Artigo de método

Gerenciamento Avançado do Ritmo Cardíaco Aplicando Fotoestimulação Optogenética Multi-Site em Corações Murinos

DOI:

10.3791/62335

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26 de agosto de 2021

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1Research Group Biomedical Physics, Max Planck Institute for Dynamics and Self-Organization, 2Research Electronics Department, Max Planck Institute for Dynamics and Self-Organization, 3Department of Pharmacology and Toxicology, University Medical Center Goettingen, 4Institute for Nonlinear Dynamics, Georg-August-University Goettingen, 5Department of Cardiology and Pneumology, University Medical Center Goettingen, 6German Center for Cardiovascular Research, DZHK e.V., partner site Goettingen, 7Laboratory Animal Science Unit, German Primate Center Leibniz Institute for Primate Research, 8Department of Microsystems Engineering (IMTEK), University of Freiburg, 9Cluster of Excellence BrainLinks-BrainTools, University of Freiburg

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este trabalho relata um método de controle do ritmo cardíaco de corações murinos intactos de camundongos transgênicos com canalrodopsina-2 (ChR2) utilizando fotoestimulação local com matriz micro-LED e mapeamento óptico simultâneo do potencial de membrana epicárdica.

Resumo

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As taquiarritmias ventriculares são uma das principais causas de mortalidade e morbidade em todo o mundo. A desfibrilação elétrica usando choques elétricos de alta energia é atualmente o único tratamento para fibrilação ventricular com risco de vida. No entanto, a desfibrilação pode ter efeitos colaterais, incluindo dor intolerável, danos teciduais e piora do prognóstico, indicando uma necessidade médica significativa para o desenvolvimento de estratégias de manejo do ritmo cardíaco mais suaves. Além das abordagens elétricas redutoras de energia, a optogenética cardíaca foi introduzida como uma ferramenta poderosa para influenciar a atividade cardíaca usando canais iônicos de membrana sensíveis à luz e pulsos de luz. No presente estudo, um método robusto e válido para fotoestimulação bem-sucedida de corações murinos intactos perfundidos de Langendorff será descrito com base na estimulação multi-local aplicando uma matriz 3 x 3 de microdiodos emissores de luz (micro-LED). O mapeamento óptico simultâneo das ondas de tensão da membrana epicárdica permite a investigação dos efeitos da estimulação específica da região e avalia a atividade cardíaca recém-induzida diretamente no local. Os resultados obtidos mostram que a eficácia da desfibrilação é fortemente dependente dos parâmetros escolhidos para a fotoestimulação durante uma arritmia cardíaca. Será demonstrado que a área iluminada do coração desempenha um papel crucial para o sucesso da terminação, bem como a forma como o controle direcionado da atividade cardíaca durante a iluminação para modificar os padrões de arritmia pode ser alcançado. Em resumo, essa técnica oferece a possibilidade de otimizar a manipulação do mecanismo no local no caminho para o controle de feedback em tempo real do ritmo cardíaco e, em relação à especificidade da região, novas abordagens na redução do dano potencial ao sistema cardíaco em comparação com o uso de aplicações de choque elétrico não específicas.

Introdução

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Investigações iniciais da dinâmica espaço-temporal durante a arritmia revelaram que os complexos padrões elétricos durante a fibrilação cardíaca são impulsionados por ondas de excitação rotativas semelhantes a vórtices1. Esse achado deu novos insights sobre os mecanismos subjacentes das arritmias, o que levou ao desenvolvimento de novas terapias de terminação elétrica baseadas na excitação multissítio do miocárdio 2,3,4. No entanto, os tratamentos que utilizam estimulação elétrica de campo não são locais e podem inervar todas as células excitáveis circundantes, incluindo o tecido muscular, causando danos celulares e teciduais, bem como dor intolerável. Em contraste com as terapias elétricas, as abordagens optogenéticas fornecem uma técnica específica e protetora dos tecidos para evocar potenciais de ação de cardiomiócitos com alta precisão espacial e temporal. Portanto, a estimulação optogenética tem o potencial de controle invasivo mínimo dos padrões de ativação caótica durante a fibrilação cardíaca.

A introdução do canal iônico sensível à luz canalrodopsina-2 (ChR2) em células excitáveis via manipulação genética 5,6,7, possibilitou a despolarização do potencial de membrana de células excitáveis por meio da fotoestimulação. Várias aplicações médicas, incluindo a ativação de redes neuronais, o controle da atividade cardíaca, a restauração da visão e da audição, o tratamento de lesões medulares e outras 8,9,10,11,12,13,14 têm sido desenvolvidas. A aplicação da ChR2 em cardiologia tem potencial significativo devido ao seu tempo de resposta de milissegundos15, tornando-a adequada para o controle direcionado da dinâmica cardíaca arrítmica.

Neste estudo, a fotoestimulação multi-local de corações intactos de um modelo de rato transgênico é mostrada. Em resumo, foi criada uma linha de ratinhos alfa-MHC-ChR2 transgénicos no âmbito do Sétimo Programa-Quadro da Comunidade Europeia FP7/2007-2013 (HEALTH-F2-2009-241526) e gentilmente fornecida pelo Prof. S. E. Lehnart. Em geral, machos adultos transgênicos C57/B6/J, expressando Cre-recombinase sob controle de alfa-MHC foram pareados para acasalar com fêmeas B6.Cg-Gt(ROSA)26Sortm27.1(CAG-COP4*H134R/tdTomato)Hye/J. Como o STOP cardíaco foi apagado na segunda geração, a prole apresentou expressão estável de MHC-ChR2 e foi utilizada para manter colônias fotossensíveis cardíacas. Todos os experimentos foram feitos com camundongos adultos de ambos os sexos com uma idade de 36 a 48 semanas. A iluminação é obtida usando uma matriz de micro-LED 3 x 3, fabricada conforme descrito em16,17, exceto que o invólucro à base de silício e as fibras de vidro ópticas curtas não são implementados. Seu primeiro uso em uma aplicação cardíaca é encontrado em18. Uma matriz linear de micro-LED baseada em uma tecnologia de fabricação semelhante foi aplicada como uma sonda penetrante para o ritmo cardíaco19. Os micro-LEDs são dispostos em uma matriz 3 x 3 a um passo de 550 μm, proporcionando uma alta resolução espacial e uma alta potência radiante em uma área muito pequena. Os autores demonstram neste trabalho uma fotoestimulação multissítio local versátil que pode abrir caminho para o desenvolvimento de novos métodos de terapia antiarrítmica.

O protocolo experimental a seguir envolve uma perfusão retrógrada de Langendorff ex vivo, para a qual a aorta canulada funciona como entrada de perfusão. Devido à pressão de perfusão aplicada e à contração cardíaca, o perfusato está fluindo através das artérias coronárias, que se ramificam da aorta. No trabalho apresentado, o coração é perfundido utilizando-se uma configuração de pressão constante alcançada pela elevação dos reservatórios de perfusato a 1 m de altura, equivalente a 73,2 mmHg, o que resulta em uma vazão de 2,633 ± 0,583 mL/min. Dois tipos de solução de Tyrode's são usados como perfusato durante o experimento. A solução de Tyrode regular suporta um ritmo sinusal estável, enquanto a solução de Tyrode Low-K+ é misturada com Pinacidil para permitir a indução de arritmia em corações murinos. O uso de um banho-maria hexagonal permite a observação do coração através de seis janelas planares diferentes, permitindo o acoplamento de vários componentes ópticos com menor distorção por refração.

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Protocolo

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Todos os experimentos seguiram estritamente o regulamento de bem-estar animal, de acordo com a legislação alemã, as estipulações locais e de acordo com as recomendações da Federação das Associações Europeias de Zootecnia de Laboratório (FELASA). O pedido de aprovação de experiências em animais foi aprovado pela autoridade responsável pelo bem-estar animal e todas as experiências foram comunicadas aos nossos representantes em matéria de bem-estar animal.

1. Preparação e materiais da experiência

  1. Configuração de mapeamento óptico
    NOTA: A configuração óptica, bem como a configuração elétrica, são mostradas na Figura 1. Todos os componentes utilizados na configuração óptica e elétrica estão listados em detalhes na Tabela de Materiais.
    1. Use LED 1 e LED 2 para indução de arritmia e desfibrilação de backup. Escolha LEDs de alta potência com um comprimento de onda λazul perto de 475 nm, que é o pico do comprimento de onda de excitação de ChR26. Para estreitar ainda mais o espectro óptico, use um filtro passa-banda de 470 ± 20 nm.
      NOTA: Neste trabalho, o LED 1 e o LED 2 têm um fluxo radiante típico de 3,9 a 5,3 W, de acordo com a ficha técnica20.
    2. Ilumine o epicárdio para mapeamento óptico com um LED vermelho de alta potência (LED 3 na Figura 1), que emite luz com um comprimento de onda central de λvermelho = 625 nm e um fluxo radiante de 700 mW21. A luz vermelha é filtrada com um filtro passa-banda de 628 ± 20 nm e refletida por um espelho dicroico de passagem longa (DM) com um comprimento de onda de corte de λDM = 685 nm.
    3. Use um filtro de emissão com λfilter-cam = 775 ± 70 nm na frente da objetiva da câmera para registrar apenas a emissão de fluorescência da atividade cardíaca. Use um objetivo rápido que seja adequado para aplicações com pouca luz.
      NOTA: A frequência de fibrilação de um coração de rato varia de 20 a 35 Hz; portanto, use uma câmera rápida o suficiente para gravar com uma frequência de 1 a 2 kHz, ou até mais.
  2. Matriz de micro-LED
    NOTA: As matrizes de micro-LED aplicadas aqui são realizadas usando o processamento de microssistemas, conforme detalhado em outro lugar16,17.
    1. Gire uma camada de poliimida (PI) de 5 μm de espessura sobre substratos de silício de 4 polegadas (polido de lado único, 525 μm de espessura).
    2. Curar esta camada PI a uma temperatura máxima de 450 °C sob uma atmosfera de azoto. Mantenha a temperatura máxima constante por 10 min.
    3. Depositar e padronizar um fotorresistente de reversão de imagem (PR) usando litografia ultravioleta (UV) e depósito de sputter uma fina camada de platina (Pt) de 250 nm.
    4. Engrosse esta metalização à base de Pt galvanizando uma camada de ouro (Au) de 1 μm de espessura com o PR padronizado servindo como uma camada de mascaramento.
    5. Antes de revestir uma segunda camada PI, exponha a bolacha com sua primeira camada PI e a metalização galvanizada por Au a um plasma de oxigênio que ativa quimicamente a superfície da camada PI.
    6. Cure a segunda camada PI novamente a 450 °C, aplique litografia UV para padronizar uma camada PR e abra as almofadas de contato da matriz para os chips micro-LED e a placa de circuito impresso (PCB) de interface por gravação de íons reativos (RIE) usando o PR padronizado como uma camada de mascaramento.
      NOTA: Nesta etapa do processo RIE, recomenda-se aplicar 200 W e 100 W por 10 e 30 min, respectivamente, para definir as aberturas da almofada de contato, bem como a forma externa da matriz de micro-LED bidimensional (2D).
    7. Retire o PR usando solventes e gravura a plasma. Engrosse ainda mais as almofadas de contato galvanizando uma camada de ouro adicional de 6 μm de espessura.
    8. Conecte os chips micro-LED às almofadas de contato usando um colador flip-chip.
    9. Ative a superfície PI em um plasma de oxigênio e preencha os chips micro-LED com um adesivo sem solvente. Cura, em seguida, o adesivo durante 12 h a 120 °C.
    10. Para encapsular os chips micro-LED, execute outro tratamento de plasma com argônio e aplique uma fina camada de fluoropolímero manualmente. Pré-curar esta camada a 80 °C durante 1 h.
    11. Aplique manualmente o silicone como a camada de encapsulamento final depois de expor a matriz de micro-LED a um plasma de oxigênio, usado para melhorar a adesão do silício à camada subjacente de fluoropolímero. Curar a camada de silicone a 80 °C e 180 °C durante 1 h cada. Essas etapas finais de cura também curam completamente a camada de fluoropolímero.
    12. Solde as almofadas de contato do substrato PI a uma placa de circuito impresso que transporta conectores de tira para interconexão da matriz a uma instrumentação externa. Cubra as almofadas de solda na PCB usando um adesivo.
  3. Configuração elétrica
    1. Use eletrodos adequados para registrar um eletrocardiograma (ECG), por exemplo, eletrodos de prata/cloreto de prata ou eletrodos de Potencial de Ação Monofásica (MAP) e um amplificador de ECG para monitorar a atividade elétrica do coração continuamente. Além disso, use um dispositivo de aquisição (DA) apropriado para registrar todos os sinais elétricos obtidos.
    2. Escolha um driver adequado para os LEDs de alta potência (LED 1, LED 2 e LED 3), que possa gerenciar a corrente máxima aplicada a cada dispositivo. Use um gerador de função arbitrária (AFG) para controlar a saída dos drivers LED com precisão.
    3. Use um driver de LED multicanal para controlar a corrente que flui através da matriz de micro-LED. Um AFG com várias saídas também é adequado para essa tarefa.
      NOTA: É aconselhável escolher drivers LED limitando a corrente à corrente máxima do micro-LED, caso contrário, os diodos podem ficar danificados. Um exemplo de um driver micro-LED multicanal é descrito em outro trabalho18. Se necessário, o AFG ou qualquer outro driver de LED pode estar conectado a um computador para controlar remotamente as configurações de micro-LED. Se este for o caso, conecte o driver LED ao computador com o protocolo de comunicação de sua escolha, por exemplo, GPIB (General Purpose Interface Bus) ou uma conexão serial.

   

2. Procedimentos experimentais

  1. Preparação da solução
    1. Preparar a solução da Tyrode: 130 mM NaCl, 4 mM KCl, 1 mM MgCl 2, 24 mM NaHCO3, 1,8 mM CaCl 2, 1,2 mM KH2 PO4, 5,6 mM de glicose, 0,1% BSA/Albumina.
    2. Prepare a solução Low-K+ Tyrode: Low-K+ Tyrode's é feita da mesma forma que a solução Tyrode's regular, exceto que apenas metade da quantidade de KCl é adicionada (2 mM em vez de 4 mM KCl).
      NOTA: Para um experimento com duração de 3 h geralmente 2-3 L de Tyrode Low-K+ (adicionalmente misturado com Blebistatina (Passo 2.1.5) se o mapeamento óptico for realizado) e 1-2 L de Tyrode regular são suficientes.
    3. Adicionar Pinacidil à solução de Low-K+ Tyrode para facilitar o processo de indução de arritmia, conforme descrito em22, para obter uma concentração de 100 mM. Use luvas de laboratório protetoras ao manusear Pinacidil.
    4. Preparar 1 ml de 50 μM DI-4-ANBDQPQ com a solução regular de Tyrode. Proteja o corante da luz para evitar o fotobranqueamento.
    5. Faça uma solução de estoque de 10 mM de Blebbistatin. Para o mapeamento óptico, misturar a Blebistatina com a solução de Pinacidil-Tirode a 100 mM (Passo 2.1.3) para obter uma solução de 5 μM. Use luvas de laboratório protetoras ao manusear Blebbistatin.
      NOTA: Mantenha o corante e a solução de Blebistatina de lado até que o mapeamento óptico comece.
  2. Perfusão Langendorff
    NOTA: A configuração consiste em dois reservatórios para as duas soluções da Tyrode. Eles são conectados a uma armadilha de bolhas através de tubos com galos de três vias. O coração é posteriormente anexado à armadilha de bolhas por um conector de bloqueio Luer, e é então suspenso em um banho de água hexagonal. O banho-maria é, por sua vez, ligado a um contentor de resíduos para recolher a solução utilizada da Tyrode.
    1. Limpe todos os tubos antes de cada experimento com água totalmente desmineralizada.
    2. Arejar ambas as soluções da Tyrode com Carbogen (5% de CO 2 e 95% de O2) por 30 min à temperatura ambiente antes do início do experimento. Ajustar o valor de pH das soluções de Tyrode para 7,4 com NaOH.
    3. Encha 500 ml de cada solução de Tyrode no reservatório correspondente e desaregue os tubos, bem como a armadilha de bolhas, executando a solução de Tyrode através do sistema de perfusão até que não sejam mais vistas bolhas de ar presas nos tubos ou na armadilha de bolhas.
    4. Continue arejando as soluções de Tyrode durante todo o experimento nos reservatórios com Carbogen para garantir que o pH do perfusato permaneça estável mais tarde durante a perfusão.
    5. Aqueça o sistema de perfusão a 37 °C com uma bomba de calor de água. Mantenha a temperatura do perfusato constante dentro do banho-maria usando um elemento de aquecimento adicional, como um cabo de aquecimento à prova d'água.
      NOTA: Durante o experimento, é crucial reabastecer os reservatórios do Tyrodes antes que eles fiquem vazios. Caso contrário, as bolhas de ar podem entrar no coração, o que pode entupir os vasos e levar à isquemia.
  3. Preparação do mouse
    1. Injetar por via subcutânea 0,1 mL de 500 I.E. Heparina 30 min antes do procedimento de isolamento cardíaco.
    2. Encha uma placa de Petri de 6 cm e uma seringa de 2 ml com solução de Tyrode gelada. Coloque sob o microscópio estereoscópico.
    3. Realizar anestesia de curto prazo de camundongos por um ambiente saturado de isoflurano por 2 min e luxação cervical imediata depois.
      NOTA: A fim de verificar anestesia suficiente, uma verificação para o reflexo negativo entre os dedos do pé é absolutamente necessária.
    4. Abra o peito, retire o coração, como descrito em outro lugar23, e coloque-o na placa de Petri de 6 cm com solução gelada de Tyrode. O batimento cardíaco será diminuído devido à queda de temperatura.
    5. Faça a preparação fina sob um microscópio estereoscópico, conforme detalhado em outro lugar23. Prenda a aorta na agulha contundente e fixe o vaso com material de sutura.
    6. Como controlo, injete a solução de Tyrode gelada através da agulha no coração e verifique se o coração está bem montado. Este passo também enxagua o sangue restante para fora do coração.
    7. Transfira o coração montado para o sistema de perfusão. Certifique-se de que o perfusato está fluindo para evitar que o ar entre no coração enquanto conecta a agulha com a armadilha de bolhas. Verifique se o coração está coberto com a solução de Tyrode's no banho de água. As etapas 2.3.4, 2.3.5 e 2.3.7 são ilustradas na Figura 2.
    8. Certifique-se de que o coração comece a bater dentro de alguns minutos. Deixe o coração adaptar-se à configuração de perfusão durante 15 a 20 minutos e, em seguida, mude para a solução de Tyrode de baixo K + com Pinacidil (Passo 2.1.3) respetivamente solução de Tyrode de baixo K + com Pinacidil e Blebistatina (Passo 2.1.5) se o mapeamento óptico for para ser realizado.
  4. Indução de arritmia e desfibrilação óptica
    1. Coloque um dos eletrodos de ECG o mais próximo possível da superfície do coração para garantir uma boa qualidade de sinal. Suspender o segundo eléctrodo de ECG na solução de Tyrode. Certifique-se de que o ECG adquirido está sendo registrado pelo DA de escolha.
    2. Coloque a matriz micro-LED na área de interesse do estudo, por exemplo, no ventrículo esquerdo.
    3. Mude a perfusão para Tyrode's low-K+ com Pinacidil e perfunda o coração por 15 a 30 min.
    4. Para induzir arritmia, ilumine o coração com LED 1 e LED 2 com um trem de 20 a 50 pulsos de luz com uma frequência f ind de 25 a 35 Hz, duração do pulso Wind de 2 a 15 ms, e intensidade de luz LIopt_ind de 2,8 mW mm-2.
    5. Repita o processo até que a arritmia seja induzida.
      NOTA: As arritmias são fáceis de identificar no sinal de ECG porque a frequência e a morfologia do sinal diferem do ritmo sinusal normal. Se a arritmia terminar dentro dos próximos 5 s, classifique-a como auto-terminada e inicie uma nova tentativa de indução.
    6. Uma vez que uma arritmia sustentada é detectada visualmente, aplique uma explosão de pulsos com diferentes larguras W def e frequências fdef, usando três, seis ou nove micro-LEDs da matriz a umpulso de corrente pulsante I de 15 mA cedendo a uma intensidade de luz LIμLED = 33,31 ± 2,05 mW mm-2.
    7. Se a arritmia continuar após cinco ensaios de desfibrilação baseados em matriz de micro-LED, classifique a tentativa como malsucedida e inicie a desfibrilação de backup.
    8. Para desfibrilação de backup, use o LED 1 e o LED 2 usando os mesmos parâmetros de temporização definidos para a matriz de micro-LED.
      NOTA: Como o coração é exposto ao estresse isquêmico e metabólico durante todo o período experimental, é possível que as tentativas de terminação da arritmia não sejam bem-sucedidas, mesmo com a desfibrilação de backup. Sempre que isso acontecer, mude a solução de perfusão para o Tyrode regular e deixe o coração se recuperar por 5 a 10 minutos. Quando o ECG retornar ao ritmo sinusal, repita o protocolo da Etapa 2.4.3 novamente.
  5. Mapeamento óptico
    1. Perfundir o coração com a solução de Blebistatina preparada na Etapa 2.1.5 e aguardar até que ocorra o desacoplamento mecânico. Isso é realizado quando o coração para de bater, mas um sinal de ECG ainda é mensurável.
      NOTA: A mistura da solução de Blebistatina à concentração mencionada e a manutenção do coração perfundido com esta solução mantêm a atividade mecânica cardíaca desacoplada da atividade elétrica durante todo o experimento.
    2. Dê o corante de tensão de 1 mL DI-4-ANBDQPQ (preparado na Etapa 2.1.4) como um bolus na armadilha de bolhas da perfusão de Langendorff. Aguarde de 5 a 10 minutos para permitir que o corante perfunda o coração uniformemente.
      NOTA: Evite o fotobranqueamento do corante desligando a luz vermelha sempre que nenhuma gravação estiver sendo feita. Se a relação sinal-ruído da gravação se tornar muito pequena (o sinal adquirido é muito ruidoso), repita as etapas 2.1.4 e 2.5.2.
    3. Foque a câmera na superfície do coração, ligue o LED 3 e aplique energia óptica de 1,27 mW mm-2 .
    4. Desligue as luzes do laboratório e comece a gravar. Certifique-se de que um sinal óptico está sendo adquirido comparando a frequência do sinal obtido com a frequência do ECG gravado. Isso garante que o sinal óptico obtido esteja puramente relacionado à atividade elétrica do coração.
      NOTA: Como a luz de fluorescência emitida pelo corante é muito semanal, o mapeamento óptico é feito em uma sala escura. Isso evita a interferência de sinal de quaisquer outras fontes de luz.

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Resultados

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O protocolo permite a indução de arritmias ventriculares em corações murinos intactos utilizando pulsos de fotoestimulação gerados por LED 1 e LED 2 (Figura 1) com frequência f ind entre 25 Hz e 35 Hz e pulso de duração Wind entre 2 ms e 10 ms. Observe que o objetivo de tais pulsos de luz rápidos não é capturar o ritmo cardíaco, mas sim desequilibrar a atividade cardíaca para que ondas elétricas erráticas possam ser geradas, o que facilita uma arritmia. A vantagem de i...

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Discussão

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Um tratamento bem-sucedido das taquiarritmias cardíacas é fundamental para a terapia cardíaca. No entanto, os mecanismos biofísicos subjacentes ao início, perpetuação e término da arritmia não são totalmente compreendidos. Portanto, a pesquisa cardíaca visa otimizar a terapia de choque elétrico para uma terminação mais suave das arritmias, aumentando assim a qualidade de vida dos pacientes 28,29,30,31.

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Divulgações

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Os autores não declaram qualquer conflito de interesses.

Agradecimentos

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Os autores gostariam de agradecer a Marion Kunze e Tina Althaus por seu excelente suporte técnico durante os experimentos. A investigação que conduziu aos resultados recebeu financiamento do Sétimo Programa-Quadro da Comunidade Europeia FP7/2007-2013 ao abrigo da convenção de subvenção número HEALTH-F2-2009-241526. O apoio também foi fornecido pelo Centro Alemão de Pesquisa Cardiovascular, DZHK e.V. (Projeto MD28), site parceiro Goettingen, a Fundação Alemã de Pesquisa CRC 1002 (projeto C03) e a Sociedade Max Planck. Este trabalho foi parcialmente apoiado pelo BrainLinks-BrainTools, Cluster of Excellence financiado pela Fundação Alemã de Pesquisa (DFG, número de concessão EXC 1086).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Componentes químicos
BlebbitatinaTargetMolT603810 mM solução estoque
BSA/AlbuminaSigma-AldrichA4919
Cloreto de cálcioSigma-AldrichC1016CaCl2
CarbogenWestfalen50 l garrafa
DI-4-ANBDQPQAAT Bioquest21499Corante para Mapeamento Óptico
GlicoseSigma-AldrichD9434C6H12O6
HeparinaLEO PharmaHeparina-Natrium Leo 25.000 I.E./5 ml, disponível apenas mediante receita médica
Ácido clorídricoMerck1.09057.1000HCl, solução estoque 1 M
IsofluranoCP Pharma1 ml/ml, disponível apenas mediante receita médica
Magnésio CloretoMerck8.14733.0500MgCl2
Fosfato monopotássicoSigma-Aldrich30407KH2PO4
Pinacidil monohidratadoSigma-AldrichP154-500mg10 mM solução estoque
Cloreto de potássioSigma-AldrichP5405KCl
Bicarbonato de sódioSigma-AldrichS5761NaHCO3
Sódio CloretoSigma-AldrichS5886NaCl
Hidróxido de SódioMerck1.09137.1000NaOH, solução de estoque de 1 M
Configuração
Biopac MP150Biopac SystemsSistema deaquisição e análise de dados
ECG personalizado, alternativa ECG100CBiopac SystemsECG100CAmplificador de eletrocardiograma
Aquecedor de banho-maria personalizado com cabo de aquecimentoSistema de aquecimento RMSHK-5,0-12Cabo de aquecimento 120W
Banho-maria
Driver LED Fonte de alimentaçãoThorlabsKPS10115 V, 2,4 A Fonte de alimentação com conector Jack de 3,5 mm para um cubo K ou T.
Driver LED LEDD1BThorlabsLEDD1BT-Cube LED Driver, Corrente de Acionamento Máxima 1200 mA
MAP, Eletrodo de ECGHugo Sachs ElektronikBS4  73-0200Eletrodo Mini-ECG para corações isolados
micro-LED Driver, por exemplo, AFGAgilent InstrumentsA-2230Gerador de função arbitrária (AFG)
Gerador de sinalAgilent InstrumentsA-2230AFG
micro-LED Componentes
Cola epóxiTecnologia epóxiEPO-TEK 353NDEpóxi
de dois componentesFluoropolímero  Fornecedor:Asahi Glass Co., Ltd.Cytop 809MFluoropolímero com alta transparência
Reversão de imagem fotorresistenteMerck KGaAAZ 5214EResistência à Reversão de Imagem para chip LED de Alta Resolução
  Cree Inc.C460TR2227-S2100Micro-LED azul
fotorresisteMerck KGaAAZ 9260fotorresiste positivo espesso
poliimidaUBE Industries Ltd.U-Verniz SSolução de Poliimida
SiliconeNuSil Technology LLCMED-6215Elastômero de silicone de baixa viscosidade
Adesivo sem solventeJohn P. Kummer GmbHEpo-Tek 301-2Resina epóxi com baixa viscosidade
Mapeamento óptico
Filtro azulChroma Technology CorporationET470 / 40xFiltro
CâmeraPhotometricsCascade 128+Câmera EMCCD de alto desempenho
Objetivade Câmera NavitarDO-5095lentes de alta velocidade de distância focal fixa Navitar funcionam com câmeras CCD e CMOS
Espelho DicróicoSemrockFF685-Di02-25x36685 nm edge BrightLine® divisor de feixe dicróico epi-fluorescência padrão de borda única
Filtro de EmmissãoSemrockFF01-775/140-25775/140 nm BrightLine® filtro passa-banda de banda única
Dissipador de calorAdvanced Thermal SolutionsATSEU-077A-C3-R0Dissipadores de calor - LED STAR LED Dissipador de calor LED, 45mm dia., 68mm, Preto/Prata, Hardware de placa de base não rosqueada
LED 1 e LED 2LED Engin OsramLZ4-00B208LEDs de alta potência - Cor única Azul, 460 nm 130 lm, 700mA
LED 3ThorlabsM625L3625 nm, 700 mW (Min) LED montado, lentes de 1000 mA
Engin LED OsramLLNF-2T06-HConjuntos de lentes de iluminação LED LZ4 LENS NARROW FLOOD BEAM
Fotodiodo para medidorde energia ThorlabsS120VCSensor de potência de fotodiodo padrão
Medidor de potênciaThorlabsPM100DMedidor compacto de energia e energia
Filtro vermelhoSemrockFF02-628 / 40-25BrightLine® Filtro passa-banda de banda única
elétricaMP150WSWhexagonalde matrizde excitação azul As

Referências

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