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Artigo de método

Modelo de perfuração endovascular para hemorragia subaracnóide combinada com ressonância magnética (RM)

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DOI:

10.3791/63150

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16 de dezembro de 2021

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Aqui apresentamos um modelo padronizado de rato SAH, induzido pela perfuração de filamento endovascular, combinado com ressonância magnética (RM) 24 h após a operação para garantir o local correto do sangramento e excluir outras patologias intracranianas relevantes.

Resumo

O modelo de perfuração de filamento endovascular para imitar hemorragia subaracnóide (SAH) é um modelo comumente utilizado - no entanto, a técnica pode causar uma alta taxa de mortalidade, bem como um volume incontrolável de HAS e outras complicações intracranianas, como derrame ou hemorragia intracraniana. Neste protocolo, é apresentado um modelo padronizado de mouse SAH, induzido por perfuração de filamento endovascular, combinado com ressonância magnética (RM) 24 horas após a operação para garantir o local correto do sangramento e excluir outras patologias intracranianas relevantes. Resumidamente, os camundongos C57BL/6J são anestesiados com uma injeção de cetamina/xilazina intraperitoneal (70 mg/16 mg/kg de peso corporal) e colocados em uma posição supina. Após a incisão do pescoço médio, a artéria carótida comum (CCA) e a bifurcação carótida são expostas, e uma sutura de polipropileno monofilament não absorvível 5-0 é inserida de forma retrógrada na artéria carótida externa (ECA) e avançada na artéria carótida comum. Em seguida, o filamento é invagiado na artéria carótida interna (ICA) e empurrado para a frente para perfurar a artéria cerebral anterior (ACA). Após a recuperação da cirurgia, os camundongos passam por uma ressonância magnética 7.0 T 24 h depois. O volume de sangramento pode ser quantificado e classificado via ressonância magnética pós-operatória, permitindo um robusto grupo experimental sah com a opção de realizar novas análises de subgrupo com base na quantidade de sangue.

Introdução

A hemorragia subaracnóide (SAH) é causada pela ruptura de um aneurisma intracraniano e representa uma emergência com risco de vida, associada à morbidade e mortalidade substanciais, representando aproximadamente 5% dos derrames 1,2. Pacientes de HAS apresentam dores de cabeça severas, disfunção neurológica e perturbação progressiva da consciência3. Cerca de 30% dos pacientes da HAS morrem nos primeiros 30 dias após o evento inicialde sangramento 4. Clinicamente, 50% dos pacientes experimentam lesão cerebral retardada (DBI) após lesão cerebral precoce. O DBI é car....

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Protocolo

Os experimentos foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos por Landesamt fuer Gesundheit und Soziales (LaGeSo), Berlim, Alemanha (G0063/18). Neste estudo, foram utilizados camundongos C57Bl/6J masculino (8-12 semanas) com peso de 25 ± 0,286 g (média ± s.e.m.)

1. Preparação animal

  1. Induzir anestesia injetando cetamina (70 mg/kg) e xilazina (16 mg/kg) intraperitoneally. Manter a temperatura normal do corpo, contribuindo para a rápida indução de anestesia profunda. Teste para sedação adequada com um estímulo de dor, como uma pitada de dedo do pé, e verifique a ausência de uma reação.

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Resultados

Mortalidade
Para este estudo, foram submetidos à operação SAH um total de 92 camundongos C57Bl/6J masculinos com idade entre 8 e 12 semanas; nestes, observou-se uma taxa global de mortalidade de 11,9% (n = 12). A mortalidade ocorreu exclusivamente entre as primeiras 6-24 horas após a cirurgia, sugerindo a mortalidade perioperatória, bem como o sangramento da HAS como os fatores contribuintes mais prováveis.

Grau de sangramento SAH
Um total de 50 camundon.......

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Discussão

Em resumo, um modelo padronizado de mouse SAH induzido pela operação de perfuração de filamento endovascular é apresentado com pequena invasão, curto tempo operacional e taxas aceitáveis de mortalidade. A ressonância magnética é realizada 24h no pós-operatório para garantir o local correto do sangramento e a exclusão de outras patologias intracranianas relevantes. Além disso, classificamos diferentes graus de sangramento sah e medimos volumes sanguíneos, permitindo novas análises de subgrupos com base no grau de sangrame.......

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Divulgações

Sem conflitos de interesse

Agradecimentos

A SL foi apoiada pelo Conselho chinês de Bolsas. A KT foi apoiada pela bolsa BIH-MD do Instituto de Saúde de Berlim e do Sonnenfeld-Stiftung. A RX é apoiada pelo Programa de Cientista Clínico BIH-Charité, financiado pela Charité -Universitätsmedizin Berlin e pelo Instituto de Saúde de Berlim. Reconhecemos o apoio da Fundação Alemã de Pesquisa (DFG) e do Fundo de Publicação de Acesso Aberto de Charité - Universitätsmedizin Berlin.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Creme para os olhosBayer815529836Bepanthen
Software de análise de imagensImageJEmpacotado com Java 1.8.0_172
Sutura de ligadura (5-0)SMIPreto de seda USP
Fonte de luz para microscópioZeissCL 6000 LED
CetaminaCP-pharma797-037100 mg/mL
MRIBrukerPharmascan 70/16  7 imagens de ressonância magnética Tesla
adquiridas softwareBrukerBruker Paravision 5.1
Paracetamol (40 mg/mL)bene Arzneimittel4993736
Filamento de prolene (5-0)ErhiconEH7255
RazorWellaHS61
Instrumento cirúrgico (tesoura fina)FST14060-09
Instrumento cirúrgico (fórceps # 1)AESCULAPFM001R
Instrumento cirúrgico (fórceps#2)AESCULAPFD2855R
Instrumento cirúrgico (fórceps#3)HammacherHCS 082-12
Instrumento cirúrgico (porta-agulha)FST91201-13
Instrumento cirúrgico (tesoura de mola Vannas)FST15000-08
MicroscópiocirúrgicoZeissStemi 2000 C
Monitoramento de ventilaçãoStony BrookSmall Animal Monitoring & Sistema de gating
Sutura de ferimento (4-0)ErhiconCB84D
XylavetCP-pharma797-06220 mg / mL

Referências

  1. Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. Spontaneous subarachnoid haemorrhage. The Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).
  2. van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. The Lancet. 369 (9558), 306-318 (2007).
  3. Abraham, M. K., Chang, W. -T. W.

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Reimpressões e permissões

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