A fotoimunoterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é uma estratégia terapêutica emergente do câncer que utiliza um conjugado de anticorpos fotoabsorto (IR700Dye) e luz NIR para destruir células cancerosas. Aqui, apresentamos um método para avaliar o efeito antitumoral do NIR-PIT em um modelo de camundongo de câncer de pulmão disseminado pleural e mesotelioma pleural maligno usando bioluminescência por imagem.
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Artigo de método
Fotoimunoterapia infravermelha próxima para modelos de mouse de disseminação pleural
Neste artigo
Resumo
Resumo
A eficácia da fotoimmunoterapia pode ser avaliada com mais precisão com um modelo de rato ortotópico do que com um subcutâneo. Um modelo de disseminação pleural pode ser utilizado para a avaliação de métodos de tratamento para doenças intratorácicas, como câncer de pulmão ou mesotelioma pleural maligno.
A fotoimuneterapia quase infravermelha (NIR-PIT) é uma estratégia de tratamento de câncer recentemente desenvolvida que combina a especificidade dos anticorpos alvo de tumores com toxicidade causada por um fotoabsorto (IR700Dye) após a exposição à luz NIR. A eficácia do NIR-PIT tem sido relatada usando vários anticorpos; no entanto, apenas alguns relatórios mostraram o efeito terapêutico dessa estratégia em um modelo ortotópico. No presente estudo, demonstramos um exemplo de avaliação da eficácia do modelo de câncer de pulmão disseminado pleural, que foi tratado utilizando NIR-PIT.
Introdução
O câncer continua sendo uma das principais causas de mortalidade, apesar de décadas de pesquisa. Uma das razões é que a radioterapia e a quimioterapia são técnicas altamente invasivas, o que pode limitar seus benefícios terapêuticos. Terapias de alvo celular ou molecular, que são técnicas menos invasivas, estão recebendo maior atenção. Fotoimmunoterapia é um método de tratamento que aumenta sinérgicamente o efeito terapêutico combinando imunoterapia e fototerapia. A imunoterapia aumenta a imunidade tumoral aumentando a imunogenicidade do microambiente tumoral e reduzindo a supressão imunoregulatória, resultando na destruição de tumores no corpo. A fototerapia destrói ....
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Protocolo
Todos os experimentos in vivo foram realizados em conformidade com o Guia de Cuidado e Uso de Recursos Laboratoriais de Animais do Comitê de Cuidados e Uso animal da Universidade de Nagoya (aprovação nº 2017-29438, #2018-30096, #2019-31234, #2020-20104). Camundongos nus homozigotos de seis semanas foram comprados e mantidos no Centro Animal da Universidade de Nagoya. Ao realizar o procedimento em camundongos, foram anestesiados com isoflurane (introdução: 4-5%, manutenção 2-3%); a pata foi pressionada com pinças para confirmar a profundidade da anestesia.
1. Conjugação de IR700 com mAb
- Incubar mAb (1 mg, ....
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Resultados
Anticorpo anti-podoplanina NZ-1 foi conjugado com IR700 para gerar NZ-1-IR700. Confirmamos a vinculação de NZ-1 e IR700 em um SDS-PAGE(Figura 8). A luciferase-expressing H2373 (H2373-luc) foi preparada por células de mesotelioma malignas transfecionantes (H2373) com um gene luciferase10.
Nós anestesiamos camundongos nus homozigote atímicos de 8-12 semanas de idade e injetamos 1 × 10 células H2373-luc na cavidade torácica. O dia d.......
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Discussão
Neste estudo, demonstramos um método de medição do efeito terapêutico do NIR-PIT no modelo de disseminação pleural do MPM. A matança celular altamente seletiva foi realizada com NIR-PIT; assim, o tecido normal quase não foi danificado23,24,25. Com este tipo de matança celular seletiva, o NIR-PIT demonstrou ser seguro nos modelos disseminados9,2.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,25 w / v% Tripsina-1mmol / l EDTA 4Na Solução com Fenol Vermelho | Wako | 209-016941 | para cultura de células |
| Seringa de 1 mL | TERUMO | SS-01T | para experimento em camundongos |
| Agulha 30G | Nipro | 1907613 | para experimento em camundongos |
| BALB/cSlc-nu/nu | Japão SLC | ||
| Kit de coloração azul colidal | Invitrogen | LC6025 | uso para coloração de proteína em gel |
| Coomassie (bradford) Plus ensaio de proteína | Thermo Fisher Scientific Inc (Waltham, MA, EUA) | PI-23200 | para medir a concentração de APC |
| Dimetilsulfóxido (DMSO) | Wako | 043-07216 | uso para conjugação de IR700 |
| D-Luciferina (sal de potássio) | Cayman Chemical | 14681 | para imagens de bioluminescência e DLIT |
| GraphPad Prism7 | Software GraphPad | para análise estatística | |
| imagem bioluminescente e DLIT | |||
| Living Image | PerkinElmer | para análise de imagem bioluminescente e DLIT | |
| Na2HPO4 | SIGMA-ALDRICH (St. Louis, MO, EUA) | S9763 | uso para conjugação de IR700 |
| NIR Laser | Changchun New Industries Optoelectronics Technology | MRL-III-690R | para irradiação NIR |
| Novex WedgeWell 4 a 20%, Tris-Glicina, 1,0 mm, Mini Gel de Proteína, 12 poços | Invitrogen | XP04202BOX | uso para SDS-PAGE |
| NuPAGE LDS Sample Buffer (x4) | Invitrogen | NP0007 | uso para SDS-PAGE |
| Medidor de potência óptica | Thorlabs (Newton, NJ, EUA) | PM100 | para medir a saída do laser NIR |
| PBS(-) | Wako | 166-23555 | |
| Sistema de imagem Pearl Trilogy | Li-Cor Biosciences | para captura de imagem fluorecente de 700 nm | |
| Solução de penicilina-estreptomicina (x100) | Wako | 168-23191 | para cultura de células |
| Cloridrato de puromicina | ThermoFisher | A1113803 | para transfecção de luciferase |
| RediFect Red-Fluc-Puromycin Lentiviral Prticles | PerkinElmer | CLS960002 | para transfecção de luciferase |
| RPMI-1640 com L-glutamina e Vermelho de Fenol | Wako | 189-02025 | para cultura de células |
| Sephadex G25 column (PD-10) | GE Healthcare (Piscataway, NJ, EUA) | 17-0851-01 | uso para conjugação de IR700 |
| UV-1900i | Shimadzu | para medir a concentração de APC |
Referências
- Xu, X., Lu, H., Lee, R. Near Infrared Light Triggered Photo/Immuno-Therapy Toward Cancers. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 8, (2020).
- Mitsunaga, M., et al. Cancer cell-selective in vivo near....
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Reimpressões e permissões
