Este protocolo valida um modelo de roedor confiável, fácil de executar e reprodutível da lesão axonal difusa cerebral (DAI) que induz danos generalizados de matéria branca sem fraturas no crânio ou contusões.
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Artigo de método
Indução de lesão cerebral axonal difusa em ratos com base na aceleração rotacional
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Lesão cerebral traumática (TCE) é uma das principais causas de morte e incapacidade. A lesão axonal difusa (DAI) é o mecanismo predominante de lesão em uma grande porcentagem de pacientes com TCE que necessitam de internação. Dai envolve danos axonais generalizados por tremor, rotação ou lesão de explosão, levando a lesões rápidas de estiramento axonal e alterações axonais secundárias que estão associadas a um impacto duradouro na recuperação funcional. Historicamente, modelos experimentais de DAI sem lesão focal têm sido difíceis de projetar. Aqui validamos um modelo de roedor simples, reprodutível e confiável do DAI que causa danos generalizados de matéria branca sem fraturas no crânio ou contusões.
Introdução
A lesão cerebral traumática (TCE) é uma das principais causas de morte e incapacidade nos Estados Unidos. Os TBIs contribuem para cerca de 30% de todas as mortes relacionadas a lesões1,2. As principais causas de TCE diferem entre as faixas etárias e incluem quedas, colisões em alta velocidade durante esportes, automutilação intencional, acidentes de veículos automotores e assaltos1,2,3.
A lesão axonal difusa cerebral (DAI) é um tipo específico de TCE induzido pela aceleração rotacional, tre....
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Protocolo
Os experimentos foram realizados seguindo as recomendações das Declarações de Helsinque e Tóquio e das Diretrizes para o Uso de Animais Experimentais da Comunidade Europeia. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados Animais da Universidade Ben-Gurion do Negev.
1. Preparar ratos para o procedimento experimental
NOTA: Selecione ratos machos adultos sprague-dawley pesando 300-350 g.
- Obter aprovação para a realização desses experimentos no Comitê de Cuidado e Uso institucional de Animais.
- Mantenha os ratos a uma temperatura ambiente de 22 ± 1 °C, com ciclos de luz de 12 horas e 12 ho....
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Resultados
A Tabela 1 ilustra a linha do tempo do protocolo. A taxa de mortalidade nesse modelo de DAI foi de 0%. Um teste de Mann-Whitney indicou que o déficit neurológico foi significativamente maior para os 15 ratos DAI em comparação com os 15 ratos falsos em 48 horas após a intervenção (Mdn = 1 vs. 0), U = 22,5, p < 0,001, r = 0,78 (ver Tabela 2). Os dados são medidos em contagem e são apresentados como intervalo mediano e de 25 a 75 percentis.
Fotomicrografos rep.......
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Discussão
Este protocolo descreve um modelo de roedor da DAI. No DAI, a aceleração rotacional no cérebro causa um efeito de cisalhamento que desencadeia alterações axonais e bioquímicas que levam à perda da função axonal em um processo progressivo. As alterações axonais secundárias são produzidas por uma lesão de estiramento axonal rápida e são variáveis em sua extensão e gravidade4,5,10. Dentro de horas a dias após a lesão primária, alte.......
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Divulgações
Os autores não têm nada para revelar.
Agradecimentos
Os autores reconhecem com gratidão o Dr. Nathan Kleeorin (Departamento de Engenharia Mecânica da Universidade Ben-Gurion do Negev) por sua ajuda com as medidas biomecânicas. Além disso, agradecemos à professora Olena Severynovska, Maryna Kuscheriava, Maksym Kryvonosov, Daryna Yakumenko e Evgenia Goncharyk do Departamento de Fisiologia, Faculdade de Biologia, Ecologia e Medicina, Universidade Oles Honchar Dnipro, Dnipro, Ucrânia por seu apoio e contribuições úteis às nossas discussões.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,01 M citrato de sódio | SIGMA - ALDRICH | ||
| 2,5% soro normal de cavalo | SIGMA - ALDRICH | H0146 | Solução |
| formaldeído tamponada a 4% | |||
| Proteína precursora anti-amilóide, C - anticorpo terminal produzido em coelho | SIGMA - ALDRICH | Lote 056M4867V | |
| biotinilado anticorpo secundário | Vector | BA-1000-1,5 | 10 mM fosfato de sódio, pH 7,8, 0,15 M NaCl, 0,08% azida de sódio, 3 mg/ml de albumina de soro bovino |
| de corte ósseo | |||
| DAB Peroxidase (HRP) Kit de substrato (com níquel), 3,3'-diaminobenzidina | vetor de laboratório | ||
| etanol 99,9 | ROMICAL | Líquido inflamável | |
| guilhotina | |||
| Hematoxilina | SIGMA - ALDRICH | H3136-25G | |
| Solução de peróxido de hidrogênio | Millipore | 88597-100ML-F | |
| Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
| Microscópio Olympus BX 40 | Parafina | ||
| Paraplast | Plus Leica Biosystem | Solução | |
| salina tamponada com fosfato médio para inclusão de tecido (PBS) | SIGMA - ALDRICH | P5368-10PAK | O conteúdo de uma bolsa, quando dissolvido em um litro de água destilada ou deionizada, produzirá solução salina tamponada com fosfato 0,01 M (NaCl 0,138 M; KCl - 0,0027 M); pH 7,4, a 25 ° C. |
| Estreptavidina HRP | ABCAM | ab64269 | Estreptavidina-HRP para uso com anticorpos secundários biotinilados durante IHC / imuno-histoquímica. |
| xileno |
Referências
- Faul, M., Wald, M. M., Xu, L., Coronado, V. G. Traumatic brain injury in the United States; emergency department visits, hospitalizations, and deaths, 2002-2006. US Government. , (2010).
- Taylor, C. A., Bell, J. M., Breiding, M. J., Xu, L. Traumatic Brain Injury-Related Emergency Department Visit....
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Reimpressões e permissões
