Acessando a Citotoxicidade e a Resposta Celular a Biomateriais

Anabela  Baptista Paula; Mafalda Laranjo; Ana Sofia Coelho; Ana Margarida Abrantes; Ana  Cristina Gonçalves; Ana  Bela Sarmento-Ribeiro; Manuel  Marques Ferreira; Maria  Filomena Botelho; Carlos  Miguel Marto; Eunice Carrilho

doi:10.3791/61512

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Artigo de método

Acessando a Citotoxicidade e a Resposta Celular a Biomateriais

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DOI:

10.3791/61512

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8 de julho de 2021

Anabela Baptista Paula^*¹^,²^,³^,⁴ , Mafalda Laranjo^*²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Sofia Coelho¹^,²^,³^,⁴ , Ana Margarida Abrantes²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Cristina Gonçalves²^,³^,⁴^,⁶ , Ana Bela Sarmento-Ribeiro²^,³^,⁴^,⁶ , Manuel Marques Ferreira²^,³^,⁴^,⁷ , Maria Filomena Botelho²^,³^,⁴^,⁵ , Carlos Miguel Marto¹^,²^,³^,⁴^,⁸ , Eunice Carrilho¹^,²^,³^,⁴

¹Institute of Integrated Clinical Practice, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ²Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR) area of Environment Genetics and Oncobiology (CIMAGO), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ³Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁴Clinical Academic Center of Coimbra, CACC, Portugal, ⁵Institute of Biophysics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁶Laboratory of Oncobiology and Hematology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁷Institute of Endodontics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁸Institute of Experimental Pathology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal

^* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Esta metodologia visa avaliar a citotoxicidade de biomateriais através da preparação de extratos solúveis, utilizando ensaios de viabilidade e análise fenotípica, incluindo citometria de fluxo, RT-PCR, imunocitoquímica e outras técnicas de biologia celular e molecular.

Resumo

Os biomateriais entram em contato direto ou indireto com os tecidos humanos, tornando importante avaliar sua citotoxicidade. Essa avaliação pode ser realizada por diversos métodos, mas existe uma grande discrepância entre as abordagens utilizadas, comprometendo a reprodutibilidade e a comparação entre os resultados obtidos. Neste trabalho, propomos um protocolo para avaliar a citotoxicidade de biomateriais utilizando extratos solúveis, que utilizamos para biomateriais odontológicos. O preparo dos extratos é detalhado, desde a produção dos pellets até sua extração em meio de cultura. A avaliação da citotoxicidade dos biomateriais é baseada na atividade metabólica pelo ensaio de MTT, viabilidade celular pelo ensaio de Sulforhodamina B (SBR), perfil de morte celular por citometria de fluxo e morfologia celular por May-Grünwald Giemsa. Além da avaliação da citotoxicidade, um protocolo para avaliar a função celular é descrito com base na expressão de marcadores específicos avaliados por imunocitoquímica e PCR. Este protocolo fornece um guia abrangente para avaliação da citotoxicidade de biomateriais e efeitos celulares, utilizando a metodologia de extratos, de forma reprodutível e robusta.

Introdução

A biocompatibilidade pode ser definida como a capacidade de um material integrar tecidos e induzir uma resposta terapêutica favorável, livre de danos locais e sistêmicos ^1,2,3. A avaliação da biocompatibilidade é crucial para o desenvolvimento de qualquer material destinado a uso médico. Portanto, este protocolo fornece uma abordagem sistemática e abrangente para todo pesquisador com o objetivo de desenvolver novos biomateriais ou estudar novas aplicações para biomateriais existentes.

Testes de citotoxicidade in vitro são amplamente utilizados como....