Administração Intratraqueal de Formulação de Pó Seco em Camundongos

Resumo

Formulações de pó seco para inalação têm grande potencial no tratamento de doenças respiratórias. Antes de entrar em estudos humanos, é necessário avaliar a eficácia da formulação de pó seco em estudos pré-clínicos. É apresentado um método simples e não invasivo de administração de pó seco em camundongos através da rota intratraqueal.

Resumo

No desenvolvimento de formulações inaláveis de pó seco, é essencial avaliar suas atividades biológicas em modelos animais pré-clínicos. Este artigo introduz um método não invasivo de entrega intratraqueal de formulação de pó seco em camundongos. Um dispositivo de carregamento de pó seco que consiste em uma ponta de pipeta de carregamento de gel de 200 μL conectada a uma seringa de 1 mL através de uma torneira de três vias é apresentado. Uma pequena quantidade de pó seco (1-2 mg) é carregada na ponta da pipeta e dispersada por 0,6 mL de ar na seringa. Como as pontas da pipeta são descartáveis e baratas, diferentes formulações de pó seco podem ser carregadas em diferentes pontas com antecedência. Várias formulações podem ser avaliadas no mesmo experimento animal sem limpeza de dispositivos e recarga de dose, economizando tempo e eliminando o risco de contaminação cruzada do pó residual. A extensão da dispersão do pó pode ser inspecionada pela quantidade de pó restante na ponta da pipeta. Um protocolo de entubação no mouse com uma fonte de luz personalizada e uma cânula orientadora está incluído. A intubação adequada é um dos fatores-chave que influencia a entrega intratraqueal da formulação de pó seco para a região pulmonar profunda do camundongo.

Introdução

A rota pulmonar da administração oferece diversos benefícios na entrega de terapêuticas para ações locais e sistêmicas. Para o tratamento de doenças pulmonares, a alta concentração de medicamentos locais pode ser alcançada por parto pulmonar, reduzindo assim a dose necessária e diminuindo a incidência de efeitos colaterais sistêmicos. Além disso, as atividades enzimáticas relativamente baixas no pulmão podem reduzir o metabolismo de drogas prematuras. Os pulmões também são eficientes para a absorção de medicamentos para ação sistêmica devido à grande e bem perfusada superfície, a camada de célula epitelial extremamente fina e o alto volume sanguíneo em capilares pulmo....

Protocolo

Os experimentos realizados neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Uso de Animais Vivos para Ensino e Pesquisa (CULATR), da Universidade de Hong Kong. Formulações de pó seco preparadas pela secagem de congelamento de spray (SFD) contendo 0,5% do RNA mensageiro da luciferase (mRNA), 5% de peptídeo sintético PEG₁₂KL4 e 94,5% de mannitol (w/w) são utilizadas neste estudo para demonstrar a expressão mRNA no pulmão¹⁶. O diâmetro aerodinâmico médio de massa (MMAD) do pó SFD é de 2,4 μm. Pó de manitol seco (SD) são usados para investigar o efeito do volume de ar usado na dispersão de pó¹⁶. O pó de SD de SD é de 1....

Resultados

Quando um insuflê de pó seco é usado para fornecer aerossol em pó para o pulmão de um animal, o volume de ar utilizado é crítico, pois afeta a segurança, bem como a eficiência de dispersão em pó. Para otimizar o método, foram utilizados diferentes volumes de ar (0,3 mL, 0,6 mL e 1,0 mL) para dispersar o pó seco (1 mg de mannil seco com spray) e o peso dos camundongos foi monitorado por 48 horas após a administração(Figura 6). O uso de 0,3 mL e 0,6 mL de ar não causou perda de peso dos camund.......

Discussão

Neste artigo, são apresentados dispositivos personalizados para insuficiência de pó seco e intubação intratraqueal. Na etapa de carga em pó, o pó seco é carregado em uma ponta de pipeta de carregamento de gel de 200 μL. É importante tocar suavemente a ponta para permitir a embalagem solta de pó na extremidade estreita da ponta. No entanto, se o pó estiver muito apertado, eles ficarão presos na ponta e não poderão ser devidamente dispersos. Recomenda-se neutralizar as cargas estáticas do pó e da ponta da pipeta, a fim de .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
BALB/c camundongo			fêmea; 7-9 semanas de idade; Peso corporal 20-25 g
CleanCap Firefly Luciferase mRNA	TriLink Biotechnology	L-7602
Insuflador de pó seco	PennCentury	Modelo DP-4M
Cetamina 10%	Alfasan International B.V.	Tocha de
	Unilite Internation	PS-K1
Mannitol (Pearlitol 160C)	Roquette	450001
Ponta de pipeta de carregamento de gel redondo sem filtro (200 µ L)	Labcon	1034-800-000
Fio de nylon	Reach	30017050
Seringa de um mililitro sem agulha	Terumo	SS-01T
Fibra óptica	Fibra OMPF1000
Peptídeo PEG12KL4	EZ Biolab		(PEG12) -KLLLLKLLLLLLLLLLLLLLKLLK-NH2
Pipeta de ponta fina Pasteur de plástico	Alpha Labotatories	LW4061
Torneira de três vias	Braun	D201
Xylazine 2%	Alfasan International B.V.	Pistola
Zerostat 3	MILTY	5036694022153

diodo emissor de luz (LED) NA de dados antiestática NA