Doenças hepáticas são induzidas por muitas causas que promovem fibrose ou cirrose. O transplante é a única opção para recuperar a saúde. No entanto, dada a escassez de órgãos transplantáveis, alternativas devem ser exploradas. Nossa pesquisa propõe a implantação de andaimes de colágeno no tecido hepático a partir de um modelo animal.
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Artigo de método
Implantação de andaimes de matriz de colágeno tridimensional como estratégia de regeneração hepática
Neste artigo
Resumo
Resumo
Doenças hepáticas são a principal causa de morte em todo o mundo. O consumo excessivo de álcool, uma dieta rica em gordura e a infecção pelo vírus da hepatite C promovem fibrose, cirrose e/ou carcinoma hepatocelular. O transplante de fígado é o procedimento clinicamente recomendado para melhorar e prolongar a vida útil dos pacientes em estágios avançados da doença. No entanto, apenas 10% dos transplantes são bem-sucedidos, com disponibilidade de órgãos, procedimentos pré-cirúrgicos e pós-cirúrgicos, e custos elevados diretamente correlacionados com esse resultado. Andaimes de matriz extracelular (ECM) surgiram como uma alternativa para a restauração tecidual. A biocompatibilidade e a aceitação do enxerto são as principais características benéficas desses biomateriais. Embora a capacidade de restaurar o tamanho e a função correta do fígado tenha sido avaliada em modelos de hepatectomia hepática, o uso de andaimes ou algum tipo de suporte para substituir o volume da massa hepática extirpada não foi avaliado.
A hepatectomia parcial foi realizada em um fígado de rato com a xenoimplantação de um andaime de matriz de colágeno (CMS) de um condíle bovino. O tecido do lobo hepático esquerdo foi removido (aproximadamente 40%), e uma proporção igual de CMS foi implantada cirurgicamente. Os testes de função hepática foram avaliados antes e depois do procedimento cirúrgico. Após os dias 3, 14 e 21, os animais foram eutanizados, e foram realizadas avaliações macroscópicas e histópicas. Nos dias 3 e 14, observou-se tecido adiposo em torno do CMS, sem evidência clínica de rejeição ou infecção, assim como a neoformação do vaso e a reabsorção de CMS no dia 21. Havia evidências histológicas de um processo de inflamação insignificante e migração de células adjacentes para o CMS, observadas com a hematoxilina e eosina (H&E) e a coloração tricrômica de Masson. O CMS mostrou-se ter um bom desempenho no tecido hepático e pode ser uma alternativa útil para estudar a regeneração tecidual e a reparação em doenças hepáticas crônicas.
Introdução
O fígado é um dos órgãos mais importantes envolvidos na manutenção da homeostase e da produção deproteínas 1. Infelizmente, a doença hepática é a principal causa de morte em todo o mundo. Em estágios avançados de dano hepático, que incluem cirrose e carcinoma hepatocelular, o transplante de fígado é o procedimento clinicamente recomendado. No entanto, devido à escassez de doadores e à baixa taxa de transplantes bem sucedidos, novas técnicas em engenharia de tecidos (TE) e medicina regenerativa (RM) foram desenvolvidas2,3.
O TE envolve o uso de células-tronco,....
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Protocolo
A presente pesquisa foi aprovada pelo comitê de ética da Faculdade de Medicina (DI/115/2015) da Universidade Nacional Autónoma de México (UNAM) e pelo comitê de ética do Hospital Geral do México (CI/314/15). A instituição cumpre todas as especificações técnicas para a produção, cuidado e uso de animais de laboratório e é legalmente certificada por lei nacional (NOM-062-ZOO-1999). Ratos Wistar machos pesando 150-250 g (6-8 semanas de idade) foram obtidos do Laboratório de Instalações Animais da Faculdade de Medicina da UNAM, para este estudo.
1. Obtenção de andaimes de matriz de colágeno a partir do fêmur bovino
- Obtenha o condíle d....
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Resultados
A desmineralização óssea afeta as propriedades mecânicas do CMS sem alterar a forma original ou a interconexão de seusporos. O CMS pode ter qualquer forma e, portanto, pode ser ajustado ao tamanho e forma do órgão ou tecido selecionado19. No presente protocolo, utilizamos um CMS triangular (Figura 1A-D). Foi utilizado um modelo de rato para avaliar a capacidade regenerativa do xenoimplant CMS no fígado. Embora o fíga.......
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Discussão
O transplante de órgãos é o pilar do tratamento em pacientes com fibrose hepática ou cirrose. Alguns pacientes se beneficiam desse procedimento, tornando necessário fornecer alternativas terapêuticas para os pacientes na lista de espera. A engenharia de tecidos é uma estratégia promissora que emprega andaimes e células com potencial regenerativo2,4,13. A remoção de uma porção do fígado é um passo crítico neste procedimento devid.......
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Divulgações
Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes. Benjamín León-Mancilla é doutorando pelo Programa de Doctorado en Ciencias Biomédicas da Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) e recebeu bolsa DGAPA-UNAM.
Agradecimentos
Os autores agradecem ao pessoal do Laboratório de Instalação Animal da Unidade experimental de Medicina, enfermeira Carolina Baños G. pelo apoio técnico e cirúrgico, Marco E. Gudiño Z. pelo apoio em microfotografias, e Erick Apo pelo apoio na histologia hepática. O Conselho Nacional apoiou esta pesquisa de Ciência e Tecnologia (CONACyT),o número de subvenção SALUD-2016-272579 e o PAPIIT-UNAM TA200515.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Detergente aniônico | Alconox | Z273228 | |
| de biópsia | Leica | 3802453 | |
| Câmera DMX | Nikon | DXM1200F | |
| Centrífuga | Eppendorf | 5424 | |
| Gluconato de clorexidina 4% | BD | 372412 | |
| Óculos de cobertura 25 mm x 40 mm | Corning | 2980-224 | |
| Eosin | Sigma-Aldrich | 200-M | CAS 17372-87-1 |
| Álcool etílico, puro | Sigma-Aldrich | 459836 | CAS 64-17-5 |
| Flunixina meglumida | MSD | Q-0273-035 | |
| Lâminas de vidro 75 mm x 25 mm | Corning | 101081022 | |
| Hematoxilina | Merck | H9627 | CAS 571-28-2 |
| Ácido clorídrico 37% | Merck | 339253 | CAS 7647-01-0 |
| Cetamina | Pisa agropecuária | Q-7833-028 | |
| Microscópio de luz | Nikon | Microphoto-FXA | |
| Microcirurgia estereomicroscópio | Zeiss | OPMI F170 | |
| Microtainer capa amarela | Beckton Dickinson | 365967 | |
| micrótomo | Leica | RM2125 | |
| Animal modelo: ratos Wistar | Universidad Nacional Autó noma de Mé xico | ||
| Nylon 3-0 (Dermalon) | Covidien | 1750-41 | |
| Polipropileno 7-0 | Atramat | SE867/2-60 | |
| Povidona-iodo10% solução cutânea | Diafra SA de CV | 1.37E+86 | |
| Microscópio eletrônico de varredura | Zeiss | DSM-950 | |
| Hidróxido de sódio, pellets | J. T. Baker | 3722-01 | CAS 1310-73-2 |
| Software ACT-1 | Nikon | Ver 2.70 | |
| Estereomicroscópio | Leica | EZ4Stereo 8X-35X | |
| Sterrad 100S | Johnson and Johnson | 99970 | |
| Surgipath paraplast | Leica | 39601006 | |
| Synringe de 1 mL com agulha (27G x 13 mm) | SensiMedical | LAN-078-077 | |
| Processador de tecidos ( Histokinette) | Leica | TP1020 | |
| Tissue-Tek TEC 5 (Incorporador de tecidos) | Sakura Finetek USA | 5229 | |
| Kit de coloração tricrômica | Analisador Sigma-Aldrich | HT15 | |
| Unicell DxC600 | Beckman Coulter | BC 200-10 | |
| Xilazina | Pisa agropecuária | Q-7833-099 | |
| Xileno | Sigma-Aldrich | 534056 | CAS 1330-20-7 |
Referências
- Li, N., Hua, J. Immune cells in liver regeneration. Oncotarget. 8 (2), 3628-3639 (2017).
- Langer, R., Vacanti, J. Tissue Engineering. Science. 260 (5110), 920-926 (1993).
- Lee, H., et al.
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Reimpressões e permissões
