A retinopatia induzida pelo oxigênio (OIR) pode ser usada para modelar doenças isquêmicas da retina, como a retinopatia da prematuridade e a retinopatia diabética proliferativa e servir de modelo para estudos de prova de conceito na avaliação de drogas antiangiogênicas para doenças neovasculares. O OIR induz a neovascularização robusta e reprodutível na retina que pode ser quantificada.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Modelo de Retinopatia Induzida por Oxigênio para Doenças Isquêmicas da Retina em Roedores
Neste artigo
Resumo
Resumo
Um dos modelos comumente usados para retinopatias isquêmicas é o modelo de retinopatia induzida pelo oxigênio (OIR). Aqui descrevemos protocolos detalhados para a indução do modelo OIR e suas leituras em camundongos e ratos. A neovascularização da retina é induzida em OIR expondo filhotes de roedores à hiperoxia (camundongos) ou a níveis alternados de hiperoxia e hipóxia (ratos). As leituras primárias desses modelos são do tamanho das áreas neovasculares (NV) e avasculares (AVA) na retina. Este modelo in vivo pré-clínico pode ser usado para avaliar a eficácia de potenciais drogas anti-angiogênicas ou para abordar o papel de genes específicos na angiogênese da retina usando animais geneticamente manipulados. O modelo tem alguma variação específica de tensão e fornecedor na indução OIR que deve ser levada em consideração ao projetar os experimentos.
Introdução
Modelos experimentais confiáveis e reprodutíveis são necessários para estudar a patologia por trás de doenças oculares angiogênicas e desenvolver novas terapêuticas para essas doenças devastadoras. A angiogênese patológica é a marca registrada para a degeneração macular relacionada à idade úmida (DM) e para muitas doenças isquêmicas da retina entre elas a retinopatia da prematuridade (ROP), a retinopatia diabética proliferativa (PDR) e a oclusão da veia retinária (RVO)1,2,3,4. As retinas humanas e roedores seguem um padrão de desenvolvimento....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
O protocolo aqui descrito foi aprovado pelo Comitê Nacional de Ética Animal da Finlândia (número de protocolo ESAVI/9520/2020 e ESAVI/6421/04.10.07/2017).
1. Indução experimental de animais e modelo OIR do rato
NOTA: Use animais com acasalamento de tempo, por exemplo, camundongos C57BL/6J comumente usados, para fazer filhotes nascerem no mesmo dia. Utilize barragens de fomento, por exemplo, 129 cepas (129S1/SvImJ ou 129S3/SvIM) para amamentar os filhotes durante e após a indução da hiperoxia. Alternativamente, certifique-se de que há barragens de lactação extras disponíveis no caso de as barragens de enfermagem pre....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
O principal desfecho do modelo é o fenótipo vascular: o tamanho das AVAs e a quantidade de NV. No modelo OIR do camundongo, a vaso-obliteração ocorre na retina central (Figura 2A), enquanto no modelo de rato ele se desenvolve na periferia, ou seja, semelhante ao ROP22 humano (Figura 3A). Isso porque o plexo vascular superficial já se desenvolveu quando os camundongos são expostos à hiperoxia, enquanto no modelo de rato a retina é avascula.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
A gravidade do fenótipo da doença depende tanto da cepa quanto mesmo do fornecedor nos modelos OIR de camundongos e ratos23. Isso sugere que há uma ampla variabilidade genotipa no desenvolvimento da patologia. Em geral, roedores pigmentados desenvolvem fenótipo mais severo do que os albinos. Por exemplo, a vasculatura de retina do albino BALB/c revasculariza-se rapidamente após a hiperoxia e não desenvolve NV em todos os24. Da mesma forma, em ratos, ratos da Noruega Marrom .......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores Maria Vähätupa, PhD, Niina Jääskeläinen, Marc Cerrada-Gimenez, PhD e Rubina Thapa são funcionários da Experimentica Ltd.
O autor Giedrius Kalesnykas, PhD, é um funcionário (Presidente e Diretor Executivo) e acionista da Experimentica Ltd. que oferece serviços de pesquisa de contratos empregando modelos OIR pré-clínicos usados neste artigo.
Tero Järvinen, M.D., PhD, e Hannele Uusitalo-Järvinen, M.D., PhD, não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Agradecemos a Marianne Karlsberg, Anne Mari Haapaniemi, Päivi Partanen e Anne Kankkunen pelo excelente apoio técnico. Este trabalho foi financiado pela Academia da Finlândia, Päivikki e Fundação Sakari Sohlberg, Fundação Tampere Tuberculosis, Fundação Médica Finlandesa, Fundação de Pesquisa do Distrito Hospitalar de Pirkanmaa e o Tampere University Hospital Research Fund.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 33 gauge, Agulha RN de Cubo Pequeno Hamilton | Company | 7803-05, 10mm, 25°, PS4 | Para injeção intravítrea |
| Adobe Photoshop | Adobe Inc. | Para análise de imagem | |
| Bomba de ar air100 | Eheim GmbH & Co. KG. | 143207 | Para anestesia por inalação |
| Unidade de anestesia 410 AP | Univentor Ltd. | 2360309 | Para anestesia por inalação |
| AnalaR NORMAPUR Soda cal VWR | International Ltd | 22666.362 | Para controle de CO2 durante a indução do modelo |
| Attane Vet 1000 mg/g | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 17 05 79 | Para anestesia por inalação |
| Escova | Para preparação de montagens planas | ||
| Gás | Para sacrifício | ||
| Celeris D430 Sistema ERG | Diagnosys LLC | 121 | Para in vivo ERG |
| Placas de cultura de células | Greiner Bio-One International GmbH | 664 160 | Para preparação de montagens planas |
| Cepetor Vet 1 mg/ | mL VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 08 78 96 | Para anestesia |
| Lamínulas | Thermo Fisher Scientific | 15165452 | Para preparação de montagens planas |
| Gabinete InVivo Controlado por O2, Sistema de Filtrarion Aninal e Desumidificador | Coy Laboratory Products | Sistema fechado para indução de modelo de doença, opcional para sistema semi-fechado | |
| E702 Sensor de O2 | BioSphenix, Ltd. | E207, 1801901 | Para medição do nível de oxigênio |
| Tomógrafo de Coerência Óptica de Domínio Espectral Envisu R2200 (SD-OCT) | Bioptigen, Inc. | BPN000668 | Para imagens in vivo |
| Eye spears | Beaver-Visitec International, Inc. | 0008685 | Para injeção intravítrea e imagem in vivo |
| Flexilux 600LL Fonte de luz fria | Mikron | 11140 | Para injeção intravítrea ou coleta de tecidos |
| Sal de sódio fluoresceína | Merck KGaA | F6377-100G | Para imagens in vivo |
| Unidade de exaustão de gás (+Válvula dupla de 3 vias, máscaras faciais de camundongo e rato, filtro UNOsorb) | UNO Roestvaststaal BV | GEX 17015249 | Para anestesia por inalação |
| Seringa de vidro, Modelo 65 RN | Hamilton Company | 7633-01 | Para injeção intravítrea |
| HRA2 Angiógrafo de retina (FA) | Heidelberg Engineering GmbH | Spec-KT-05488 | Para imagem in vivo |
| Isolectina GS-IB4, Alexa Fluor 488 Conjugado | Thermo Fisher Scientific | I21411 | Para rotular a vasculatura retiniana em montagens planas |
| Ketaminol Vet 50 mg/mL | Intervet International B.V. | vnr 51 14 85 | Para anestesia |
| Gás | Para indução de modelos de doenças | ||
| Camundongos C57BL/6JRj | Janvier Labs | Também outras cepas | |
| Lâminas de microscópio | Thermo Fisher Scientific | J1800AMNZ | Para preparação de montagens planas Minims |
| Povidona Iodo 5% (unidade) | Bausch & Lomb U.K Limited | vnr 24 11 304 | Para injeção intravítrea |
| Gás | Para indução de modelo de doença (rato) | ||
| Oftan Chlora 10 mg/g | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 01 11 | Para injeção intravítrea |
| Oftan Metaoksedrin 100 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 43 | Para in vivo ERG |
| Oftan Obucain 4 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 55 03 50 | Para injeção intravítrea |
| Oftan Tropicamida 5 mg/ml | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | vnr 04 12 36 | Para imagens in vivo |
| ProOx Modelo 110 O2 controlador e câmara animal | BioSphenix, Ltd. | 803 | Para indução de modelo de doença, sistema semi-fechado, opcional para sistema fechado |
| ProOx Modelo P360 O2 controlador e câmara animal | BioSphenix, Ltd. | 538 | Para indução de modelo de doença, sistema semi-fechado, opcional para sistema fechado |
| Rats CD(SD) | Charles River Laboratories | Também outras estirpes possíveis | |
| Reversor 5 mg/mL | VET MEDIC ANIMAL HEALTH OY | vnr 13 04 97 | Para reversão da anestesia |
| Gel | Para controlo da humidade durante a indução do modelo | ||
| Systane Ultra 10ml | Alcon | Tamro 2050250 | Para hidratação do olho |
| Systane Ultra unit 0,7ml | Alcon | Tamro 2064871 | Para hidratação do olho |
| Pipeta de transferência | Thermo Fisher Scientific | 1343-9108 | Para preparação de montagens planas |
| VENTI-Line VL 180 PRIME Forno de secagem | VWR | VL180S 170301 | Para secagem de sílica gel |
| VisiScope SZT350 Estereomicroscópio | VWR | 481067 | Para injeção intravítrea ou coleta de tecido |
Referências
- Chase, J. The evolution of retinal vascularization in mammals. A comparison of vascular and avascular retinae. Ophthalmology. 89 (12), 1518-1525 (1982).
- Sun, Y., Smith, L. E. H. Retinal vasculature in development and diseases. Annual Review of....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
