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Artigo de método

Determinação de Aulas De Lipídios e Lipídios Totais em Amostras Marinhas

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DOI:

10.3791/62315

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11 de dezembro de 2021

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Neste artigo

Resumo

Este protocolo é para a determinação de lipídios na água do mar e espécimes biológicos. Lipídios em filtrados são extraídos com clorofórmio ou misturas de clorofórmio e metanol no caso de sólidos. As classes lipídicas são medidas pela cromatografia de camada fina da haste com detecção de ionização de chamas e sua soma dá o teor lipíduo total.

Resumo

Os lipídios são em grande parte compostos de carbono e hidrogênio e, portanto, fornecem uma energia específica maior do que outras macromoléculas orgânicas no mar. Por serem ricos em carbono e hidrogênio, eles também são hidrofóbicos e podem atuar como um portador de solvente e absorção de contaminantes orgânicos e, portanto, podem ser condutores de bioacumulação poluente em ecossistemas marinhos. Sua natureza hidrofóbica facilita seu isolamento da água do mar ou espécimes biológicos: a análise lipídica marinha começa com a amostragem e, em seguida, a extração em solventes orgânicos não polares, fornecendo um método conveniente para sua separação de outras substâncias em uma matriz aquática.

Se a água do mar foi amostrada, o primeiro passo geralmente envolve a separação em facções 'dissolvidas' e 'partículas' definidas operacionalmente por filtragem. Amostras são coletadas e lipídios isolados da matriz amostral tipicamente com clorofórmio para matéria verdadeiramente dissolvida e coloides, e com misturas de clorofórmio e metanol para sólidos e espécimes biológicos. Esses extratos podem conter várias classes de fontes biogênicas e antropogênicas. Neste momento, podem ser determinados lipídios totais e classes lipídicas. O lipídio total pode ser medido somando classes lipídicas individualmente determinadas que normalmente foram separadas cromatograficamente. A cromatografia de camada fina (TLC) com detecção de ionização de chamas (FID) é regularmente utilizada para a análise quantitativa de lipídios a partir de amostras marinhas. O TLC-FID fornece informações de classe lipídica sinóptica e, por meio de aulas de resumição, uma medição lipídica total.

As informações de classe lipídica são especialmente úteis quando combinadas com medidas de componentes individuais, por exemplo, ácidos graxos e/ou esteróis, após sua liberação de extratos lipídicos. A grande variedade de estruturas e funções lipídicas significa que elas são amplamente utilizadas em pesquisas ecológicas e biogeoquímicas que avaliam a saúde do ecossistema e o grau de influência por impactos antropogênicos. Eles têm sido empregados para medir substâncias de valor dietético à fauna marinha (por exemplo, aquafeeds e/ou presas), e como um indicador da qualidade da água (por exemplo, hidrocarbonetos).

Introdução

Os métodos aqui descritos dizem respeito a substâncias que são definidas operacionalmente como lipídios marinhos. Esta definição baseia-se em sua comodidade à extração líquido-líquido em solventes orgânicos não polares, e fornece um método conveniente para sua separação de outras substâncias em uma matriz aquática. Sua natureza hidrofóbica facilita seu isolamento da água do mar ou espécimes biológicos, bem como seu enriquecimento, e a remoção de sais e proteínas.

A medição do conteúdo lipídado e sua composição em organismos marinhos tem sido de grande interesse em ecologia alimentar, nutrição de aquicultura e ciência alimentar há décadas. L....

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Protocolo

NOTA: Para limpar vidros, instrumentos e filtros para análises lipídicas, lave-os 3 vezes com metanol seguido de 3 lavagens com clorofórmio, ou aqueça-as a 450°C por pelo menos 8 horas.

1. Procedimento de filtragem para água do mar dissolvido e lipídios particulados

NOTA: A fração específica de interesse é definida operacionalmente pelo procedimento de filtragem. Neste caso, o tamanho dos poros é de 1,2 μm.

  1. Configure o coletor de filtragem sem filtro e enxágue a configuração com água do mar filtrada.
  2. O uso de fórceps limpos coloca um filtro de fibra de vidro de 47 mm (GF/C), q....

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Resultados

Como o setor de produção de alimentos que mais cresce, a aquicultura está evoluindo em termos de inovações tecnológicas e adaptações para atender às necessidades em mudança. Uma delas é reduzir a dependência de farinha de peixe de origem selvagem e óleo de peixe, que fornecem ingredientes de ração para muitas espécies de aquicultura. Os óleos de plantas terrestres estão sendo investigados como substitutos sustentáveis e econômicos para o óleo de peixe em aquafeeds, e o fígado é um tecido alvo para análise, pois é o local.......

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Discussão

A velocidade com que o sistema TLC-FID fornece informações de classe lipídica sinóptica de pequenas amostras torna o TLC-FID uma ferramenta capaz de triagem de amostras marinhas antes de realizar procedimentos analíticos mais envolvidos. Tais análises geralmente requerem a liberação de compostos componentes de extratos lipídes e derivação para aumentar a volatilidade no caso da cromatografia gasosa. O TLC-FID combinado com o GC-FID foi encontrado como uma combinação poderosa para extratos de frutos do mar e outros alimen.......

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Divulgações

Os autores não têm interesses financeiros concorrentes.

Agradecimentos

Esta pesquisa foi financiada pelo Conselho de Ciências Naturais e Pesquisa em Engenharia do Canadá (NSERC) 105379 para C.C. Parrish. A Rede de Treinamento de Equipamentos e Instrumentos De Pesquisa Core da Universidade Memorial (CREAIT) ajudou a financiar esta publicação.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Frascos para injetáveis de 15 mlVWR66009-560
1-hexadecanolSigma258741-1G
1-Monopalmitoil-rac-glicerolSigmaM1640-1g
Frascos para injetáveis de 2 mlVWR46610-722
Filtros de fibra de vidro de 25 mmFisher09 874 32A
2 ml bulbos de pipetaVWR82024-554
Filtros de fibra de vidro de 47 mmPipetas Fisher09 874 32
5 3/4"Fisher1367820A
Pipetas de 9"Fisher1367820C
AcetonaVWRCAAX0116-1
Agilent GC-FID 6890Agilent
Cloreto de Cálcio ANHS 500gmVWRCACX0160-1
Tampas para frascos para injetáveis de 2 mlVWR46610-712
clorofórmioVWRCACX1054-1
Palmitato de colesterolSigmaC6072-1G
Chromarod S5Shell USA3252
DiclorometanoVWRCADX0831-1
DL-a-fosfatidilcolina, ditalmotoylSigmaP5911-1g
Éter Etílico, Anidrado de grau ACS 4LVWRCAEX0190-4
Tripalmitato de GliceriloSigmaT5888-100MG
Seringa Hamilton 702SNR 25µ lSigma58381
HélioAir LiquideA0492781
HexanoVWRCAHX0296-1
Regulador de hidrogênioVWR55850-484
Iatroscan MK6Shell USA
KimwipesFisher066662
Medical AirLiquideA0464563
Luvas de nitrilo médiasFisher191301597C
Luvas de nitrilo LVWRCA82013-782
NitrogênioAir LiquideA0464775
Regulador de nitrogênioVWR55850-474
NonadecaneSigma74158-1G
Ácido palmíticoSigmaP0500-10G
Dispensador de repetiçãoSigma20943
Bicarbonato de sódio 1kgVWRCA97062-460
Sulfato de sódio Anhy ACS 500grVWRCA71008-804
Ácido sulfúricoVWRCASX1244-5
Fita de teflonFisher14610120
tissue master 125 115V c/homogeneizador de 7mmOMNI InternationalTM125-115
TLC tanque de desenvolvimentoShell USA3201
UHP hidrogênioAir LiquideA0492788
VWR repippetter solvente VWR82017-766
VWR temporizador LED intermitente 2 canaisVWR89140-196
Zebron ZB-Wax GC colunaPhenomenex7HM-G013-11

Referências

  1. Couturier, L. I. E., et al. State of art and best practices for fatty acid analysis in aquatic sciences. ICES Journal of Marine Science. , (2020).
  2. Parrish, C. C. Lipids in Marine Ecosystems. ISRN Oceanography. , 604045(2013).
  3. Folch, J., Lees, M., Stanley, G. H. S.

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Reimpressões e permissões

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