As células-hastes são continuamente investigadas como tratamentos potenciais para indivíduos com danos do miocárdio, no entanto, sua diminuição da viabilidade e retenção dentro do tecido lesionado pode afetar sua eficácia a longo prazo. Neste manuscrito descrevemos um método alternativo para a entrega de células-tronco em um modelo murino de lesão de reperfusão de isquemia.
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Artigo de método
Entrega intramiocárdica atrasada de células-tronco após lesão de reperfusão de Isquemia em um modelo murino
Neste artigo
Resumo
Resumo
Há um interesse significativo no uso de células-tronco (SCs) para a recuperação da função cardíaca em indivíduos com lesões do miocárdio. Mais comumente, a terapia de células-tronco cardíacas é estudada através do parto de SCs simultaneamente com a indução de lesão miocárdia. No entanto, essa abordagem apresenta duas limitações significativas: o ambiente isquêmico pró-inflamatório hostil precoce pode afetar a sobrevivência de SCs transplantadas, e não representa o cenário de infarto subagutado onde as SCs provavelmente serão utilizadas. Aqui descrevemos uma série de dois procedimentos cirúrgicos para a indução de lesão de isquemia-reperfusão e entrega de células-tronco mesenquimais (MSCs). Este método de administração de células-tronco pode permitir a maior viabilidade e retenção em torno do tecido danificado, contornando a resposta imune inicial. Um modelo de lesão de reperfusão de isquemia foi induzido em camundongos acompanhados da entrega de células-tronco mesenquimais (3,0 x 105), expressando com estoquá-lo sob o promotor de CMV expresso constitutivamente, intramiocardialmente 7 dias depois. Os animais foram imagens por ultrassom e bioluminescente para confirmação de lesão e injeção de células, respectivamente. É importante ressaltar que não houve taxa adicional de complicação ao realizar essa abordagem de dois procedimentos para o parto em SC. Este método de administração de células-tronco, coletivamente com a utilização de genes repórteres de última geração, pode permitir o estudo in vivo de viabilidade e retenção de SCs transplantados em uma situação de isquemia crônica comumente vista clinicamente, ao mesmo tempo em que contorna a resposta inicial pró-inflamatória. Em resumo, estabelecemos um protocolo para a entrega atrasada de células-tronco no miocárdio, que pode ser usado como uma nova abordagem potencial na promoção da regeneração do tecido danificado.
Introdução
As doenças cardiovasculares continuam sendo a causa mais comum de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Eventos isquêmicos cardíacos têm sido prejudiciais para a função geral do miocárdio e células circundantes1. Apenas 0,45-1,0% dos cardiomiócitos se regenerarão a cada ano após a ocorrência de danos no miocárdio2. Apesar da crescente demanda e do foco inerente no desenvolvimento de tratamentos, as terapias que auxiliam na regeneração do tecido lesionado têm sido difíceis de estabelecer e ainda requerem maior otimização3,4,5.....
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Protocolo
Os experimentos foram realizados em camundongos C57BL/6 femininos, idade de 10-12 semanas e 20-25 g de peso corporal. Todos os procedimentos animais cumpriram as normas indicadas no Guia de Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (Institute of Laboratory Animal Resources, National Academy of Sciences, Bethesda, MD, USA) e foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso Institucional de Animais (IACUC) da Mayo Clinic College of Medicine.
1. Preparação e entubação
- Autoclave todos os instrumentos cirúrgicos antes da cirurgia. Se várias cirurgias forem realizadas em uma sessão, limpe os instrumentos após cada animal e r....
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Resultados
A lesão de reperfusão de isquemia foi induzida em camundongos no dia 0, seguida de um ecocardiograma pós-operatório e eletrocardiograma no dia anterior à implantação de células-tronco. A análise de ultrassom e eletrocardiograma confirmou o infarto e diminuiu a função contratil ventricular(Figura 1A-D). Um exame mais aprofundado dos dados mostrou que a fração de ejeção e o encurtamento fracionado foram diminuídos em camundongos que receberam lesão isquêmica, enquanto os volum.......
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Discussão
Mais de 85 milhões de pessoas em todo o mundo são afetadas por doenças cardiovasculares3. A alta prevalência desses eventos isquêmicos garante o desenvolvimento e a expansão de terapias alternativas para promover a regeneração do tecido danificado. Os métodos tradicionais utilizam o procedimento de reperfusão da isquemia em um ambiente agudo com posterior administração terapêutica1. As reações inflamatórias estão no seu auge entre 3 e 4 dias após um evento isquêmico cardíac.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,9% de irrigação de NaCl, USP | Baxter | 0338-0048-04 | |
| Campo cirúrgico Press n' Seal de 11x12", autoclavável | IV SAI Infusion Technologies | PSS-SD | |
| 24G 3/4" | Jelco | 4053 | |
| 28G x 1/2" 1mL seringa de alergia | BD | 305500 | Injeção de seringa de insulina analgésica |
| 30G x 1/2" 3/10cc | Ulticare | 08222.0933.56 | Injeção de células-tronco |
| 6-0 S-29, sutura Vicryl de 12" | Ethicon | J556G | Fechamento de incisão intercostal, superficial muscular e da camada de pele |
| 9-0 BV100-4, sutura de Ethilon de 5" | Ethicon | 2829G | Ligadura da artéria LAD |
| Absorvente underpad | Thermo Fischer Scientific | 14-206-64 | Para debaixo do animal |
| Almofadas de preparação de álcool, 2 camadas, médio | Máscara facial antiembaçante Coviden | 6818 | |
| Halyard | 49235 | ||
| Bonn Tesoura de estrabismo, curva, sem corte | Ferramentas de Ciência Fina | 14085-09 | |
| Buprenorfina HCL SR LAB 1mg/ml, 5 ml | ZooPharm Pharmacy | Analgésico narcótico de buprenorfina formulado em um polímero que retarda a absorção, prolongando a duração da ação (72 horas de duração de atividade). | |
| Porta-agulhas Castroviejo, curvado | Ferramentas de Belas Ciências | 12061-01 | |
| Esponjas de gaze estéril Curity | Coviden | 397310 | |
| Pinça de amarração de sutura delicada, 45 ângulos dobrados | Ferramentas de Belas Ciências | 11063-07 | |
| Barbeador Elétrico | Wahl | Remoção | |
| Pele Isoflurano 100 ml | Anestésico | Cardinal Health | PI23238 |
| Jaleco | |||
| Monoject 1 mL seringa hipodérmica | Coviden | 8881501400 | |
| pinça de íris Moria, curva, serrilhada (x2) | Fine Science Tools | 11370-31 | |
| Moria speculum retractor | Fine Science Tools | 17370-53 | |
| Kit de intubação endotraqueal de camundongo | Kent Scientific | ||
| Nair creme depilatório | Johnson & | Remoção de pele | |
| Optixcare lubrificante ocular mais | ocular estéril | Aventix | |
| Ventilador Physiosuite Tubulação | PolyE da Kent Scientific | ||
| Harvard Apparatus | 72-0191 | Compressão temporária da artéria LAD | |
| Cotonetes de iodopovidona | PDI | S41125 | |
| Bisturi, 10 lâminas | Bard-Parker | 371610 | |
| Aplicadores estéreis com ponta de algodão de 3" | Cardinal Health | C15055-003 | |
| Aplicadores estéreis de ponta de algodão cônico de 6" | Puritan | 25-826-5WC | |
| Luvas estéreis | Bolsas de esterilização Cardinal Health | N8830 | |
| Touca | |||
| Microscópio cirúrgico | Leica | M125 | |
| Pinça de amarração de sutura, reta (x2) | Fine Science Tools | 10825-10 | |
| Transpore fita cirúrgica | 3M | 1527-1 | |
| Pomada antibiótica tripla | G & W Laboratories | 11-2683ILNC2 | Aplicação tópica para prevenir infecção |
| Vannas-Tü Tesoura da mola do bingen, vaporizador fino curvado | ferramentas | 15004-08 | |
| fina |
Referências
- Franchi, F., et al. The Myocardial Microenvironment Modulates the Biology of Transplanted Mesenchymal Stem Cells. Molecular Imaging Biology. , (2020).
- Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science. 324 (5923), 98-....
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Reimpressões e permissões
