasculares (VSMCs) do estado proliferativo ao estado contrátil, em enxertos venosos colhidos. Confirmamos a atenuação da hiperplasia intimal dos enxertos venosos através da transdução de miR-145 antes da cirurgia de implantação através da mudança do fenótipo dos VSMCs. Aqui relatamos uma plataforma experimental menos invasiva para investigar as estratégias que podem ser usadas para atenuar a hiperplasia intimal de enxertos venosos em cirurgias de revascularização.

Introdução

O número de pacientes que sofrem de doenças isquêmicas devido à aterosclerose está aumentando em todo o mundo1. Apesar dos atuais avanços em terapias médicas e cirúrgicas para doenças cardiovasculares, as doenças isquêmicas do coração, como o infarto do miocárdio, continuam sendo uma das principais causas de morbidade e mortalidade2. Além disso, as doenças arteriais periféricas caracterizadas pela redução do fluxo sanguíneo para os membros induzem isquemia crítica aos membros, onde aproximadamente 40% dos pacientes perdem as pernas dentro de 6 meses após o diagnóstico, e a taxa de mortalidade é de até 20%

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Protocolo

NOTA: Todos os procedimentos cirúrgicos realizados em animais devem ser realizados de acordo com o Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (www.nap.edu/catalog/5140.html) ou outras diretrizes éticas adequadas. Os protocolos devem ser aprovados pela comissão de bem-estar animal na instituição apropriada antes de prosseguir.

1. Preparação de animais

  1. Compre coelhos brancos japoneses machos (ou coelhos com tamanho equivalente do corpo) pesando 2,7-3,0 kg.
  2. Aclimate os coelhos por 1 semana em um ciclo claro-escuro de 12 horas e alimente uma dieta regular de comida de coelho antes do procedimento.

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Resultados

A Figura 1A mostra uma imagem representativa de hiperplasia intimal bem sucedida em 2 semanas após a cirurgia de interposição venosa (painel superior). O painel inferior mostra os efeitos terapêuticos de nanopartículas poli(ácido cogólico- lacótico-co-glicólico) microRNA-145 que atenuaram a hiperplasia intimal (painel inferior). A Figura 1B mostra a comparação da hiperplasia intimal entre o grupo controle utilizando os grupos de controle de solução salina tampon.......

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Discussão

O presente protocolo foi projetado para fornecer uma plataforma experimental para testar várias intervenções moleculares ou genéticas para VSMCs para controlar o fenótipo do estado proliferativo para o estado contrátil e, posteriormente, atenuar a progressão da hiperplasia intimal venosa in vivo. Utilizando este modelo, preparamos com sucesso a hiperplasia intimal 2 semanas após a cirurgia (Figura 1A) e indicamos o potencial terapêutico do microRNA-145 para controlar o fenótipo VSMC

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Divulgações

Os autores não têm nada para revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado por bolsas de pesquisa do Ministério da Educação, Cultura, Esportes, Ciência e Tecnologia do Japão (25462136).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Solução de iodopovidona a 10%Nakakita872612Consumíveis cirúrgicos
2-0 VICRYL PlusJohnson and Johnson VCP316HConsumíveis cirúrgicos
4-0 Sutura de sedaAlfresa pharmaGA04SBConsumíveis cirúrgicos
8-0 Sutura de polipropilenoEthicon8741HConsumíveis cirúrgicos
Cefazorin sódicoNichi-Iko Pharmaceutical6132401D3196Antibióticos
Cateter Fogarty (2Fr)Edwards Lifesciences LLCE-060-2FDescartáveis cirúrgicos
HeparinaNipro873334Anticoagulante
Cateter intravenoso (20G)TerumoSR-OT2051CDescartáveis cirúrgicos
IsofluranoFujifilm095-06573Anestesia
Cloridrato de lidocaínaMP Biomedicals193917Anestesia
Pentobarbital sódicoIndústria Química de TóquioP0776Anestesia

Referências

  1. Causes of death, 2000-2016, Global Health Estimates (GHE). World Health Organization (WHO). , Available from: https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/ (2019).
  2. Benjamin, E. J., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2019 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 139....

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Reimpressões e permissões

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