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Antes do início do experimento:
- Obter a aprovação IACUC
- Esterilizar instrumentos cirúrgicos e Q-dicas
I. tecido do doador Colheita
- Euthanize camundongo doador (de acordo com SOP instituição)
- Trás os cabelos molhados da base da orelha com álcool
- Colheita da pele de doadores cortando orelha fora na base
- Tecido lugar na placa sobre o gelo
- Ouvido Split: pinch lados ventral e dorsal do tecido na base da orelha com dente-de-rato fórceps; puxe suavemente o tecido, tecido de flutuação dorsal, superfície interna para baixo, na PBS sobre o gelo; descartar flap ventral colágenas
II. Prepare Recipiente para Transplante
- Rato anestesiar usando procedimento aprovado
- Administrar analgésico para pós-operatório o alívio da dor (ou seja, 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
- Rato lugar na posição lateral
- Executar pitada dedo para garantir animal é suficientemente sedado
- Cabelos molhados com álcool e shave tórax
- Limpe área limpa com algodão embebido em álcool
III. Transplante de pele
- ~ Fazer incisão de 1 cm: pele tenda com ratos dente-forceps e cortar ~ 0,25-0,5 cm abaixo forceps
- Remover a pele de doadores de PBS, coloque em cima de cama de enxerto (com a superfície interna da pele da orelha enfrentando leito do enxerto) e remova o excesso com PBS estéril Q-Tip
- Cuidadosamente aparar a pele do doador, para que o excesso de transplante está terminantemente dentro leito do enxerto (certificando-se que as bordas do enxerto não são enroladas por baixo e que o enxerto não ressaca na pele destinatário tronco)
- Enrole destinatário no curativo estéril (com o segmento de gaze não-adesivo colocado sobre o enxerto de pele)
- Garantir que bandagem não está muito apertado (avaliar a respiração animal) e que as armas são livremente móveis
- Bandage seguro com um único fio de seda 2-0
- Coloque o animal em gaiola limpa (com lâmpada de aquecimento até animal tem suficientemente recuperado da anestesia)
- Monitorar destinatário 1-2/day para sinais de sofrimento e administrar analgésicos, conforme necessário para o alívio da dor
IV. Remoção de bandagem (6-7 dias após o transplante)
- Rato anestesiar usando procedimento aprovado
- Corte e retire fio de seda
- Com uma tesoura sem corte final, corte cuidadosamente através de bandagem (tomando cuidado para não perturbar enxerto) e remova cuidadosamente
- Retorno do mouse para gaiola limpa
- Verifique enxerto ~ 8 horas após a remoção do curativo de sinais de scabbing ou contração. Se presente, enxerto pode ter falhado a irrigar e deve ser considerada uma falha técnica.
- Monitorar diariamente para sinais de rejeição (normalmente definido como ~ 80% de necrose do tecido do doador)
- Transplantes alogênicos de pele geralmente rejeitam entre d8-12 pós-operatório
Dicas úteis V.
- A colheita de tecidos de doadores perto da base da orelha vai: 1) maximizar o tamanho do enxerto, e 2) fornecer uma saliência ventral desigual que irá facilitar a divisão
- Sempre use uma lâmina nova para barbear destinatário
- Se analgésico deve ser dado ip, administrar antes do transplante procedimento para minimizar pós-operatório de manipulação (minimizar chance de interromper o enxerto)
- Se possível, retire as luvas antes de aplicar o curativo. Luvas tendem a se ater a atadura e complicar a aplicação
- Colocação de uma sutura única no final bandage irá minimizar a remoção prematura
- Bandagem wrap tão apertado como permitido e avaliar a respiração ANTES de colocar sutura. Se bandage é muito apertado, animal vai parar de respirar. Se bandage é muito solta, animal irá removê-lo.