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Artigo de método

Análise do Vasospasmo Cerebral em um Modelo Murine de Hemorragia Subaracnóide com Ultrassom Duplex Transcranial de Alta Frequência

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DOI:

10.3791/62186

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3 de junho de 2021

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O objetivo deste manuscrito é apresentar um método baseado em sonografia que permita imagens in vivo do fluxo sanguíneo em artérias cerebrais em camundongos. Demonstramos sua aplicação para determinar alterações nas velocidades de fluxo sanguíneo associadas ao vasospasmo em modelos murinos de hemorragia subaracnóide (SAH).

Resumo

O vasospasmo cerebral que ocorre nas semanas após a hemorragia subaracnóide, um tipo de derrame hemorrágico, contribui para isquemia cerebral retardada. Um problema encontrado em estudos experimentais usando modelos murinos de SAH é que faltam métodos para monitoramento in vivo de vasospasmo cerebral em camundongos. Aqui, demonstramos a aplicação de ultrassom de alta frequência para realizar exames de sonografia duplex transcranária em camundongos. Utilizando o método, as artérias carótidas internas (ICA) puderam ser identificadas. As velocidades de fluxo sanguíneo nas ICAs intracranianas foram aceleradas significativamente após a indução de SAH, enquanto as velocidades de fluxo sanguíneo nas ICAs extracranianas permaneceram baixas, indicando vasospasmo cerebral. Em conclusão, o método aqui demonstrado permite o monitoramento in vivo funcional e não invasivo do vasospasmo cerebral em um modelo MURine SAH.

Introdução

A hemorragia subaracnóide espontânea (SAH) é uma forma de derrame hemorrágico causado principalmente pela ruptura de um aneurisma intracraniano1. O desfecho neurológico é influenciado principalmente por dois fatores: lesão cerebral precoce (EBI), causada pelos efeitos do sangramento e da isquemia cerebral global transitória associada, e isquemia cerebral retardada (ICD), que ocorre durante as semanas seguintes ao sangramento2,3. O ICD foi relatado para afetar até 30% dos pacientes de HAS2. A fisiopasiologia do ICD envolve vasospasmo cerebral angiográfico, microci....

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Protocolo

Os experimentos em animais foram aprovados pelo comitê responsável de cuidados com animais (Landesuntersuchungsamt Rheinland-Pfalz) e conduzidos de acordo com a Lei Alemã de Bem-Estar Animal (TierSchG). Todas as diretrizes internacionais, nacionais e institucionais aplicáveis para o cuidado e o uso dos animais foram seguidas. Neste estudo, foram realizadas medições de velocidades de fluxo sanguíneo de artérias intracranianas e extracranianas em camundongos C57BL/6N femininos de 11 a 12 semanas com peso corporal entre 19 e 21 g. Os camundongos foram submetidos à indução de HAS ou à cirurgia falsa, que foi descrita em detalhes em outros lugares10....

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Resultados

Em 6 camundongos, em 3 dos quais a HAS foi induzida usando o modelo de perfuração de filamento endovascular enquanto 3 obtiveram cirurgia falsa, as velocidades de fluxo sanguíneo da artéria carótida interna intracraniana (ICA) e da ICA extracraniana foram determinadas um dia antes da cirurgia, e 1, 3 e 7 dias após a cirurgia. As medições foram realizadas como parte dos exames de ecocardiografia de outro estudo sob anestesia com isoflurano, mantendo a temperatura corporal a 37 °C19.

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Discussão

Até onde sabemos, este estudo é o primeiro a apresentar um protocolo de monitoramento do vasospasmo cerebral em um modelo murino de SAH com ultrassom Duplex codificado por cores transcranais de alta frequência. Mostramos que este método pode medir um aumento das velocidades de fluxo sanguíneo intracraniano após a indução de SAH em camundongos. Na medicina humana este fenômeno é bem conhecido3,15. Vários estudos clínicos têm demonstrado que as velocidades elevadas.......

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Divulgações

Os autores não declaram interesses concorrentes.

Agradecimentos

Os autores gostariam de agradecer a Stefan Kindel pela preparação das ilustrações do vídeo. PW, MM e SHK foram apoiados pelo Ministério Federal alemão da Educação e da Pesquisa (BMBF 01EO1503). O trabalho foi apoiado por uma Grande Bolsa de Instrumentação da Fundação Alemã de Pesquisa (DFG INST 371/47-1 FUGG). MM foi apoiado por uma subvenção do Else Kröner-Fresenius-Stiftung (2020_EKEA.144).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Creme de depilação BaleaBalea; AlemanhaASIN B0759XM39Vcreme de depilação
C57BL / 6N camundongosJanvier; Saint-Berthevin Cedex, Françan.a.mice
CorneregelBausch& Lomb; Rochester, NY, EUAPOMADA 81552983 para os olhos da REF, cotonetes lubrificantes
Hecht Assistent; Sondenheim vor der Rö hn, AlemanhaREF 44302010cotonetes
Ecco-XS navalhaTondeo; Soligen, AlemanhaDE 28693396lâmina de barbear
Creme de eletrodoGE; Boston, MA, EUAREFpasta condutora
Placa de aquecimentoMedax; Kiel, Alemanha2005-205-01
IsofluranoAbvie; Wiesbaden, Alemanhan.a.a.anestésico volátil
LeukofixBSN médico; Hamburgo, AlemanhaREF 02137-00fita
Braço mecânico + micromanipuladorVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAP / N 11277
Microbac tecidosPaul Hartmann AG; Hamburgo, AlemanhaREF 981387tecidos antimicrobianos
MZ400, transdutor de matriz linear de 38 MHzVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CATransdutor de ultrassomREF 51068-30
SonosidASID Bonz GmbH; Herrenberg, AlemanhaREF 782010gel de ultrassonografia
Plataforma de ultrassom com placa de aquecimento e gravação de ECGVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAP / N 11179
UniVet-PortaGroppler; Oberperasberg, AlemanhaS/N BKGM0437vaporizador de isoflurano
Vevo3100VisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAREF 51073-45dispositivo de ultrassonografia
VevoLab softwareVisualSonics; FujiFilm, Toronto, CAsoftware de avaliaçãon.a.
21708318

Referências

  1. Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
  2. Macdonald, R. L. Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage. Nature Reviews Neurology. 10 (1), 44-58 (2014).
  3. Francoeur, C. L., Mayer, S. A....

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Reimpressões e permissões

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