Teste de ativação basófila para diagnóstico de alergia

Resumo

O teste de ativação basófila é um teste complementar de diagnóstico in vitro para a avaliação de reações alérgicas mediadas por IgE com base na detecção de ativação basofílica na presença de um estímulo específico através da medida de marcadores de ativação por citometria de fluxo.

Resumo

O teste de ativação basofílica (BAT) é um teste complementar de diagnóstico in vitro que pode ser usado além da história clínica, teste cutâneo (ST) e determinação específica de IgE (sIgE) na avaliação de reações alérgicas mediadas por IgE a alimentos, veneno de inseto, drogas, bem como algumas formas de urticária crônica. No entanto, o papel dessa técnica nos algoritmos de diagnóstico é altamente variável e não bem determinado.

A MTD baseia-se na determinação da resposta basófila à ativação de IgE de ligação transfronteiriça alérgeno/fármaco através da medição de marcadores de ativação (como CD63, CD203c) por citometria de fluxo. Este teste pode ser uma ferramenta útil e complementar para evitar testes de desafio controlados para confirmar o diagnóstico de alergia, especialmente em indivíduos que experimentam reações graves com risco de vida. Em geral, o desempenho da MTD deve ser considerado se i) o alérgeno/fármaco produzir resultados falso-positivos no TS; ii) não há fonte de alérgeno/fármaco a ser utilizada para determinação de ST ou sIgE; iii) há discordância entre a história do paciente e a determinação de ST ou sIgE; iv) os sintomas sugerem que o TS pode resultar em resposta sistêmica; v) antes de considerar uma TCC para confirmar o alérgeno/droga culpado. As principais limitações do teste estão relacionadas à sensibilidade não ótima, principalmente na alergia a medicamentos, à necessidade de realizar o teste não mais de 24 h após a extração da amostra e à falta de padronização entre os laboratórios em termos de procedimentos, concentrações e marcadores celulares.

Introdução

O diagnóstico de alergia mediada por IgE é baseado na história clínica, testes cutâneos (STs), quantificação de IgE sérica específica (sIgE) e, se necessário e indicado, testes de desafio controlado (CCTs)1,2,3,4,5,6. No entanto, a história clínica pode não ser confiável, uma vez que pode haver falta de informações precisas, e STs e CCTs não são procedimentos isentos de risco que podem ser contraindicados em indivíduos com reações graves com risco d....

Protocolo

O desempenho do protocolo foi conduzido de acordo com os princípios da Declaração de Helsínquia e aprovado pelo Comité de Ética para la Investigación Provincial de Málaga, Espanha. Todos os sujeitos foram informados oralmente sobre o estudo de pesquisa e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido correspondente.

NOTA: O presente protocolo detalha o procedimento BAT que os autores usam diariamente. No entanto, este não é um método padronizado e existem diferenças com os procedimentos publicados por outros autores. As principais modificações do protocolo estão relacionadas ao uso de IL-3 no tampão de estimulação, tempo de....

Resultados

A MTD realizada com alérgenos ou drogas permite a investigação de reações de hipersensibilidade dependentes de IgE. A reatividade basófila deve ser medida em pelo menos duas concentrações ótimas, a fim de obter os melhores resultados³⁴ e a ativação é visualizada pela regulação positiva do CD63 na superfície celular. No caso dos alérgenos, além disso, para confirmar a reatividade basófila, a sensibilidade basófila deve ser analisada medindo-se a reatividade em múltiplas concentrações decrescentes d.......

Discussão

A MTD é um teste complementar de diagnóstico in vitro para a avaliação de reações alérgicas mediadas por IgE que tem se mostrado útil no diagnóstico de reações induzidas por diferentes gatilhos, como medicamentos, alimentos ou inalantes, bem como em algumas formas de urticária crônica. Em geral, o desempenho das MTD deve ser considerado se i) o alérgeno/fármaco produzir resultados falso-positivos no TS; ii) o alérgeno/fármaco não está disponível para ser utilizado para quantificação de ST ou sIgE; iii) existe di.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubo de ensaio de poliestireno de fundo redondo de 5 mL, sem tampa, anticorpo não estéril	Corning	352008
APC anti-CD193 humano (CCR3)	BioLegend	310708
BD FACSCalibur Citômetro de fluxo	BD Biosciences
Cloreto de cálcio	Sigma-Aldrich	C1016
FITC anticorpo CD63 humano	BioLegend	353006
HEPES (1 M)	de 15630106		Thermo-Fisher
10x concentrado	BD Biosciences	349202
Cloreto de magnésio	Sigma-Aldrich	M8266
N-Formyl-Met-Leu-Phe	Sigma-Aldrich	F3506
PE anticorpo anti-CD203c humano (E-NPP3)	BioLegend	324606
Cloreto	de potássio Sigma-Aldrich	P9541
Camundongo Purificado Anti-IgE Humano	BD Biosciences	555857
IL-3 Humano Recombinante	R & D Systems	203-IL
Fluido de Bainha	BD Biosciences	342003
Cloreto de Sódio	Sigma-Aldrich	S3014
TUBE 9 mL LH Heparina de Lítio	Greiner Bio-One	455084
Tween 20	Sigma-Aldrich	P1379

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