Avaliação Terapêutica do Transplante de Microbiota Fecal em um Modelo de Camundongo deficiente interleucina

Resumo

A interação da suscetibilidade genética, imunidade mucosa e ambiente microecológico intestinal está envolvida na patogênese da doença inflamatória intestinal (DII). Neste estudo, aplicamos o transplante de microbiota fecal em camundongos deficientes de IL-10 e investigamos seu impacto na inflamação cólon e na função cardíaca.

Resumo

Com o desenvolvimento da microecologia nos últimos anos, a relação entre bactérias intestinais e doença inflamatória intestinal (DIB) tem atraído considerável atenção. O acúmulo de evidências sugere que a microbiota disbiótica desempenha um papel ativo no desencadeamento ou agravamento do processo inflamatório no DIB e que o transplante de microbiota fecal (FMT) é uma estratégia terapêutica atraente, uma vez que a transferência de uma microbiota saudável para o paciente com IBD poderia restaurar a comunicação hospedeira-microbiota adequada. No entanto, os mecanismos moleculares não são claros, e a eficácia da FMT não foi muito bem estabelecida. Assim, são necessários estudos posteriores em modelos animais de DII. Neste método, aplicamos FMT de camundongos C57BL/6J do tipo selvagem em camundongos deficientes il-10, um modelo de colite de camundongos amplamente utilizado. O estudo elabora sobre a coleta de pelotas fecais dos camundongos doadores, fazendo a solução/suspensão fecal, administrando a solução fecal e monitorando a doença. Descobrimos que a FMT atenuou significativamente o comprometimento cardíaco em camundongos eliminatórios IL-10, sublinhando seu potencial terapêutico para o manejo do IBD.

Introdução

O microsistema intestinal humano é extremamente complexo, com mais de 1000 espécies de bactérias no intestino de uma pessoa saudável¹. A flora intestinal está envolvida na manutenção das funções fisiológicas normais do intestino e da resposta imune e tem uma relação inseparável com o corpo humano. O acúmulo de evidências sugere que o microbioma intestinal constitui o último órgão humano, que faz parte do corpo humano, não apenas um grupo de parasitas². Uma relação simbiótica "saudável" entre a microbiota intestinal, seus metabólitos e o sistema imunológico hospedeiro estabelecido no início da vida é fundamental para mant....

Protocolo

Todos os procedimentos realizados em animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Filial Médica da Universidade do Texas em Galveston (Protocolo nº 1512071A).

1. Coleção de pelotas fecais frescas

1. Prepare toalhas de papel estéreis, fórceps de ponta sem corte e tubos cônicos de 50 mL.
   1. Coloque algumas toalhas de papel e fórceps em sacos automáticos separados e autoclave-os a 180 °C em fogo seco por 30 minutos. Use tubos cônicos estéreis também. Pesar os tubos cônicos e anotar seu peso nos tubos.
2. Ligue o armário de biossegurança na sala dos animais.

Resultados

Realizamos doador saudável FMT 3 vezes (uma vez por mês durante 3 meses) em camundongos C57BL/6J de 2 meses de idade (WT) e il-10 knockout mice. Os camundongos C57BL/6J compatíveis com a idade (a diferença de idade deve ser de <2 meses) serviram como doadores fecais e pelotas fecais frescas foram usadas cada vez. Os ensaios do EIA revelaram que o BNP foi significativamente elevado no plasma de camundongos com deficiência de IL-10 e que o doador saudável FMT atenuou significativamente o aumento dos níveis de BNP (

Discussão

Como um tratamento investigativo inovador, a FMT tornou-se um tema quente no tratamento de diversos transtornos nos últimos anos, uma vez que a disbiose da microbiota commensal está implicada na patogênese de múltiplas doenças humanas, incluindo DII, obesidade, diabetes mellitus, autismo, doenças cardíacas e câncer²⁶. Embora o mecanismo não tenha sido determinado, acredita-se que a FMT funcione construindo uma nova flora biológica e prevenindo a perda de bactérias residuais. O método aqui apresent.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Seringa BD, 1 mL	Fisher Scientific	14-829-10F
Pinça de extremidade romba	Knipex	926443
Peptídeo natriurético cerebral Kit EIA	Sigma	RAB0386
camundongos C57BL/6J	Jackson Lab	000664
Centrífuga	Eppendorf	5415R
Tubos cônicos	ThermoFisher	339650
Agulhas de alimentação curvas	Kent Scientific	FNC-20-1.5-2
GLH-115 homogeneizador	Omni International	GLH-115
Glicerol	MilliporeSigma	G5516
Camundongos knockout IL-10	Jackson Lab	004366
Isoflurano	Piramal Cuidados intensivos	NDC66794-017-10
USP solução salina normal	Grainger	6280
Vaporizador	Euthanex Corp.	EZ-108SA