Alavancando a Turbidez e a Tromboelastografia para Caracterização Complementar do Coágulo

Resumo

A fibrina é responsável pela formação de coágulos durante a hemostasia e trombose. Ensaios de turbidez e tromboelastograhy (TEG) podem ser utilizados como ferramentas sinérgicas que fornecem avaliação complementar de um coágulo. Essas duas técnicas juntas podem dar mais informações sobre como as condições de coagulação afetam a formação de coágulos fibrinas.

Resumo

A trombose é a principal causa de morte em todo o mundo. Fibrin(ogen) é a proteína principal responsável pela formação de coágulos ou trombose. Portanto, caracterizar a formação de coágulos fibrinas é benéfico para o estudo da trombose. A turbidez e a tromboelastografia (TEG) são ambos ensaios in vitro amplamente utilizados para monitorar a formação de coágulos. A turbidez mede dinamicamente a transmissão da luz através de uma estrutura de coágulos de fibrina através de um espectrômetro e é frequentemente usada em laboratórios de pesquisa. O TEG é uma técnica viscoelástica especializada que mede diretamente a força do coágulo sanguíneo e é utilizada principalmente em ambientes clínicos para avaliar a hemostasia dos pacientes. Com a ajuda dessas duas ferramentas, este estudo descreve um método para caracterizar um coágulo de fibrina in vitro usando um modelo simplificado de coágulo fibrinogênio/trombina. As tendências de dados em ambas as técnicas foram comparadas em várias condições de coagulação. Os coágulos de fibrina humana e bovina foram formados lado a lado neste estudo, pois os fatores de coagulação bovina são frequentemente usados como substitutos de fatores de coagulação humana em ambientes clínicos e de pesquisa. Os resultados demonstram que o TEG e a turbidez acompanham a formação do coágulo por meio de dois métodos distintos e, quando utilizados em conjunto, fornecem informações estruturais complementares de resistência ao coágulo e fibras em diversas condições de coagulação.

Introdução

Trombose é a formação patológica de um coágulo sanguíneo no corpo que bloqueia a circulação sanguínea levando à alta morbidade e mortalidade em todo o mundo. Há 1 a 2 casos de tromboembolismo venoso e 2 a 3 casos de doenças vasculares induzidas por trombose por 1000 pessoas anualmente^1,,2. Apresentado aqui é um método que aproveita a tromboelastografia (TEG) e a turbidez para monitorar a formação de coágulos em várias condições de coagulação. Fibrin(ogen) é a proteína primária responsável pela formação de coágulos no corpo. Nas etapas finais da cascata de coagulação, as fibrinopeptídeos são cortadas do fibrino....

Protocolo

1. Preparação de soro fisiológico tampão fosfato (PBS)

NOTA: A PBS foi utilizada ao longo deste estudo, pois os ensaios descritos não necessitaram da adição de cálcio. É importante notar que ao adicionar cálcio, muitas vezes utilizado para recalcar produtos sanguíneos avaliados, a PBS deve ser evitada, pois o cálcio é conhecido por precipitar em tampões fosfatos.

1. Faça um tampão de 0,01 M, pH 7.4 PBS misturando cloreto de sódio de 137 mM, 1,8 mM de fosfato de potássio monobásico, 10 mM de fosfato de sódio dibasic e 2,7 mM de cloreto de potássio em água DI.
2. Verifique o pH tampão usando uma sonda de pH e ajuste o pH usando ....

Resultados

Os experimentos mostrados na Figura 1 são curvas representativas de rastreamento de turbidez de coágulos fibrinas humanos e bovinos em diferentes níveis de fibrinogênio. As curvas de rastreamento TEG representativas para formação de coágulos de fibrina em diferentes níveis de fibrinogênio são mostradas na Figura 2. Ambas as curvas de rastreamento demonstram que após um período de atraso após a iniciação do coágulo, a turbidez do coágulo ou a amplitude do coágulo.......

Discussão

Este protocolo demonstra a utilização de duas ferramentas distintas de caracterização de coágulos testando um modelo simplificado de coágulo fibrinogênio/trombina usando componentes disponíveis comercialmente. Tanto os ensaios teg quanto de turbidez são fáceis de conduzir. Eles não só fornecem exames de coágulos de ponto final, como a formação de coágulos max (Turb^Max e TEG^Max) e os tempos de formação de coágulos (Turb^Time e TEG^Time), mas também avaliam o processo dinâmico de f.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Microplaca de Fundo Plano Transparente com 96 Poços Corning		3635	Copolímero acrílico não tratado, albumina não estéril
de soro humano	Millipore Sigma	A1653	≥ 96%, pó liofilizado
Sistema de Água Ultrapura Arium Mini Plus	Sartorius	NA	DI Fonte de água
Albumina de soro bovino	Millipore Sigma	A2153	≥ 96%, pó liofilizado
Copos e Pinos Descartáveis para TEG 5000 (Transparente)	Haemonetics	REF 6211
Fibrinogênio, Plasma Bovino	Millipore Sigma	341573	Contém mais de 95% de proteína coagulável
Fibrinogênio, Depletado de Plasmingogênio, Plasma Humano	Millipore Sigma	341578	Contém ≥ 95% de proteínas coaguláveis.
Solução salina tamponada com fosfato	Millipore Sigma	P3813	em pó, pH 7.4, para preparar soluções de 1 L
Cloreto de potássio	Millipore Sigma	60130	≥ 99,5% de pureza
Fosfato de potássio monobásico	Millipore Sigma	P9791	≥ Medidor de pH SevenEasy de 98% de pureza
	Mettler Toledo	S20
Cloreto de sódio	Millipore Sigma	71378	≥ 99,5% de pureza
Fosfato de sódio dibásico	Millipore Sigma	71636	≥ Sistema
de leitura de microplacas multidetecção SpectraMax M5	Dispositivos moleculares	M5
TEG 5000 Sistema analisador de hemostasia de trombelastograma	Haemonetics	07-022
Trombina,	Millipore Sigma	bovino 605157
Trombina, Plasma Humano,	Millipore Sigma	de

Fonte de Água com 99,5% de pureza alta atividade 605195