Habilidades Microcirúrgicas de Estabelecer Cannulação permanente de veia jugular em ratos para amostragem de sangue serial de droga administrada oralmente

Resumo

Técnicas microcirúrgicas detalhadas são demonstradas para estabelecer um modelo de rato de cannulação vesícula ve jugular de longo prazo para coleta de sangue sequencial no mesmo animal. Parâmetros fisiológicos e hematológicos foram monitorados durante a fase de recuperação do rato. Este modelo foi aplicado para estudar farmacocinética de polifenól administrado oralmente sem induzir o estresse animal.

Resumo

A amostragem de sangue em pequenos animais de laboratório é necessária para a otimização do chumbo farmacêutico, mas pode causar grandes danos e estresse aos animais experimentais, o que pode afetar os resultados. A cannulação venosa jugular (JVC) em ratos é um modelo amplamente utilizado para coleta repetida de sangue, mas requer treinamento adequado de habilidades cirúrgicas e cuidados com animais. Este artigo detalha os procedimentos microcirúrgicos para estabelecer e manter um modelo permanente de ratos JVC com foco específico na colocação e vedação da cânula jugular. A importância do monitoramento fisiológico (por exemplo, peso corporal, alimentação e ingestão de água) e parâmetros hematológicos, foi destacada com resultados apresentados durante 6 dias após a cirurgia durante a recuperação do rato. O perfil de tempo de concentração de plasma de drogas administradas oralmente ácido ellagico foi determinado no modelo de rato JVC.

Introdução

A repetida aquisição de amostras de sangue de pequenos animais de laboratório, como roedores, cobaias e coelhos, é um aspecto importante para a otimização do chumbo farmacêutico e também para a redução do número de animais utilizados na pesquisa ^1,2. O pipeline para o desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico e formulação de medicamentos (por exemplo, vacina) requer acesso a diferentes volumes de sangue, a fim de avaliar sua robustez e desempenho in vivo, como farmacocinética (PK), toxicidade e sensibilidade ^3,4,5

Protocolo

Os procedimentos descritos abaixo foram realizados como parte de um protocolo aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Politécnica do Noroeste (No. 202101117).

1. Preparação pré-operatória (um dia antes da cirurgia)

NOTA: Soluções necessárias: soro fisiológico normal (cloreto de sódio 0,9% w/v), soro fisiológico heparinizado (1% c/v heparina de sódio), solução de bloqueio de cateter, anti-inflamatório não esteroide (NSAID), como solução meloxicam (2 mg/mL).

1. Preparação da solução
   1. Aliquot 200 μL de solução de bloqueio de cateter pré-embalado ....

Resultados

Este protocolo demonstrou minuciosamente como estabelecer um modelo JVC de longo prazo usando habilidades microcirúrgicas para coleta de sangue serial. A Figura 1A mostra os instrumentos cirúrgicos essenciais e materiais utilizados para a realização da cirurgia. A especificação do cateter PU com três marcas azuis também é ilustrada, o que é útil para orientar o pesquisador a colocar a cânula venosa na etapa 3.3., como usar as marcas no cateter pu para guiar a cannulação (

Discussão

Dominar a técnica de cannulação de vasos requer prática significativa e aprender a lição de cada operação. Christakis et al. usando a análise da soma cumulativa (CUSUM), descobriram que um pesquisador precisa praticar 200 ratos durante um período de um ano antes de estar pronto para a avaliação pk de candidatos a medicamentos²⁰. No entanto, o tempo de operação necessário para a cannulação venosa pode ser significativamente reduzido pelo número de ratos realizados^{13,20<.......}

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Tubo de ensaio de 0,5 mL contendo anticoagulante EDTA	Xinkang	N/A	coleta de amostras de sangue para teste de hematologia
Seringa de 0,5*20 mm 1,0 mL	KLMEDICAL	N/	A lavagem ou substituição do fluido por solução salina
Seringa de 0,6*28,5 mm 5,0 mL	HD	N/A	Injeção subcutânea
1,0 mL Seringa com ponta romba (22G)	skillsmodel	S4-PKT22G	Injete a solução salina e colete amostras de sangue através do cateter
Tubo de microcentrífuga estéril de 1,5 mL	Axygen	MCT-150-C-S	Armazene a solução estéril de bloqueio do cateter solução salina heparinizada e solução de meloxicam
1,5  Tubos de microcentrífuga mL	Biosharp	BS-15-M	coleta de sangue
1/2  corte de círculo 5*12 mm agulha de sutura	skillsmodel	S4-FHZ	Rosca a camada muscular para fixar o cateter
3/8 corte circular 7*17 mm agulha de sutura	skillsmodel	S5-FHZ	Sutura a incisão do córtex de rato
6-0 fio de sutura de seda não absorvível estéril	JUNSHENG	N/A	ligadura
75% de álcool médico	HONGSONG	N/A	Desinfecção
Fita adesiva	LIUTAI	N/	A posicionando o rato
Fita de esterilização em autoclave	Biosharp	BS-QT-028	Itens esterilizados por marca
Contador automatizado de células sanguíneas Sysmex		XN-550	Teste de hematologia
Castroviejo micro tesouras	skillsmodel	WA1010	Corte a abertura no vaso sanguíneo
Centrífuga	Thermo Fisher Scientific	75002402	Preparação de plasma
Almofada limpa	Qingjie	N/A	Prepare a área de operação
Bolas de algodão	HC	N/A	Desinfecção e esterilização de feridas
Cotonetes	BEITAGOGO	N/A	Desinfecção
Hemostático	curvoskillsmodel	Ligadura N/A
DN50 Aço inoxidável para ratos, contenção	ratosmodel	S4-RGDQ1	Restringir o movimento dos ratos para facilitar a operação
Ácido elágico	Aladdin	E102710-25g	fenol natural para administração oral
Pinça semi-curvada	skillsmodel	53072	Levantar a camada muscular e o tecido, isolar a veia jugular e amarrar a sutura
Almofada de aquecimento	Warm mate	N/A	prevenindo a perda de calor de animais
Heparina sódica	Solarbio	H8060	anticoagulante
Iodophor	Xidebao	N/A	Limpe a ferida
Tesoura de íris	skillsmodel	54002	Separação sem corte da camada muscular
Isoflurano	RWD	R510-22-16	anestesia
Lâmpada	LEDEMPERORFEEL	N/A	sugery
Cromatografia-espectroscopia de massa líquida	Thermo Fisher Scientific	VQF01-20001/TSQ02-10002	detecção da concentração da droga no plasma
Meloxicam	Hongqiang	N/A	Analgésico
Solução salina normal	KL	N/A	Prepara a solução e protege os vasos sanguíneos do ressecamento
Pet razor	Codos	3180	Raspar o pelo
Solução salina tamponada com fosfato	ZHHC	PW012	Preparação de solução de ácido elágico
Cateter de PU	skillsmodel	RJVC-PU	Canulação da veia jugular
Console de anestesia de operação de pequenos animais	RWD	68620	Estação de trabalho de operação
Frasco de spray	Outra	estação de trabalho asséptica	N/A
Plugue de aço inoxidável (22G)	modelo de habilidades	S4-PKD22G	Obstrua o cateter para garantir a sua vedação
Aço inoxidável trochar	skillsmodel	S$-PKDGZ	Guiar a exteriorização do cateter
Solução de bloqueio estéril	skillsmodel	SK-FB	bloquear o cateter para garantir a sua esterilidade
Agulha de alimentação reta	skillsmodel	N/A	Gavagem oral
Bolsa cirúrgica	BKMAM	N/A	recipiente para esterilização de instrumentos cirúrgicos
Tesoura cirúrgica	skillsmodel	J21070	Corte a incisão na pele do rato
Dilatador de vasos fórceps balanceado	skillsmodel	WA3020	Expanda o vaso sanguíneo e guie a cânula para deslizar em
ZS-MV Máquina de anestesia para pequenos animais	ZSLab	1057003	indução e manutenção da anestesia

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