Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

Resumo

Pancreatite crônica (PC) é uma doença caracterizada por inflamação e fibrose do pâncreas, frequentemente associada a dor abdominal intratável. Este artigo se concentra na refinação da técnica para gerar um modelo de camundongo de CP via infusão de ducto biliar com ácido sulfônico de 2,4,6 -trinitrobenzene (TNBS).

Resumo

Pancreatite crônica (PC) é uma doença complexa que envolve inflamação pancreática e fibrose, atrofia glandular, dor abdominal e outros sintomas. Vários modelos de roedores foram desenvolvidos para estudar CP, dos quais o ducto biliar 2,4,6 -trinitrobenzeno modelo de infusão de ácido sulfônico (TNBS) replica as características da dor neuropática vista em CP. No entanto, a infusão de drogas de ducto biliar em camundongos é tecnicamente desafiadora. Este protocolo demonstra o procedimento de infusão tnbs do ducto biliar para a geração de um modelo de mouse CP. TNBS foi infundido no pâncreas através da ampola de Vater no duodeno. Este protocolo otimizeu o volume de medicamentos, técnicas cirúrgicas e o manuseio de drogas durante o procedimento. Os camundongos tratados com TNBS apresentaram características de CP refletidas por reduções de peso corporal e pâncreas, alterações nos comportamentos associados à dor e morfologia pancreática anormal. Com essas melhorias, a mortalidade associada à injeção de TNBS foi mínima. Este procedimento não é apenas crítico na geração de modelos de doenças pancreáticas, mas também é útil na entrega de medicamentos pancreáticos locais.

Introdução

Pancreatite crônica (PC) é uma doença inflamatória crônica caracterizada pela atrofia do pâncreas, fibrose, dor abdominal e eventual perda das funções exócrina e endócrina¹. Os tratamentos médicos e cirúrgicos atuais não são curativos, mas são realizados para aliviar sintomas que são consequência da doença: dor abdominal refratária, disfunção endócrina e exócrina. Portanto, tratamentos mais eficazes são urgentemente necessários². Os modelos animais fornecem uma ferramenta essencial para desenvolver uma melhor compreensão da doença e investigar possíveis terapêuticas³. Vários modelos de mouse para ....

Protocolo

Todos os procedimentos foram conduzidos com a aprovação dos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica da Carolina do Sul e do Ralph H. Johnson Medical Center. Neste estudo, foram utilizados camundongos machos C57BL/6J entre 8 e 10 semanas de idade. Os camundongos estavam alojados sob um ciclo escuro padrão de 12 luz/12 com litbitumaccess ad libitumaccess à comida e à água.

1. Preparação da solução TNBS para injeção

1. Prepare 10% de etanol em 0,9% salina. Dissolver o estoque TNBS (ver Tabela de Materiais) em 10% de etanol para uma concentração final de 7,5 mM adicionando 7,5 μL de TNB....

Resultados

Os procedimentos de infusão do ducto biliar foram otimizados para reduzir a mortalidade do camundongo associada a este procedimento¹⁰. O TNBS foi dado pela primeira vez em um volume total de 35 μL ou 50 μL. A injeção de TNBS em um volume de 50 μL poderia atingir todo o pâncreas e induzir um fenótipo de doença mais homogêneo(Figura 1B). Além disso, a injeção de TNBS usando seringa de insulina com agulha 31G poderia controlar melhor a velocidade de infusão em relação às.......

Discussão

A infusão do ducto biliar de TNBS para induzir pancreatite crônica é tecnicamente desafiadora em camundongos, pois até 22,5% dos camundongos podem morrer dentro de 3-4 dias de infusão de medicamentos¹⁰. Aqui, este relatório refinou o procedimento com base em estudos anteriores e reduziu a mortalidade precoce do camundongo para <10%. Por exemplo, o aumento do volume de drogas (de 35 μL a 50μL) pode garantir que as drogas atinjam todo o pâncreas. O uso de uma seringa de insulina e um tamanho menor d.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
10% de formalina tamponada neutra v/v	Fisher Scientific	23426796
Almofadas de preparação de álcool, estéreis	Fisher Scientific	22-363-750
Sistema de anestesia animal	VetEquip, Inc.
Cloridrato de buprenorfina, injeção	Par Sterile Products, LLC	NDC 42023-179-05
Tubos de centrífuga, 15 mL	Fisher Scientific	0553859A
Etanol, absoluto (200 provas), grau de biologia molecular	Fisher Scientific	BP2818500
Tesoura de microdissecação extra fina 4" reta afiada	Roboz Surgical Instrumento Co.	RS-5882
Pinça Graefe 4" ponta extra delicada	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5136
Almofada aquecida	Amazon	B07HMKMBKM
Suporte de agulha Hegar-Baumgartner 5,25"	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	Seringa de insulina RS-7850
com agulha de calibre 31	BD	324909
almofadas de preparação de iodo	Fisher Scientific	19-027048
Isoflurano	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
Micro clipe aplicando fórceps 5.5"	Roboz Instrumento Cirúrgico Co.	RS-5410
Micro clipe, reto forte curvo 1x6mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5433
Micro clipe, reto, largura do clipe de 0,75 mm	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5420
Solução de ácido picrilsulfônico, TNBS, 1M em H2O	Millipore Sigma	92822-1ML
Sutura de polipropileno 4-0	Med-Vet International	MV-8683
Sutura de polipropileno 5-0	Med-Vet International	MV-8661
Cloreto de sódio, solução intravenosa a 0,9%	VWR	2B1322Q
Campo cirúrgico, estéril	Med-Vet International	DR1826
de tecido	Fisher Scientific	22-272416
Filamentos de Von Frey	Bioseb	EB2-VFF

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