Este protocolo apresenta o estabelecimento de parada circulatória hipotérmica profunda em ratos, que pode ser aplicada para investigar a síndrome da resposta inflamatória sistêmica, lesão de isquemia/reperfusão, estresse oxidativo, neuroinflamação, etc.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Estabelecimento de Parada Circulatória Hipotérmica Profunda em Ratos
Neste artigo
Resumo
Resumo
A parada circulatória hipotérmica profunda (DHCA) é rotineiramente aplicada durante cirurgias para cardiopatia congênita complexa e doença do arco aórtico. O presente estudo tem como objetivo fornecer um método para o estabelecimento de DHCA em ratos. Para avaliar o impacto do processo DHCA sobre os sinais vitais, foi utilizado como controle um modelo de revascularização miopulmonar (CEC) de temperatura normal sem parada circulatória. Como esperado, o DHCA levou a uma diminuição significativa da temperatura corporal e da pressão arterial média. A gasometria indicou que o DHCA aumentou os níveis de ácido láctico, mas não influenciou o pH sanguíneo e as concentrações de hemoglobina, hematócrito, Na+, Cl−, K+ e glicose. Além disso, em comparação com os ratos CEC de temperatura normal, os resultados da microscopia eletrônica de transmissão mostraram um leve aumento nos autofagossomos hipocampais nos ratos DHCA.
Introdução
A parada circulatória hipotérmica profunda (DHCA) tem sido utilizada em cirurgia cardíaca desde 19531. A DHCA envolve a redução da temperatura central do paciente para níveis profundamente hipotérmicos (15-22 °C) antes de interromper globalmente o fluxo sanguíneo para o corpo2. A parada circulatória pode fornecer um campo operacional relativamente sem sangue. A hipotermia profunda diminui o metabolismo, principalmente no cérebro e no miocárdio, que é um método eficaz de proteção contra isquemia3. O DHCA é comumente aplicado durante cirurgias para cardiopatia congênita complexa, doença d....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
Os protocolos passaram por uma revisão institucional e receberam aprovação do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais, Hospital Fuwai, Academia Chinesa de Ciências Médicas (FW-2021-0005). Todos os procedimentos experimentais foram realizados de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório publicado pelos Institutos Nacionais de Saúde.
NOTA: Ratos Sprague-Dawley machos (peso: 500-600 g, idade: 12-14 semanas) foram mantidos em condições laboratoriais padrão com livre acesso a alimentos e água. Os ratos foram alocados aleatoriamente em dois grupos (n = 6, cada grupo): o grupo DHCA e o grupo CEC em temperatura norm....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Como grupo controle, os ratos CEC de temperatura normal (NtCPB) sem parada circulatória apresentaram pressão arterial (PAM) média estável e temperatura corporal durante todo o procedimento, enquanto a PAM dos ratos DHCA diminuiu durante a parada cardíaca (p < 0,01, Figura 3A). A temperatura dos ratos DHCA caiu rapidamente durante a fase de resfriamento e se recuperou gradualmente durante a fase de reaquecimento. Ao desmamar os ratos dos circuitos DHCA, a temperatura dos ratos DHC.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
A canulação é o procedimento mais fundamental para o estabelecimento de DHCA em ratos. Antes da canulação, a imersão da artéria com 0,5 mL de lidocaína a 2% facilitará a canulação. Após a canulação, a heparinização com 500 UI/kg de heparina via veia jugular externa é necessária para evitar a formação de microtrombos17. Descobrimos repetidamente que esta dose de heparina pode atingir o objetivo de um tempo de coagulação ativado (TCA) >480 s. O período de reaquecimento é a parte mais difíci.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Os autores agradecem a Liang Zhang por ajudar a coletar os dados de vídeo durante o experimento. Este estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (número de subvenção: 82070479) e os Fundos de Pesquisa Fundamental para as Universidades Centrais (número de subvenção: 3332022128).
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Trocador de calor | Xi' um aparelho médico Co. de Xijing, instrumento | de Dongguan | |
| , Ltd. | Micro-M | ||
| Monitor | Chengdu Techman Co., Ltd | BL-420s | |
| Bomba de Rolo | Changzhou Prefluid Technology Co., Ltd | BL100 | |
| SD Rato | HFK Bioscience Co., Ltd. | / | |
| Sevoflurano | Maruishi Pharmaceutical Co., Ltd | H20150020 | |
| Shaver | Hangzhou Huayuan Pet Products Co., Ltd. | / | |
| Vaporizador | SPACECABS | / | |
| Ventilador | Shanghai Alcott Biotech Co., Ltd | ALC-V8S | |
| Tanque de Água | Maquet Critical Care AB | Jostra HCU20-600 |
Referências
- Lewis, F. J., Taufic, M. Closure of atrial septal defects with the aid of hypothermia; experimental accomplishments and the report of one successful case. Surgery. 33 (1), 52-59 (1953).
- Miler, R. D., et al. Miller's Anesthesia., eighth edition....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
