Este protocolo introduz um método para desenvolver um andaime usando rins descelularizados. O protocolo inclui processos de descelularização e recelularização para confirmar a biodisponibilidade. A descelularização é realizada utilizando-se triton X-100 e sulfato de dodecyl de sódio.
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Artigo de método
Preparação de andaimes renais descelularizados em ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Engenharia de tecidos é uma disciplina de ponta na biomedicina. Técnicas de cultura celular podem ser aplicadas para a regeneração de tecidos e órgãos funcionais para substituir órgãos doentes ou danificados. Andaimes são necessários para facilitar a geração de órgãos ou tecidos tridimensionais usando células-tronco diferenciadas in vivo. Neste relatório, descrevemos um novo método para o desenvolvimento de andaimes vascularizados usando rins descelularizados. Os ratos Sprague-Dawley de oito semanas de idade foram usados neste estudo, e a heparina foi injetada no coração para facilitar o fluxo para os vasos renais, permitindo que a heparina perfunde para os vasos renais. A cavidade abdominal foi aberta, e o rim esquerdo foi coletado. Os rins coletados foram perfundidos por 9h usando detergentes, como Tritão X-100 e sulfato de dodecyl de sódio, para descelularizar o tecido. Os andaimes renais descelularizados foram então lavados suavemente com penicilina/estreptomicina de 1% e heparina para remover detritos celulares e resíduos químicos. Espera-se que o transplante de células-tronco com os andaimes vasculares descelularizados facilite a geração de novos órgãos. Assim, os andaimes vascularizados podem fornecer uma base para a engenharia tecidual dos enxertos de órgãos no futuro.
Introdução
Técnicas de cultura celular são aplicadas para a regeneração de tecidos e órgãos funcionais para substituir órgãos doentes ou danificados. O transplante de órgãos aogênicos é atualmente o tratamento mais comum para danos irreversíveis aos órgãos; no entanto, essa abordagem requer o uso de imunossupressão para evitar a rejeição do órgão transplantado. Além disso, apesar dos avanços na imunologia do transplante, 20% dos transplantados podem sofrer rejeição aguda dentro de 5 anos, e dentro de 10 anos após o transplante, 40% dos receptores podem perder o enxerto transplantado ou morrer1.
Os avanços nas tecnologias de eng....
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Protocolo
Este estudo foi aprovado pela administração da Universidade Nacional de Medicina de Pusan e foi conduzido de acordo com diretrizes éticas para o uso e cuidado dos animais. (certificado nº 2017-119). Antes de qualquer estudo em animais, deve-se obter aprovação institucional.
NOTA: Todos os instrumentos/equipamentos cirúrgicos e anestésicos recomendados para apresentação cirúrgica bem sucedida e imagem de órgãos abdominais estão detalhados na Tabela 1.
1. Procedimentos de preparação para a colheita de rins de rato
- Em preparação para a cirurgia, coloque ratos Sprague-Dawley de 8 semanas de idade (pesando 200-250 g....
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Resultados
A morfologia bruta dos rins de rato era vermelho escuro(Figura 1A). Após a descelularização, o rim ficou pálido e translúcido(Figura 1D). O DNA genômico residual foi avaliado com um kit comercial de acordo com as instruções do fabricante, em andaimes renais descelularizados e comparado com o dos rins nativos (controle). A análise quantitativa confirmou que o DNA genômico tecidual foi quase eliminado após a descelularização. De 14 casos, o conteúdo médio de DNA f.......
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Discussão
Vários protocolos têm sido utilizados para a descelularização de órgãos e outros tecidos. O protocolo ideal de descelularização deve preservar a arquitetura tridimensional da matriz extracelular (ECM). Em geral, tais protocolos consistem em lise da membrana celular por meio de processamento físico ou soluções iônicas, dissociando o citoplasma e o núcleo do ECM por processamento enzimático ou detergentes, e, em seguida, removendo detritos celulares do tecido3. Os processos físicos incluem raspagem,.......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse para divulgar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado por uma bolsa do Instituto de Pesquisa Biomédica do Hospital Nacional universitário de Pusan.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringa de 1 cc (injetar sondas e soluções de veículos | Becton Dickinson | 305217 | |
| 10-0 ethilon para anastomose de vaso | Agulha | Ethicon 9032G | |
| 25 gauge (para cateteres vasculares) | Becton Dickinson | 305145 | |
| 3-0 PDS rato de fechamento de incisão | Ethicon | Z316H | |
| 3-0 Prolene fechamento de incisão rato | Ethicon | 8832H | |
| 3-0 carretel de seda acesso vascular / ligadura em rato | Braintree Scientific | SUT-S 110 | |
| 4-0 PDS fechamento de incisão camundongo | Ethicon | Z773D | |
| 4-0 Fechamento de incisão Prolene camundongo | Ethicon | 8831H | |
| 5-0 carretel de seda acesso vascular / ligadura em camundongo | Braintree Scientific | SUT-S 106 | |
| Tesoura fina para cortar fáscia/tecido conjuntivo | Fine Science Tools | 14058-09 | |
| Porta-agulha Halsey | Fine Science Tools | 12001-13 | |
| Kelly Hemostat para ratos: grampo muscular para minimizar o sangramento quando cortado | Fine Science Tools | 13018-14 | |
| Polyethelyne 50 tubo, tubo de cateter 100 ft | Braintree | Scientific.023" &vezes; .038" | |
| Braçadeiras vasculares Schwartz microserrefine | Ferramentas de Belas Ciências | 18052-01 (reta) | |
| 18052-03 (curva) | |||
| Tesoura cirúrgica para cortar a pele | Ferramentas de Belas Ciências | 14002-12 | |
| Tesoura de mola Vannas-Tubingen para arteriotomia | Ferramentas de Belas Ciências | 15003-08 |
Referências
- Kawai, T., et al. Brief report: HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. New England Journal of Medicine. 358 (4), 353-361 (2008).
- Rana, D., Zreiqat, H., Benkirane-Jessel, N., Ramakrishna, S., Ramalingam, M.
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Reimpressões e permissões
