Aqui, apresentamos um protocolo para melhorar o sucesso da fluorescência interfásico na detecção de hibridização in situ em manchas de medula óssea de múltiplos pacientes com mieloma.
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Artigo de método
Fluorescência interfásico in situ Hibridização de Manchas de Medula Óssea de Mieloma Múltiplo
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A fluorescência na detecção de hibridização situ (FISH) é um método indispensável na estratificação de risco genético em mieloma múltiplo (MM), que é uma das malignidades hematológicas mais comuns. A característica de identificação de MM são células plasmáticas malignas acumuladas na medula óssea. Os relatórios de PEIXEs para MM se concentram principalmente em células plasmáticas clonais purificadas ou identificadas, em vez de todas as células nucleadas, classificando-se com contas magnéticas anti-CD138 ou marcando com cadeia de luz de imunoglobulina citoplasmática κ ou λ. Os núcleos interfasos da medula óssea são geralmente obtidos a partir de células frescas da medula óssea. No entanto, o enriquecimento satisfatório das amostras de células plasmáticas requer grandes quantidades de medula óssea anticoagulada de heparina fresca, que não pode ser obtida no caso de difícil extração de medula óssea ou uma torneira seca de medula óssea. Aqui, estabelecemos um novo método para melhorar o sucesso da detecção de PEIXEs em manchas de medula óssea manchadas ou não manchadas. Manchas de medula óssea são mais fáceis de obter do que espécimes de medula óssea anticoagulados.
Introdução
O mieloma múltiplo (MM) é uma doença maligna de células plasmáticas (PC) com forte heterogeneidade biológica e grandes diferenças individuais na eficácia clínica, com períodos de sobrevivência que variam de meses a décadas. Características citogenéticas são indicadores prognósticos importantes da MM. O sistema de estratificação de risco e os tratamentos individualizados baseados em características genéticas tornaram-se temas de intenso interesse em pesquisas clínicas sobre MM1. As aberrações de PCs testados em fluorescência no painel de hibridização situ (FISH) da medula óssea (BM) incluem del 13q14 (RB1), del 17p13 (TP53<....
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Protocolo
Este estudo foi conduzido de acordo com os princípios da Declaração de Helsinque e aprovado pelo Comitê de Ética do Hospital Zhongnan da Universidade de Wuhan (No. 2019065). Os espécimes foram coletados de um paciente mm no Departamento de Hematologia do Hospital Zhongnan da Universidade de Wuhan (China).
1. Preparação das manchas de BM
- Coloque os primeiros 0,2 mL de solução BM em um slide de vidro descartável limpo.
- Espalhe as manchas de BM para espessura uniforme com caudas afiadas, removendo rapidamente o BM. Então, seque naturalmente.
- Cubra os filmes de BM com 1 mL de solução Wright-Giemsa ....
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Resultados
Na avaliação morfológica inicial de um paciente mm recém-diagnosticado, 15% dos PCs em uma mancha de BM foram encontrados com núcleos maiores e mais escuros, juntamente com quantidades maiores de citoplasma do que os PCs normais (Figura 2A). O primeiro tubo de BM anticoagulado de heparina detectado pela técnica do imunofenótipo revelou apenas 2,3% dos PCs aberrantes monoclonais. Cd138 de hidromassagem de contas imunomagnéticas em combinação com FISH ou a técnica cIg-FISH é essencial para obt.......
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Discussão
A aplicação de PEIXEs à estratificação de risco genético em MM é essencial. A parte crítica dos relatórios fish não são todas as células nucleadas, mas os PCs clonais especificamente purificados ou identificados por classificação com contas magnéticas anti-CD138 ou marcação com cadeia de luz de imunoglobulina citoplasmática κ ou λ. Peixes interfásicos após a classificação do PC ou cIg-FISH foram considerados significativos no diagnóstico de MM devido à proporção relativamente menor de PCs no BM. No entanto, esses métodos.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este projeto foi apoiado pelo Fundo de Inovação da WNLO 2018WNLOKF023.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| máquina automática de FISH | Leica Corporação | S500-24 | FINAL Assy Thermobrite 240V |
| DAPI | Abbott Molecular Inc. | 06J49-001 | DAPI Software |
| de Análise de Contracoloração FISH | IMSTAR Corporação | IMSTAR | FISH Software de Análise |
| FISH Sonda | Abbott Molecular Inc. | 05N56-020 | Vysis Locus Specifc Identifer TP53 / CEP 17 FISH Kit |
| Pipeta de volume fixo | Eppendorf China Ltd. | M33768H | 10 microlitros |
| Olympus Corporation | BX53 | Forward Fluorescence | |
| Microscope Karyotype Analysis Software | IMSTAR Software de | Análise de Cariótipo | IMSTAR |
| Microscópio de Luz | Olympus Microscópio | de Luz Frontal | Corporation BX41 |
| NP-40 | Abbott Molecular Inc. | 07J05-001 | NP-40 |
| cremalheira de tingidura plástica da coloração | Guangzhou Kaixiu que troca Co., Ltd. | RSJ-501 | 24 slides |
| tingimento de coloração de plástico | Guangzhou Kaixiu Trading Co., Ltd. | RSJ-516 | 24 slides |
| Cimento de Borracha | Marabu GmbH & Co. KG | FixoGum | Cimento de borracha |
| SSC | Abbott Molecular Inc. | 02J10-032 | 20× Banho |
| de água | Shanghai Boxun Medical Bio-Instrument Co., Ltd. | DK-8D | Banho maria de múltiplas temperaturas |
Referências
- Sonneveld, P., et al. Treatment of multiple myeloma with high-risk cytogenetics: a consensus of the International Myeloma Working Group. Blood. 127, 2955-2962 (2016).
- Radbruch, A., et al. Competence....
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Reimpressões e permissões
