Modelos de roedores de discinesias induzidas por L-dopa são ferramentas inestimáveis para identificar intervenções terapêuticas para atenuar o desenvolvimento ou aliviar as manifestações que surgem devido à administração repetida de L-DOPA. Este protocolo demonstra como induzir e analisar movimentos discinéticos no modelo unilateral de ratos lesionados com 6-OHDA da doença de Parkinson.
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Artigo de método
Avaliação de discinesias induzidas por L-dopa no modelo unilateralmente de ratos lesionados com 6-OHDA da doença de Parkinson
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
As discinesias induzidas por L-dopa (LIDs) referem-se a complicações motoras que surgem da administração prolongada de L-DOPA em pacientes com doença de Parkinson (DP). O padrão mais comum observado na clínica é a discinesia de dose máxima, que consiste em manifestações clínicas de movimentos coreiformes, distônicos e balísticos. O modelo de 6-hidroxidopamina (6-OHDA) de PD em ratos imita várias características dos LIDs. Após administração repetida de L-DOPA, ratos com lesão de 6-OHDA exibem movimentos discinéticos semelhantes (por exemplo, movimentos involuntários anormais, AIMs). Este protocolo demonstra como induzir e analisar AIMs em ratos com lesão de 6-OHDA com depleção dopaminérgica de 90%-95% na via nigrostriatal. A administração repetida (3 semanas) de L-DOPA (5 mg/kg, combinada com 12,5 mg/kg de benserazida) pode induzir o desenvolvimento de AIMs. A análise do curso do tempo revela um aumento significativo nos AIMs em 30-90 min (discinesia de dose máxima). Modelos de roedores de LIDs são uma importante ferramenta pré-clínica para identificar intervenções antidiscinéticas eficazes.
Introdução
O precursor da dopamina L-3,4-di-hidroxifenilalanina (L-DOPA) representa o tratamento mais eficaz para os sintomas motores da doença de Parkinson (DP)1. A terapia com L-DOPA pode melhorar os sintomas motores associados à DP, mas perde a eficácia com o tempo. Flutuações motoras como "flutuação de desgaste" ou "deterioração do fim da dose" manifestam-se clinicamente como uma duração encurtada do efeito de doses únicas de L-DOPA2. Em outros casos, as manifestações clínicas consistem em movimentos lentos de torção e posturas anormais (distonia)3 e ocorrem quando os níveis de dopamina são baixos (disto....
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Protocolo
Todos os experimentos foram realizados de acordo com o Comitê de Ética da Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (CEUA/FFCLRP 18.5.35.59.5).
1. Lesão de 6-OHDA
- Use ratos machos Sprague-Dawley pesando 200-250 g no início dos experimentos (6 semanas). Abrigar os animais (2-3 por gaiola) em condições normais de laboratório (ciclo claro/escuro das 12:12 h, luzes acesas às 06:00 h, instalações com temperatura controlada (22-24 °C), com comida e água disponíveis ad libitum.
NOTA: Uma descrição completa de como gerar ratos graves com lesão de 6-OHDA é descrita em outro lugar
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Resultados
Embora os padrões de MIAs observados em ratos sejam mais simples e limitados em comparação com os observados em humanos e primatas não humanos, este modelo reproduz movimentos hipercinéticos e distônicos induzidos pela administração crônica de L-DOPA. Aqui apresentamos dados coletados de um grupo (n = 10) de ratos lesionados unilateralmente com 6-OHDA tratados cronicamente com L-DOPA (5 mg/kg combinados com 12,5 mg/kg de benserazida) por 3 semanas (segunda a sexta-feira). Observe que os dados apresentados na Figura
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Discussão
Este protocolo demonstra como induzir e analisar AIMs no modelo de DP induzida por microinjeção unilateral de 6-OHDA na MFB. A administração diária crônica de baixas doses de L-DOPA (5 mg/kg, combinada com 12,5 mg/kg de benserazida) produziu o desenvolvimento de MIAs ao longo das 3 semanas de tratamento. A análise temporal revelou um aumento significativo dos AIMs, e a discinesia de dose máxima é observada entre 30 e 90 minutos após a administração de L-DOPA. Os MIAs são movimentos repetitivos e sem propósito que afetam .......
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse.
Agradecimentos
Este trabalho contou com o apoio da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP, bolsa 2017/00003-0). Agradecemos a Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Agradecemos ao Dr. Anthony R. West, ao Dr. Heinz Steiner e ao Dr. Kuei Y. Tseng pelo apoio e orientação.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Hidrobrometo de 6-hidroxidopamina | Sigma-Aldrich, EUA | H6507 | Neurotoxina que produz degeneração de terminais catecolaminérgicos |
| Cloridrato de benzerazida | Sigma | B7283 | Inibidor periférico de dopa-descarboxilase |
| Câmera Bullet IR Turbo HD (HD-TVI) 2.8mm B | HIKVISION | DS-2CE16C0T-IRP | Câmera usada para registrar todo o comportamento |
| Imipramina cloridrato | Alfa Aesar | J63723 | Inibidor do transportador de norepinefrina (NET) usado para proteger os neurônios noradrenérgicos do cloridrato de |
| cetamina | 6-OHDA Ceva Saúde | Animal Anestesia para intervenção cirúrgica | |
| L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA) éster metílico (cloridrato) | Cayman Chemical Company | 16149 | Espelhos precursores |
| de | dopaminaUsado para observar o comportamento dos animais durante experimentos em todas as direções Agulhas | ||
| 0,30 x 13 mm | PrecisionGlide | Agulhas usadas para injetar drogas | |
| Cloreto de sódio (NaCl) | Samtec | ||
| Sal Seringas 1 ml Estéril | BD Plastipak | Seringas usadas para injetar drogas | |
| Cilindros transparentes | Usado para registrar o comportamento animal durante experimentos | ||
| Cloridrato de xilazina | Ceva Saúde Animal | Sedativo, analgésico e relaxante muscular para intervenção cirúrgica |
Referências
- Jenner, P. Molecular mechanisms of L-DOPA-induced dyskinesia. Nature Reviews. Neuroscience. 9 (9), 665-677 (2008).
- Nutt, J. G. Levodopa-induced dyskinesia: review, observations, and speculations. Neurology. 40 (2), 340-345 (1990).
- Luquin, M. R....
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Reimpressões e permissões
