Um grande modelo animal para hipertensão pulmonar e falha ventricular direita: Ligação da Artéria Pulmonar Esquerda e Banda de Artéria Pulmonar Principal Progressiva em Ovelhas

Resumo

Este manuscrito descreve a técnica cirúrgica e a abordagem experimental para desenvolver uma severa sobrecarga de pressão ventricular direita para modelar seus fenótipos adaptativos e mal-dados.

Resumo

A falha ventricular direita descompensada (RVF) na hipertensão pulmonar (AP) é fatal, com opções limitadas de tratamento médico. Desenvolver e testar novas terapêuticas para PH requer um modelo animal de grande porte clinicamente relevante de maior resistência vascular pulmonar e RVF. Este manuscrito discute o mais recente desenvolvimento do modelo ph-RVF ovino publicado anteriormente que utiliza a ligadura da artéria pulmonar esquerda (PA) e a oclusão principal do PA. Este modelo de PH-RVF é uma plataforma versátil para controlar não apenas a gravidade da doença, mas também a resposta fenotípica do RV.

Ovinos adultos (60-80 kg) foram submetidos à ligadura esquerda pa (LPA), colocação do manguito pa principal e inserção do monitor de pressão rv. O manguito pa e o monitor de pressão rv foram conectados a portas subcutâneas. Os sujeitos foram submetidos a banda progressiva de PA duas vezes por semana durante 9 semanas com medidas sequenciais de pressão de RV, pressões de manguitos pa e gás sanguíneo venoso misto (SvO2). Na iniciação e ponto final deste modelo, a função ventricular e as dimensões foram avaliadas por meio da ecocardiografia. Em um grupo representativo de 12 indivíduos animais, a pressão média e sistólica da RV aumentou de 28 ± 5 e 57 ± 7 mmHg na semana 1, respectivamente, para 44 ± 7 e 93 ± 18 mmHg (média ± desvio padrão) na semana 9. A ecocardiografia demonstrou achados característicos de PH-RVF, notadamente dilatação de RV, aumento da espessura da parede e inclinação septal. A tendência longitudinal da pressão do manguito _SvO2 e pa demonstra que a taxa de banda de PA pode ser titulada para provocar fenótipos de RV variados. Uma estratégia mais rápida de banda de PA levou a um declínio vertiginoso no _SvO2 < 65%, indicando a descompensação do RV, enquanto uma estratégia mais lenta e mais acelerada levou à manutenção do SvO2 fisiológico em 70%-80%. Um animal que experimentou a estratégia acelerada desenvolveu vários litros de derrame pleural e ascites na semana 9. Este modelo crônico de PH-RVF fornece uma ferramenta valiosa para estudar mecanismos moleculares, desenvolver biomarcadores diagnósticos e permitir a inovação terapêutica para gerenciar a adaptação e a má adaptação do RV a partir de PH.

Introdução

A falha ventricular direita descompensada (RV) é a causa predominante de morbidade e mortalidade para pacientes com hipertensão pulmonar (AP). A falha do RV é responsável por mais de 50% das internações em pacientes com PH e é uma causa comum de morte nessa população ^{de pacientes1,2}. Embora os tratamentos médicos atuais para a AP possam fornecer medidas temporizantes, eles não revertem a progressão da doença. Como tal, o único tratamento a longo prazo é o transplante de pulmão. Para explorar e testar novos tratamentos médicos e intervenções para PH e RVF, é necessário um modelo animal clinicamente relevante para recapitular a fisiopatologia complexa da doença. Em particular, há uma grande necessidade clínica de desenvolver terapêutica direcionada a RV para pacientes com PH para melhorar a função de RV. Até o momento, a maioria dos estudos em animais publicados sobre disfunção de PH e RV tem se apoiado em pequenos mamíferos, como camundongos e ^ratos3. Por outro lado, houve apenas um punhado de grandes modelos animais para estudar a doença e a fisiopatologia rv de pós-carga anormal4,5,6,7. Além disso, nenhum dos modelos animais de grande porte publicados anteriormente incluem descrições de procedimentos experimentais para titulação controlada da gravidade da doença que diferencialmente leva a fenótipos compensados versus descompensados de falha de RV. Um modelo animal de PH que pode ser titulado para induzir falha de RV aguda e crônica com diferentes graus de compensação é necessário para estudar mecanismos de doença e desenvolver, testar e traduzir novos diagnósticos e terapêuticas para PH e RVF na prática clínica. Tal modelo em um animal grande é especialmente valioso para o desenvolvimento de dispositivos de suporte circulatório ^mecânico8.

Aqui, ^{é apresentado um} modelo de PH-RVF animal crônico e grande utilizando ligadura pulmonar esquerda (PA) e banda progressiva de AF principal em ovinos adultos^. A ligadura da PA esquerda (LPA) aumenta a resistência vascular pulmonar e diminui a capacitância de ^PA11,12. A abordagem progressiva de banda de AF permite a titulação precisa da gravidade da doença e adaptação do RV. Esta plataforma também pode ser prontamente utilizada para investigação longitudinal da progressão da doença em direção à descompensação do RV. Os procedimentos e processos necessários para a execução desse modelo são apresentados como um recurso para pesquisadores interessados em uma grande plataforma animal para desenvolver novos tratamentos para PH e RVF.

Protocolo

O Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Centro Médico da Universidade Vanderbilt aprovou o protocolo. Os procedimentos descritos foram conduzidos de acordo com o Guia do Conselho Nacional de Pesquisa dos EUA para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório, 8ª edição. A visão geral e a linha do tempo do procedimento experimental estão previstas na Figura 1. A Tabela Suplementar 1 descreve o sexo, o peso, a raça, a origem das ovelhas e outras informações relevantes que podem ser úteis para fins de reprodutibilidade.

1. Um dia antes da cirurgia, preparação do animal

1. Reter alimentos por 24-40 h antes do procedimento cirúrgico para descomprimir o rúsco do animal.
2. Aplique um patch de fentanil de 50 μg/h em uma área de corte no dorso da ovelha 12 h antes do procedimento. Limpe a área com clorexidina para remover resíduos de óleo de lanolina antes da aplicação do patch. Cubra e proteja o patch com um curativo tubular elástico.

2. Dia da cirurgia, etapas pré-operatórias na sala de preparação

1. Administre tiletamina/zolazepam intramuscularmente (2,2-5 mg/kg) e entregue 1%-3% de isoflurane misturado com 80%-100% de oxigênio através de uma máscara facial para induzir anestesia.
2. Posicione o supino de ovelhas sobre a mesa de preparação e segure suas pernas.
3. Entubar com tubo endotraqueal de 10 mm e iniciar ventilação mecânica sob o modo de controle de volume (volume de maré, TV = 10 mL/kg, taxa respiratória, RR = 15 respirações por minuto).
4. Raspe o campo cirúrgico do pescoço da ovelha até o abdômen superior, conforme detalhado abaixo.
   1. Raspe o pescoço anterior da ovelha para expor a pele sobrevoando as veias jugulares para cateterismo venoso central (ver passo 3.7).
   2. Raspe o tórax anterolateral bilateralmente em preparação para a toracotomia (ver passo 4.1).
   3. Raspe o lado esquerdo do tronco do peito para trás (ou seja, tão dorsalmente quanto a mesa permitirá com o sujeito na posição supina), e da mama ao flanco traseiro caudalmente, em preparação para implantação de portas subcutâneas (ver passos 4.12-4.15).
5. Insira um angiocateter de 20 G na artéria auricular para monitoramento da pressão arterial e amostragem de gás arterial.
6. Coloque um tubo de silicone com diâmetro interno de 3/8"-1/2" para descompressão de rumen. A sonda orogástrica permanecerá no rúsco durante todo o procedimento.
7. Transporte o animal da sala de preparação pré-operatória para a suíte cirúrgica.

3. Dia de cirurgia, etapas pré-operatórias na suíte de operação

1. Reconecte as ovelhas ao ventilador na suíte cirúrgica, e continue a ventilação no mesmo ajuste na etapa 2.3 (isoflurane 1%-3%, TV = 10 mL/kg, RR = 15 respirações por minuto)
2. Conecte os sensores de oximetria de pulso (_SpO2), pressão arterial, temperatura, capnógrafo de marés finais e eletrocardiograma (ECG) ao monitor anestésico.
3. Conecte os sensores para sinais vitais ao animal.
   1. Coloque o oxímetro de pulso na língua do animal.
   2. Coloque a sonda de temperatura no reto.
   3. Conecte sondas de eletrocardiograma de 3 chumbo: Coloque o chumbo vermelho na perna traseira esquerda, o chumbo branco na perna dianteira direita e o chumbo preto na perna anterior esquerda.
   4. Conecte a extremidade de luer macho da torneira a três ao angiocateter da artéria auricular e conecte a extremidade feminina oposta à extremidade transdutor de pressão para monitoramento da linha arterial usando um tubo de pressão de tamanho apropriado.
      1. Alinhe o transdutor ao nível da tabela de operação.
      2. Abra a torneira de três vias no transdutor.
      3. Role o botão principal do monitor de sinais vitais para destacar o canal de pressão arterial e, em seguida, pressione o botão para selecionar o canal.
      4. Selecione ZERO IBP para zerar o transdutor.
   5. Conecte a conexão luer masculina da linha de monitor de capnografia à conexão luer feminina no tubo do ventilador para monitorar o _CO2 de maré final.
4. Configure as bombas intravenosas para administração contínua de fluidos e suporte inotrópico ou vasopressor.
   1. Perfure o septo no saco salino com o conjunto de administração IV. Certifique-se de que a tubulação IV está presa antes de perfurar o saco para evitar derramamento.
   2. Alinhe e encaixe a tubulação do conjunto de administração IV na bomba de rolo IV e verifique se a direção especificada na bomba corresponde à direção da administração do fluido.
      NOTA: Certifique-se de que o conjunto de administração IV é compatível com a bomba IV.
   3. Ligue a bomba e especifique o PRIME para remover todo o ar da linha.
5. Posicione as ovelhas para o procedimento cirúrgico.
   1. Da posição supina, gire as ovelhas para uma posição parcial lateral lateral decúbito.
   2. Fixar o pé dianteiro direito para baixo e fixar o pé dianteiro esquerdo enquanto retrava-o cefaleia e lateral com corda ou alças atraumáticas.
   3. Realize a ecocardiografia transtorácica para avaliação da linha de base da anatomia e função ventriculares. A ultrassonografia também é útil para determinar o espaço intercostal ideal que facilita o acesso cirúrgico tanto à artéria pulmonar principal quanto à artéria pulmonar esquerda.
6. Limpe o campo cirúrgico livre de sujeira e outros contaminantes usando sabão ou escova de esfregar. Prepare o pescoço e o peito com solução de clorexidina ou betadina e coloque o campo cirúrgico de forma estéril.
7. Usando orientação de ultrassom ou pontos de referência anatômicos, acesse a veia jugular interna esquerda ou direita usando uma agulha de localizador ou angiocato. Utilizando a técnica Seldinger, insira um cateter venoso central de 7-lúmen triplo-lúmen na veia jugular interna para acesso intravenoso e monitoramento de pressão venosa central.
   1. Use a porta proximal para monitoramento de pressão e porta distal para administração de fluidos e medicamentos.
8. Administre 20 mg/kg de cefazolina e 5 mg/kg de enrofloxacina por via intravenosa. Repita a dosagem de cefazolina a cada 2-4 horas durante o procedimento.
9. Administre um bolus de 500 mL de solução salina normal para aumentar a pré-carga antes da cirurgia. Inicie uma taxa de fluido intravenoso de manutenção de 15 mL/kg/h.

4. Procedimento operacional

1. Realize uma mini-toracotomia poupadora muscular (comprimento < 8 cm) no quarto espaço intercostal esquerdo para obter exposição mediastinal. Escolha mini-toracotomia para acelerar a recuperação pós-operatória.
   1. Depois de dividir a pele, divida o músculo subjacente (peitoral maior) longitudinalmente ao longo de suas fibras, que correm ligeiramente oblíquos ao espaço intercostal. Coloque um retrátil auto-retentor para espalhar a camada muscular e exponha a parede do peito.
   2. Divida o serratus anterior e o músculo intercostal subjacente no espaço intercostal selecionado, tomando o cuidado de ficar imediatamente cefálico na costela.
   3. Entre no espaço pleural e continue liberando totalmente os músculos intercostais posteriormente em direção à coluna vertebral e anteromedialmente em direção ao esterno para evitar fratura ou luxação inadvertida da costela no esterno. Evite ferimentos nos vasos mamários mediadamente.
   4. Coloque os retentores auto-retentores para abrir o espaço da costela e o tecido mole sobrelado. Use um retrátil Finochietto pequeno ou médio para separar as costelas e um retratedor Tuffier (lâmina retrátil de 5 cm) para sentar perpendicular ao Finochietto dentro do espaço intercostal, que retrai o tecido mole dentro do espaço intercostal para melhorar a exposição.
2. Incisar o pericárdio anterior ao nervo frênico sem feri-lo e criar um poço pericárdico com suturas de seda 2-0 para expor o PA principal e rv. Identifique o apêndice atrial esquerdo dentro da exposição como um marco para o nível da bifurcação do PA.
   1. Avalie a exposição e certifique-se se o espaço intercostal adequado foi inserido. Idealmente, o PA proximal e o apêndice atrial esquerdo são facilmente visíveis diretamente abaixo da incisão, sugerindo que o espaço intercostal ideal foi selecionado para fornecer exposição tanto ao PA principal quanto ao LPA.
   2. Se a exposição for considerada inadequada para alcançar com segurança tanto o PA principal quanto o LPA, não hesite em abrir um espaço intercostal adicional para realizar todas as etapas necessárias da operação; no entanto, isso não será necessário com a seleção de incisão apropriada.
3. Disseca ao redor do PA principal e isole-o com uma fita umbilical. Certifique-se de dissecção posterior adequada para a eventual colocação do oclusão e a sonda de fluxo pa o mais distal possível no PA principal.
   1. Coloque uma sonda de fluxo estéril em uma tigela de água ou soro fisiológico no campo estéril para calibrar o software de aquisição de dados. Entregue a tomada elétrica na outra extremidade para um design não estéril para conectar a sonda ao medidor.
      1. Consulte os documentos complementares para obter detalhes sobre a conexão e calibração da sonda de fluxo e do medidor de fluxo de PA.
   2. Aplique uma quantidade generosa de gel de ultrassom estéril na ranhura da sonda de fluxo PA.
   3. Coloque o forro de silicone na ranhura da sonda de fluxo PA e aplique uma camada adicional de gel de ultrassom no forro.
   4. Coloque a sonda de fluxo PA no PA e adquira leituras de fluxo de PA no medidor de fluxo e na interface de aquisição de dados.
      1. A colocação da sonda de fluxo pa pode causar oclusão parcial do PA que pode diminuir a pré-carga ventricular esquerda e a pressão arterial média. Preste atenção à hemodinâmica durante a aquisição do fluxo de PA.
      2. Verifique a tela do medidor de fluxo para garantir que a força do sinal de fluxo pa seja de 5 barras. Se o medidor exibir menos de 5 barras, certifique-se de um contato adequado entre a sonda de fluxo e a PA principal. Aplique gel de ultrassom adicional, se necessário.
4. Dissecção intra-pericárdica completa de LPA e circunda-a com uma fita umbilical.
   1. Use uma pequena vara de esponja ou retrátil maleável fino para retração caudal do apêndice atrial esquerdo.
      NOTA: A exposição ao LPA é facilitada pela retração caudal do apêndice atrial esquerdo, retração cefáade do PA principal e retração lateral do pericárdio apenas antes de onde o LPA sai do pericárdio.
5. Coloque um oclúlgio vascular de silicone pesado ao redor do PA principal (Figura 2A,B, círculo). O tamanho do oclúldio pode ser ajustado com base no diâmetro da AF; certifique-se de que o ajuste é confortável. Use uma sutura de seda 0 em uma agulha Keith para fixar as extremidades do oclúldio vascular junto com um ponto U. Uma vez fixado ao redor do PA principal, deslize o occlusalmente ao longo do PA principal.
6. Circundegue o PA principal proximal com um dreno de penrose de 1/2" para facilitar a dissecção e reservar espaço para colocar uma sonda de fluxo na cirurgia de re-operatória subsequente. Corte o ralo Penrose para caber solto ao redor do PA e fixar a Penrose para si mesma com uma sutura prolene 4-0 em execução (Figura 2B).
7. Estabeleça uma linha de pressão rv para monitoramento de pressões de RV (Figura 2B, seta branca).
   1. Selecione um local para a linha de pressão RV na parede sem saída do RV. Coloque uma sutura de bolsa de polifileno nãoabsorível 5-0 com penhores em torno do local selecionado e coloque uma armadilha vascular. Faça os candidatos de uma luva cirúrgica estéril.
   2. Prepare a linha de pressão do RV: corte a extremidade masculina da tubulação de pressão estéril de 36'' em um ângulo de 30° para facilitar a inserção através do miocárdio. Use uma gravata de seda 2-0 para marcar a linha de pressão em uma profundidade ideal para colocação dentro do RV.
   3. Usando um bisturi de 11 lâminas, faça uma pequena cardiotomia na parede livre RVOT dentro da sutura de corda de bolsa previamente colocada. Controle o sangramento com pressão manual ou apertando a armadilha na sutura da corda da bolsa.
      NOTA: Obtenha uma biópsia de linha de base da parede livre do RV nesta etapa, amostrando tecido rv dentro da sutura de corda de bolsa. Este local de biópsia pode então servir como o ponto de entrada para a linha de pressão do RV.
   4. Insira e fixe a extremidade de corte da tubulação de pressão no trato de saída do RV (RVOT). Amarre a corda da bolsa e, em seguida, segure a corda da bolsa na tubulação de pressão para fixar a linha de pressão.
8. Estenda a tubulação RVOT conectando uma tubulação de pressão adicional à linha de pressão RVOT.
9. Entregue a tubulação de pressão adicional a um design não estéril para conectar a tubulação a um transdutor de pressão e monitor para a medição da pressão do RV de base. Configure o transdutor de pressão da seguinte forma.
   1. Conecte o luer masculino do conjunto de administração IV ao luer feminino do transdutor.
   2. Conecte a extremidade de luer feminina do tubo de pressão à extremidade masculina do transdutor.
   3. Espetar a administração IV fixada em um saco salino heparinizado (2 UI/mL).
   4. Coloque o saco salino em um saco de pressão e bombeie o saco de pressão para 250-300 mmHg como indicado no medidor.
   5. Prime totalmente a linha liberando a válvula no transdutor, garantindo a des-arejada adequada.
   6. Siga métodos suplementares para calibração transdutor.
10. Depois de dissecar cuidadosamente ao redor do LPA, cerque-o com uma fita umbilical. Ligate o LPA amarrando a fita umbilical. Note a resposta hemodinâmica do animal à ligadura se for relevante para o estudo. Aumente a ventilação minuciosa para compensar o aumento da ventilação do espaço morto criada após a ligadura LPA. Esses ajustes do ventilador atenuam a acidose respiratória.
11. Injete lentamente até 3 mL de soro fisiológico no oclúdio principal do PA para garantir que não haja vazamento enquanto monitora a pressão do RV da linha de pressão RVOT. Uma vez confirmada a resposta do trailer, retire o soro fisiológico instilado.
12. Leve a linha de pressão RVOT e o tubo de oclusão pa para fora do peito um espaço intercostal abaixo da incisão de toracotomia.
13. Formar dois bolsões subdérmicos ao longo da camada fascial no dorso esquerdo das ovelhas tão posteriormente em direção à coluna como viável dentro do campo estéril. Estes servem como locais para portas de moradia (Figura 2C).
14. Usando um puxador de tubo torácico, túnel da linha de pressão RVOT e tubos de oclusão do ocúrio para os locais da porta dorsum esquerda.
15. Proteja tanto a tubulação de oclúdio quanto a linha de pressão rv para as conexões de barb do porto. Ancore o oclundo o ocluante e a tubulação de pressão ao redor dos conectores da porta com laços adicionais. Use o encaixe do conector farpado fornecido para proteger a conexão (Figura 1C). Assento as portas dentro dos bolsos subdérmicos pré-formados.
16. Ancore as portas em três locais ao redor de sua borda até a fáscia subjacente com suturas de polipropileno 3-0 para evitar a migração do porto. Reaproximar o tecido subcutâneo, derme e pele em camadas com suturas de poliglactina 910. Reconfirmar as leituras de pressão através do acesso percutâneo dos portos. Lave a porta RVOT com 5 mL (1000 UI/mL, 5000 unidades) de sódio de heparina.
17. Coloque um tubo torácico de 16 franceses na cavidade pleural esquerda através de uma incisão separada, fixe-o na pele e, em seguida, conecte-se a uma unidade de drenagem de tubos torácicos fechados a uma pressão de -20 cm·_H2O. Coloque um u-stitch desamarrado ao redor do tubo para facilitar o fechamento após a remoção do tubo torácico.
18. Administre um bloqueio nervoso intercostal (0,5-1 mg/kg bupivacaína) para analgesia pós-operatória.
19. Feche a toracotomia com figura de oito, suturas de poliglactina nº 2. Feche a camada muscular peitoral com poliglactina 910. Feche o tecido subcutâneo em camadas de poliglactina 910 e grampeie a pele.
20. Reposicione o animal para a recumência dorsal, retire a sonda orogástrica e, em seguida, descontinua o isoflurane.
21. Continue a ventilação mecânica e os cuidados de suporte até que o pH do sangue arterial > 7,35 e o _pCO2 < 55 mmHg.
22. Extubar quando o animal estiver respirando espontaneamente, levantando a cabeça e mastigando o tubo endotraqueal. Remova o tubo torácico antes da recuperação completa do anestésico. Amarre o ponto U para fechar a incisão do tubo torácico.
23. Transfira o animal para sua gaiola enquanto monitora sua recuperação da anestesia. Certifique-se de que o oxigênio suplementar (3-5 L/min por máscara facial) esteja disponível o tempo todo enquanto as ovelhas permanecem imóveis. Monitore sinais vitais a cada hora durante as primeiras 4h, a cada 8h para as próximas 24 horas, e uma vez por dia depois disso.

5. Recuperação pós-operatória

1. Monitore diariamente os locais de toracotomia e implantação de portas para sinais de infecção. Administre antibiótico de longa duração (ceftiofur, 5 mg/kg intramuscularmente) dentro de 24 horas após o procedimento e a cada 3-4 dias depois disso por 1 semana.
2. Continue o patch de fentanil no pós-operatório por um total de 72 horas. Depois disso, forneça analgesia adicional (por exemplo, meloxicam, 1 mg/kg uma vez por dia intramuscularmente) se o animal continuar a apresentar sinais de dor (ou seja, ranger os dentes, batimentos cardíacos elevados).
3. Remova as suturas externas e grampos de pele 10-14 dias após a cirurgia ou conforme recomendado pela equipe veterinária.
4. Certifique-se de proteção do local do porto contra o animal esfregando ou raspando os locais do porto contra estruturas circundantes usando um curativo tubular (Figura 2D).

6. Banda crônica de PA (9 - 10 semanas)

1. Transfira as ovelhas para um pequeno recinto. Cortar o excesso de lã ao redor das portas implantadas.
2. Limpe as áreas raspadas com 70% de álcool isopropílico. Aplique spray de lidocaína tópico para anestésico local.
3. Prepare dois transdutores de pressão para monitorar as pressões do punho rv e oclusão (Figura 3A).
   1. Para ambos os transdutores: Conecte a extremidade luer feminina da tubulação de pressão (36 ou mais) à extremidade luer masculina do transdutor. Conecte a extremidade luer macho da tubulação de pressão a uma das conexões femininas em uma torneira de três vias. Finalmente, conecte uma agulha Huber de 22 G à extremidade masculina da torneira de três vias.
   2. Para transdutor de pressão rv: Pendure um saco de soro fisiológico heparinizado (2 UI/mL), puna o saco com o conjunto de administração IV e conecte a conexão masculina do conjunto de administração IV à conexão luer feminina do transdutor de pressão rv. Em seguida, pressurize o saco salino (por exemplo, saco de pressão).
   3. Para o transdutor oclúdio: Prime o transdutor e o tubo de pressão totalmente. Coloque uma tampa de luer macho na extremidade luer fêmea do transdutor de pressão para evitar que o fluido da braçadeira vaze de volta para o transdutor.
   4. Conecte ambos os transdutores ao hardware de aquisição de dados usando um cabo ou adaptador apropriado.
4. Calibrar os transdutores conforme especificado no Arquivo Suplementar 1.
5. Clique em Iniciar no canto superior direito da janela de software para começar a gravar o software de aquisição de dados para capturar formas de onda de pressão de punho RV e PA a 400 Hz.
6. Tenha um assistente fornecer leve contenção do animal antes do acesso ao porto. Insira a agulha Huber do transdutor de pressão RV para a porta RV. Conecte uma seringa de 10 mL à torneira de três vias e tente retirar sangue de volta para a seringa da porta rv (Figura 3B).
   1. Se for difícil puxar para trás na seringa, primeiro injete 5-10 mL salina na porta rv para desalojar a fonte de oclusão.
   2. Se o entupimento persistir, insira 2 mg de ativador de plasmininogênio de tecido (tPA) na porta como agente fibrinolítico e deixe-o durante a noite. Verifique no dia seguinte para aspirar o tPA.
7. Uma vez estabelecida a linha de pressão do RV, conecte a agulha Huber do transdutor de punho PA.
8. Capture os valores iniciais das pressões de punho RV e PA (Figura 3C). Observe quaisquer mudanças drásticas em de leituras anteriores.
   1. Se a pressão do manguito e/ou do RV caiu substancialmente da leitura anterior, pode ser um sinal de que o manguito PA está vazando.
   2. Observe outro sinal óbvio de vazamento de manguito pa estudando a forma de onda de manguitos pa. Se a pressão média do punho pa cair a uma taxa perceptível, então há uma grande chance de que a braçadeira esteja vazando.
      NOTA: Verifique se todas as conexões de luer no transdutor de pressão, tubulação e torneira estão apertadas. O conteúdo de fluido altamente pressurizado da braçadeira pa pode fluir para trás e vazar de conexões mais soltas.
      1. Se a braçadeira estiver vazando, determine a extensão do vazamento. Se a taxa de vazamento for lenta, então uma estratégia de banda mais frequente pode superar o vazamento para tornar o modelo da doença ainda eficaz.
9. Injete lentamente 3% de soro fisiológico hipertônico na porta do oclusão, prestando atenção às pressões de RV e punho.
   1. Ajuste a quantidade de injeção com base na gravidade da doença ph desejada e fenótipo de RV. Um aumento semanal da pressão do punho em 100-150 mmHg é um alvo razoável para desenvolver um fenótipo de RV compensativo adaptativo.
   2. Aumentos mais rápidos na pressão do punho (>250 mmHg por semana) provavelmente produzirão um fenótipo derv descompensado.
10. Uma vez que o manguito PA esteja inflado na quantidade desejada, remova a agulha Huber da porta da braçadeira.
11. Obtenha uma amostra de sangue da porta do trailer.
    1. Aspire 10 mL de sangue fora da porta rv de forma estéril e reserve.
    2. Coloque uma nova seringa no lugar da seringa aspirada e aspire o máximo de sangue necessário sem ultrapassar o limite semanal de coleta de sangue de 7,5% do volume sanguíneo total.
    3. Reconecte a seringa original com sangue aspirado e devolva-a através da porta do trailer.
    4. Puxe a alavanca da válvula do transdutor de pressão para lavar a solução salina heparinizada do saco salino para a porta do trailer. Continue lavando até que toda a linha fique clara e incolor.
12. Lave a porta rv com 10 mL de soro fisiológico. Em seguida, lave ainda mais a porta com 5 mL de 1000 U/mL de sódio de heparina.
13. Repita as etapas 6.1-6.12 a cada 1-4 dias durante 9-10 semanas.

Resultados

Um grupo representativo de 12 ovinos é usado para mostrar a eficácia deste modelo para o desenvolvimento de diferentes graus de PH-RVF. Entre essas ovelhas, a pressão média do manguito pa aumentou de 32 ± 20 mmHg na semana 1 para 1002 ± 429 mmHg na semana 9. Isso resultou no aumento das pressões médias e sistólicas do RV de 28 ± 5 e 57 ± 7 mmHg na semana 1, respectivamente, para 44 ± 7 e 93 ± 18 mmHg na semana 9. Além disso, o perfil de pressão do punho pa foi sobreposto à saturação de oxigênio venosa mista (_SvO2

Discussão

O modelo PH-RVF apresentado pode induzir de forma confiável diferentes níveis de gravidade da doença para corresponder aos objetivos da investigação. Duas abordagens diferentes são usadas em combinação para induzir este modelo de doença. Em primeiro lugar, a ligadura LPA serve para aumentar a resistência vascular pulmonar e diminuir a capacitância ^pa11,12, estabelecendo assim o ponto de partida do modelo crônico em um estado de pós-carga de RV já aumentado. Em se...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Garrafa de Irrigação com Cloreto de Sódio 0.9% da Baxter Healthcare, 1000 mL	Medline	BHL2F7124	Cirúrgico Descartável
0,25% Bupivacaína	Hospira Inc	0409-1160-18	Medicação, Intra-Operatório
0,9% Soro Normal, 1000 mL	Baxter Healthcare Corp	0338-0049-04	Medicação, Intra-Operatório
0,9% Solução Salina Normal, 500 mL	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0049-03	Medicação, PH Crônico
16 mm Oclusor de Alta Resistência com tubulação de acionamento	Access Technologies	Aplicador	de Preparação de Pele Descartável Cirúrgico
3-mL	Medline	MDF260400	Almofadas de
preparação de álcool isopropílico descartáveis cirúrgicos 70%	Medline	MDS090670	descartável, PH
crônico Fita adesiva de bandagem	Patterson Veterinary	07-835-7776	descartável e crônica
	PH V. Mueller	NL1400	Instrumento cirúrgico
Pinça de tecido Allis	. Mueller	CH1560	Instrumento cirúrgico
Pinça aórtica, reta (pinça bainbridge)	V. Mueller	SU6001	Instrumento Cirúrgico
Backhaus toalha fórceps	V. Mueller	SU2900	Bolsas para Instrumentos
Cirúrgicos, Infusão: Bolsa de Infusão Novaplus não estéril, 500 mL	Medline	TCV4005H	Descartável, PH Crônico
Porta-agulha esternal Berry	V. Mueller	CH2540	Instrumento Cirúrgico
Lâminas, Eletrodo: Lâmina de Eletrodo, 6,5", com haste de 0,24 cm Medline		VALE15516	Lâminas Cirúrgicas Descartáveis
: Lâmina Cirúrgica Estéril de Aço Inoxidável, Tamanho #10	Medline	Lâminas	Cirúrgicas Descartáveis
: Lâmina Cirúrgica Estéril de Aço Inoxidável, Tamanho #11	Medline	Lâminas	Descartáveis Cirúrgicas
: Lâmina Cirúrgica Estéril de Aço Inoxidável, Tamanho #15	Medline	B-D371215	Cirúrgico Descartável
BNC Macho para BNC Macho Cabo	Digi-Key	415-0198-036	Equipamento
Porta-agulha Castroviejo	V. Mueller	CH8589	Instrumento Cirúrgico
Cefazolin	Apotex Corp	60505-6142-0	Medicação, Ácido
Livre Cristalino Intraoperatório Ceftiofur	Zoetis Inc	54771-5223-1	Medicação,
Dreno Torácico Pós-Operatório, com Sucção Seca, Medline Adulto-Pediátrico		DEKA6000LFH	Passador de
tubo torácico	V. Mueller	CH04189	Instrumento cirúrgico
Sondas de fluxo de confiança para pesquisa (série PAU)	transônico	24PAU	, sonda de fluxo perivascular
Braçadeira de oclusão tangencial Cooley V	. Mueller	CH6572	Instrumento cirúrgico
Hardware de aquisição de dados	ADInstruments	& nbsp; Equipamento PowerLab 16/30
Pinça de aorta DeBakey	V. Mueller	CH7247	Instrumento cirúrgico
Pinça multiuso DeBakey	V. Mueller	CH7276	Pinça
de tecido DeBakey de instrumento cirúrgico, 12' '	V. Mueller	CH5906	Instrumento Cirúrgico
Debakey Pinça de tecido vascular 7 3/4' '	V. Mueller	CH5902	Instrumento Cirúrgico
Debakey fórceps de tecido vascular, 9' '	V. Mueller	CH5904	Instrumento Cirúrgico
Gerador	Eletrocirúrgico Covidien	Tubo	equipamento
, 10 mm	Patterson Veterinary	07-882-9008
Enrofloxacina	Norbrook Laboratories Limited	55529-152-05	Medicação,
adesivo transdérmico de fentanil	Apotex Corp	60505-7007-2	Medicação, pinça de tecido Ferris smith pré-operatória
	V. Mueller	SU2510	Instrumento Cirúrgico
Espalhadores de costela Finochietto, grande	Instrumento Cirúrgico	V. Mueller	CH1220-1
Espalhadores de costela Finochietto, médio	Instrumento Cirúrgico	V. Mueller	CH1215-1
, 1" x 13"	V. Mueller	SU3340	Instrumento Cirúrgico
Flexsteel afastador de fita, 2" x 13"	V. Mueller	SU3346	Instrumento Cirúrgico
Foerster esponja fórceps, curvada	V. Mueller	GL660	Esponjas
: Esponjas de Gaze Estéreis Compatíveis com Raios-X, 16-Ply, 4" x 4"	Medline	PRM21430LFH	Pinça cirúrgica
descartável Gerald-DeBakey	V. Mueller	CH04242	Instrumento cirúrgico
Glassman Allis	V. Mueller	SU6152	Instrumento cirúrgico
Pinça de mosquito Halsted	V. Mueller	SU2702	Instrumento cirúrgico
Harken clamp	V. Mueller	CH6462
de calor de instrumento cirúrgico Bomba	Gaymar/Stryker	Equipamento TP-400
Heparina	Fresenius Kabi,	63323-540-31	Medicação, PH
Crônico Hospira Primary IV Sets, 80"	Patterson Veterinary	07-835-0123
salina hipertônica	Baxter Healthcare Corp.,	0338-0054-03	Medicação,
Agulha Hipodérmica de PH Crônico com Bisel e Parede Regular, 20 G x 1"	Medline	B-D305175Z	Descartável, Cabo de Interface de PH Crônico
, Transdutor Edwards LifeScience para ADInstruments  Amplificador de Ponte	Sistema Fogg	0395-2434	Equipamento
Bomba de Infusão Intravenosa	Heska	Equipamento de bomba de infusão Vet/IV 2.2
Isoflurano	Patterson Veterinary	14043-704-06	Medicação,
braçadeira torácica Kantrowitz pré-operatória, 9-1/2"	V. Mueller	CH1722	Instrumento Cirúrgico
Kelly hemostats	V. Mueller	88-0314	Instrumento Cirúrgico
Lidocaína HCl, 2.46%	PRN Farmacêutico,	49427-434-04	Medicação, Aplicadores
de Múltiplos Clipes Ligaclip PH Crônico por Ethicon	Medline	ETHMCS20	Alça Cirúrgica Descartável
, Vaso, Mini, Vermelho, 2/pk, Estéril	Medline	DYNJVL12	Pinça de toalha cirúrgica descartável
Lorna não perfurante	V. Mueller	SU2937	Instrumento cirúrgico
Tesoura de dissecação Mayo, curvada	V. Mueller	SU1826	Instrumento cirúrgico
Tesoura de dissecação Mayo, reta	V. Mueller	SU1821	Instrumento cirúrgico
Medipore Dress-It Capas de curativo pré-cortadas da 3M	Medline	& nbsp; MMM2955Z	Cirúrgico
Descartável Meloxicam	Patterson Veterinário	14043-909-10	Medicação, Mixter Pós-Operatório
fórceps torácico, 9"	V. Mueller	CH1730-003	Instrumento Cirúrgico
Mosquito hemostatos	V. Mueller	88-0301	Instrumento Cirúrgico
Consoles de Pesquisa Multi-Canal	Equipamento Transônico	T402/T403	, Medidor de Fluxo Perivascular
Kits de Cateterismo Venoso Central Multi-Lumen Medline		ARW45703XP1AH	Monitor Cirúrgico Descartável
de Sinais Vitais Multiparâmetros	Smiths Medical	Agulhas de Equipamento SurgiVet Advisor 3
: Agulha Hipodérmica com Bisel Regular, Estéril, 18 G x 1.5"	Medline	B-D305185Z	Descartável Cirúrgico
No. 3 cabo de faca	V. Mueller	SU1403-001	Instrumento Cirúrgico
No. 7 cabo de faca	V. Mueller	SU1407	Instrumento Cirúrgico
Não-Ventilado Macho Luer Cap	Qosina	13614	Descartável, PH
Crônico Amplificador de Ponte Octal	ADInstruments	FE228
Equipamento Pomada Oftálmica	Akorn Animal Health	59399-162-35	Medicação, Tubo Penrose Pré-Operatório
, 6 mm x 46 cm, 11 mm Plano	Medline	SWD514604H	Cirúrgico Descartável
Perma-Hand Preto Trançado de Seda:  2-0 SH Agulha de Ponto Cônico, Controle de Liberação, 30"	Medline	ETHD8552	Sutura Cirúrgica Descartável
Perma-Hand, Trançada Preta, Tamanho 0, 6 x 30"	Medline	ETHA306H	Sutura Cirúrgica Descartável
Perma-Hand, Trançada Preta, Tamanho 4-0, 12 x 30"	Medline	ETHA303H	Medicamento Cirúrgico Descartável
Fenilefrina	West-Ward	0641-6142-25	Intra-Operatórios
, Medline Adulto		Agulha	Descartável Cirúrgica
Port-A-Cath Huber SWDE7509, Reta, 22 G x 1-1/2"	Medline	AAKM21200724	Descartável, Sutura Monofilamento Crônica
PH PROLENE, Azul, Tamanho 4-0, 36", Braço Duplo, Agulha RB-1 Medline		ETHD7143	Sutura Cirúrgica
Descartável de Polipropileno Polipropileno PROLENE, Azul, Braço Duplo, Agulha RB-1, Tamanho 5-0, 24"	Medline	ETH8555H	Agulhas Cirúrgicas Descartáveis
Regionais de Bloqueio, 22-gauge	Medline	B-D408348Z	Pinça Cirúrgica Descartável
Artéria Amígdala Schnidt	V. Mueller	M01700	Instrumento Cirúrgico
Extrator de grampos de pele	Medline	CND3031	Descartável, PH Crônico
Grampeador de pele 35 de largura, com contador	Medline	STAPLER35W
Esfigmomanômetro	Patterson Veterinary	07-815-0464	Tigela
Esponja de Equipamento	Instrumentos Cirúrgicos	V. Mueller	GE-75
, Lap: Esponja de Lap Estéril Detectável por Raios-X, 18" x 18", 5/Pacote	Medline	MDS241518HH	Esponja Cirúrgica Descartável
, Amendoim: Esponja de Amendoim Estéril Detectável por Raios-X, Pequena, 3/8"	Medline	MDS72038	Toalha Cirúrgica Descartável
Estéril Descartável Deluxe OU Toalha, Azul, 17'' x 27'', 2/Pack	Medline	MDT2168202	Cirúrgica Descartável
Estéril Luer-Lock, 3 mL	Medline	SYR103010Z	Descartável,
PH Crônico Estéril Luer-Lock Seringa, 5 mL	Medline	SYR105010Z	Descartável,
PH Crônico Estéril Equipamento Cirúrgico Sonda Cobre Medline		DYNJE5930	Torneira Cirúrgica Descartável
: Torneira de 3 Vias com Alça na Posição DESLIGADA, Adaptador Rotativo Macho de Colarinho, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Torneira Descartável Cirúrgica
Torneira de 3 Vias com Alça na Posição DESLIGADA, Adaptador Rotativo Encaixe de Colar Macho, 45 PSI	Medline	DYNJSC301	Descartável,
Porta Subcutânea de PH Crônico com Conector de 5 Franceses e Bota Azul Access	Technologies	CP2AC-5NC	supercortada descartável cirúrgica
	V. Mueller	CH2032-S	Surgical Instrumento
Tesoura de dissecação nelson-metzenbaum super cortada Seringas	Instrumentos Cirúrgicos	V. Mueller	CH2025-S
: Seringa Estéril Luer-Lock, 10 mL	Medline	SYR110010Z	Cateter Cirúrgico
Descartável Otorácico, Reto, 28 Fr x 20"	Medline	SWD570549H	Campo
cirúrgico descartável de três quartos	Medline	DYNJP2414H	Tiletamine Descartável Cirúrgico
+ Zolazepam	Zoetis Inc	54771-9050-1	Medicação, Conjunto de
Torniquete TourniKwik Pré-Operatório com Quatro Tubos de 7,5" de Cor Bronze e 1 Laço, 12	French Medline	Clipe
Transdutor	CVR79013 Edwards LifeScience	TCLIP05
Equipamento Trigger Aneroid Gauge (Esfigmomanômetro)	Patterson Veterinary	07-815-0464	Kits
Transdutor de Pressão Descartáveis TruWave da Edwards Lifesciences	Medline	VSYPX260	Cirúrgico Descartável e Crônico PH
TS420 Equipamento	Transônico	TS420	Medidor de Fluxo Perivascular
, Sucção: Tubo de Sucção Universal Estéril com Conectores Retos com Nervuras, 1/4" x 12'Medline		OR612	Tubulação Descartável Cirúrgica
: Tubulação de Monitoramento de Pressão com Luer Lock Macho Fixo e Encaixe Fêmea, Baixa Pressão, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Tubulação Descartável Cirúrgica
: Tubulação de Monitoramento de Pressão com Luer Lock Macho Fixo e Encaixe Fêmea, Baixa Pressão, 72" L	Medline	DYNJPMTBG72MF	Descartável,
Retentor de Curativo Elástico Tubular	Medline	DERGL711	Descartável, Chronic PH
Tuffier Ribor Instrumento	Cirúrgico	V. Mueller	CD1101
Tygon E-3603 Tubos Flexíveis	Fisher Scientific	14-171-227	Retior Cirúrgico Descartável
U.S.A	V. Mueller	SU3660
Fita Umbilical de Instrumento Cirúrgico, Algodão, 3-Fios, 1/8 x 36"	Medline	ETHU12TH	Lápis Descartável Cirúrgico
Valleylab Botão Interruptor	Medline	VALE2516H	Cirúrgico Descartável
Vanderbilt fórceps de vasos profundos	V. Mueller	CH1687	Instrumento Cirúrgico
de Anestesia Veterinária	Midmark	Equipamento Matrx VMC
Ventilador de Anestesia Veterinária	Hallowell EMC&	nbsp; Modelo 2000	Equipamento
Vicryl: Vicryl Revestido Não Tingido 0 CT-1 36" Sutura	Medline	ETHVCP946H	Vicryl Descartável Cirúrgico
Vicryl Revestido Não Tingido 2 TP-1 Taper 54" Sutura	Medline	ETHVCP880T	Vicryl Descartável Cirúrgico
: Vicryl Revestido Não Tingido 2-0 CT-1 18" Sutura	Medline	ETHVCP739D	Descartável Cirúrgico
, 10-3/8"	V. Mueller	CH2427	Instrumento Cirúrgico
Vital suporte de agulha mayo-hegar, 7-1/4"	V. Mueller	CH2417	Instrumento Cirúrgico
Tesoura de dissecação Vital metzenbaum, 14' '	V. Mueller	CH2009	Instrumento Cirúrgico
Tesoura de dissecação Vital metzenbaum, 9"	V. Mueller	CH2006	Instrumento Cirúrgico
Porta-agulha Vital ryder, 9"	V. Mueller	CH2510	Instrumento Cirúrgico
Yankauer, Ponta de Lâmpada: Yankauer Rígido Estéril com Ponta de Lâmpada, Sem Ventilação	Medline	DYND50130	Descartável Cirúrgico

OC-16HD Pinça Adson VB-D371210B-D371211 descartável cirúrgico Equipamento endotraqueal do Force FX-C descartável cirúrgica intraoperatório Afastador de fita Flexsteel para de Gaze para Instrumento Cirúrgico Terapia Solução descartável cirúrgica 3%, Eletrodos de Retorno de Paciente Polihesivos para Cirúrgico Descartável de Esponja para Seringa : Tesoura de dissecação de metzenbaum para de Descartável Cirúrgico de Módulo de Fluxo Perivascular , Tubo de de PH Crônico Máquina : Porta-agulhas de madeira Vital