Prever amputação usando células progenitoras mononucleares circulantes locais em pacientes tratados com angioplastia com isquemia de membros críticos

Summary

A amputação de membros inferiores pode ocorrer mesmo após a angioplastia de vasos obstruídos em Isquemia de Membros Críticos (CLI). Células Progenitoras Mononucleares (MPCs) refletem o reparo vascular. O presente protocolo descreve a quantificação de CMS de circulação próxima à angioplastia, e sua relação com disfunção endotelial e previsão de amputação de membros inferiores.

Abstract

Isquemia de membros críticos (CLI) representa um estágio avançado da doença arterial periférica. A angioplastia melhora o fluxo sanguíneo para o membro inferior; no entanto, alguns pacientes irreversivelmente progredir para amputação de membros. A extensão dos danos vasculares e os mecanismos de reparação vascular são fatores que afetam o desfecho pós-angioplastia. As Células Progenitoras Mononucleares (MPCs) são reativas a danos vasculares e reparos, com a capacidade de refletir doenças vasculares. O presente protocolo descreve a quantificação de CMS obtidos a partir da circulação sanguínea de um vaso próximo ao local da angioplastia, bem como sua relação com a disfunção endotelial e sua capacidade preditiva para amputação de membros nos próximos 30 dias após a angioplastia em pacientes com CLI.

Introduction

A Doença Arterial Periférica (PAD) é caracterizada por obstrução vascular crônica e progressiva com limitação do fornecimento de sangue¹. Em escala global, o PAD dos membros inferiores afeta cerca de 10% da população idosa, enquanto até 7% desses casos são submetidos à amputação de membros^2,3.

Isquemia de Membros Críticos (CLI) representa a apresentação mais séria do PAD¹. Os pacientes geralmente sentem dor em repouso, úlceras ou gangrena atribuíveis a artérias ocluídas; enquanto o prognóstico clínico é desfavorável e marcado por um ri....

Protocol

O comitê de ética em pesquisa institucional do Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" issste aprovou este protocolo prospectivo, todos os pacientes inscritos forneceram consentimento por escrito informado.

1. Avaliação de bloco vascular de membro inferior, amostragem de sangue e angioplastia de balão

NOTA: A amostra utilizada para este experimento foi composta por 20 pacientes diabéticos, com idade entre 68 anos e 10 em 20 homens. Metade da amostra era de fumantes e as co-morbidades mais prevalentes eram diabetes mellitus tipo 2, hipertensão arterial sistêmica e/ou dislipidemia. A amostra destinava-se a ser padro....

Results

Amostras de sangue de artérias bloqueadas, no local abordado para angioplastia, foram coletadas de 20 pacientes diabéticos, com idade entre 68 anos e 10 em 20 homens. Metade da população amostral era fumante. As lesões vasculares foram pontuadas principalmente como Rutherford classe VI; enquanto os pacientes apresentaram maior prevalência de Diabetes Mellitus tipo 2 (100%), hipertensão (70%) e dislipidemia (55%).

Um acompanhamento clínico de 30 dias após a angioplastia dos membros inferiores f.......

Discussion

A coleta de sangue no local exato do bloco vascular pode apresentar dificuldades técnicas; por isso, realizamos coleta de sangue nas proximidades do bloco vascular. Da mesma forma, a quantidade de MPCs próximos à placa vascular parece ser altamente dinâmica e pode originar variações antes e depois da angioplastia. De acordo com nossas observações, recomenda-se avaliar as alterações de linha de base e 30min pós-angioplastia no número de MPCs, uma vez que podem refletir diversos processos fisiofisiológicos que ocorrem dent.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A BSA	Roche	10735086001	a albumina de soro bovino (BSA) como agente tampão, estabilizador, padrão e para mistura.
Grânulos de calibração	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	Os grânulos de calibração MACQuant são fornecidos em solução aquosa contendo 0,05% de azida sódica. 3,5 ml para até 100 testes
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Anticorpo conjugado à R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonal, IgG1 humano recombinante de isotipo, CD309 conjugado
(VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Anticorpo conjugado a R-Ficoeritrina em tampão PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	O clone de anticorpo monoclonal AC136 detecta um epítopo de classe III do CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Anticorpo CD45 monoclonal,
tubos cônicos	Thermo SCIENTIFIC	#339651	Tubos de centrífuga cônicos de 15ml
Tubos de citometria	FALCON Corning Marca	#352052	Tubo de fundo redondo de poliestireno de 5 mL. Estilo 12x75. Estéril.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Metais pesados, (como Pb) < 10ppm, Fe< 0,01%, As< 1ppm, Insolúveis< 0,005%
Neubauer melhorado	Sem marca	Sem número de catálogo	Hemocitômetro para contagem de células. (faixa 0,1000 mm, 0,0025 mm2)
Tubos de coleta de sangue K2 EDTA	BD Vacutainer	#367863	Tubo vacutainer de plástico lilás (K2E) 10,8mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Estéril e verificado quanto à presença de endotoxinas. Densidade: 1.077± 0,001g/mL
Paraformaldeído	SIGMA-ALDRICH		Fixação de amostras biológicas, (pó, 95%)Transferência de
pipeta 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	A pipeta de transferência é uma ferramenta que facilita a transferência de líquidos com maior precisão.
Tubos de ensaio	KIMBLE CHASE	45060 13100	Tubos de ensaio resistentes ao calor. TAMANHO/TAMPA 13 x 100 mm