Um modelo de abrasão epitelial para estudar a cicatrização da ferida córnea

Resumo

Aqui, um protocolo para criar uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte é descrito. Este modelo de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto das doenças.

Resumo

A córnea é fundamental para a visão, representando cerca de dois terços do poder refrativo do olho. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é altamente suscetível a uma grande variedade de lesões que podem levar à perda de transparência corneal e eventual cegueira. A cicatrização eficiente da ferida corneal em resposta a essas lesões é fundamental para a manutenção da homeostase da córnea e preservação da transparência corneal e capacidades de refração. Em eventos de cicatrização comprometida da ferida córnea, a córnea torna-se vulnerável a infecções, ulcerações e cicatrizes. Dada a importância fundamental da cicatrização da ferida córnea para a preservação da transparência e visão da córnea, uma melhor compreensão do processo normal de cicatrização da ferida córnea é um pré-requisito para a compreensão da cicatrização prejudicada da ferida córnea associada à infecção e doença. Em direção a este objetivo, modelos de murina de woundarás córneas têm se mostrado úteis para promover nossa compreensão dos mecanismos de cura da ferida córnea que operam sob condições fisiológicas normais. Aqui, um protocolo para criar uma abrasão epitelial córnea central em rato usando uma trefina e um taco de golfe sem cortes é descrito. Neste modelo, uma trefina circular de 2 mm de diâmetro, centrada sobre a córnea, é usada para demarcar a área da ferida. O taco de golfe spud é usado com cuidado para debridar o epitélio e criar uma ferida circular sem danificar a membrana do porão epitelial da córnea. A resposta inflamatória resultante prossegue como uma cascata bem caracterizada de eventos celulares e moleculares que são críticos para a cicatrização eficiente das feridas. Este modelo simples de cura de feridas na córnea é altamente reprodutível e bem publicado e agora está sendo usado para avaliar a cicatrização comprometida da ferida córnea no contexto da doença.

Introdução

A córnea é o anterior transparente um terço do olho. A córnea serve várias funções, incluindo proteger as estruturas internas do olho e formar uma barreira estrutural que protege o olho contra infecções¹. Mais importante, a córnea é fundamental para a visão, fornecendo cerca de dois terços do poder refrativo do olho ^2,3. Crucial para o papel da córnea na visão é a sua transparência. No entanto, devido à sua posição externa, a córnea é exposta a uma grande variedade de lesões no dia-a-dia que podem levar à interrupção de sua função de barreira, perda de transparência e eventual cegueira.....

Protocolo

Todos os protocolos de animais foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Houston e baylor College of Medicine. As diretrizes descritas na declaração da Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) sobre o uso de animais na visão e pesquisa oftalmológica foram seguidas no manuseio e utilização dos camundongos.

1. Preparação

1. Preparação da solução fluoresceína
   1. Prepare 1% de solução de fluoresceína dissolvendo 10 mg de sal de fluoresceína de sódio em 1 mL de soro fisiológico estéril ou salina tamponada de fosfato 1x (PBS).
      NOTA: Prepare a solução d....

Resultados

A Figura 3 mostra um micrografo eletrônico de transmissão de uma ferida córnea criada com o taco de golfe sem corte, demonstrando que a membrana do porão epitelial está de fato intacta após a lesão.

Figura 3: A membrana do porão epitelial permanece intacta após a abrasão da córnea. Micrografia eletrôn.......

Discussão

O objetivo deste artigo de métodos era descrever um protocolo para a criação de uma ferida de abrasão epitelial córnea central no rato usando uma trefina e um taco de golfe sem corte. Este modelo de murina tem sido usado para estudar inflamação córnea e sua contribuição para a cicatrização de feridas. Esse tipo de modelo pode ser usado para estudar mecanismos de cicatrização de feridas córneas em condições fisiológicas normais e em patologias 17,28,29,41,42.^.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Anticorpo anti-CD31	BD Bioscience, Pharmingen	550274
Anticorpo anti-CD41	BD Bioscience, Pharmingen	553847
Anticorpo anti-Ly6G	BD Bioscience, Pharmingen	551459
Albumina de soro bovino (BSA)	ThermoFisher científico	B14
C57BL/6 camundongos	Jackson Laboratories	664
DAPI	Sigma Aldrich	D8417
DeltaVision microscópio de fluorescência de deconvolução de campo amplo	GE Life Sciences
Microscópio de dissecação	Leica microsystems
Electronic Toploading Balances (balança)	Fisher Scientific
Ethanol	ThermoFisher	scientific T038181000CS
Taco de golfe spud	Stephens instruments	S2-1135
Tesoura de curva de íris	Fisher Scientific	31212
Isoflurano	Patterson veterinário	07-893-1389
Cetamina	Patterson veterinário	07-890-8598
Solução salina tamponada com fosfato (PBS)	ThermoFisher científico	AM9624
Sal de fluoresceína de sódio	Sigma Aldrich	46970
Lâmina cirúrgica (lâmina de escape)	Ferramentas de ciência fina	10022-00
Trephine	Integra Miltex	33-31
TritonX -100	Fisher Scientific	50-295-34
Fórceps	de ciência fina	11923-13
Xylazine	Patterson veterinária	07-808-1947

Ferramentas