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Artigo de método

Um modelo heterotópico de camundongo para estudar o transplante laríngeo

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DOI:

10.3791/63619

13 de janeiro de 2023

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

O objetivo deste manuscrito é descrever as etapas microcirúrgicas necessárias para a realização de um transplante laríngeo heterotópico em camundongos. As vantagens deste modelo de camundongo em comparação com outros modelos animais de transplante laríngeo são seu custo-efetividade e a disponibilidade de ensaios e dados imunológicos.

Resumo

O transplante heterotópico laríngeo, embora seja um procedimento tecnicamente desafiador, oferece mais análises científicas e benefícios de custo em comparação com outros modelos animais. Embora descrita pela primeira vez por Shipchandler et al. em 2009, essa técnica não é amplamente utilizada, possivelmente devido às dificuldades em aprender a técnica microcirúrgica e ao tempo necessário para dominá-la. Este artigo descreve detalhadamente as etapas cirúrgicas, bem como possíveis armadilhas a serem evitadas, a fim de incentivar o uso efetivo dessa técnica.

Neste modelo, as artérias carótidas bilaterais da laringe doadora são anastomosadas à artéria carótida receptora e à veia jugular externa, permitindo o fluxo sanguíneo através do enxerto. O fluxo sanguíneo pode ser confirmado no intraoperatório pela visualização do enchimento sanguíneo nas artérias carótidas bilaterais do enxerto, vermelhidão das glândulas tireoidianas do enxerto e sangramento dos microvasos do enxerto. Os elementos cruciais para o sucesso incluem a preservação delicada dos vasos do enxerto, a realização do tamanho correto da arteriotomia e venotomia e o uso do número adequado de suturas nas anastomoses arterial-arterial e arterial-venosa para fixar os vasos sem vazamento e prevenir a oclusão.

Qualquer pessoa pode se tornar proficiente nesse modelo com treinamento suficiente e realizar o procedimento em aproximadamente 3 h. Se realizado com sucesso, esse modelo permite que os estudos imunológicos sejam realizados com facilidade e baixo custo.

Introdução

Para pacientes que sofrem de dano laríngeo irreparável ou câncer de laringe, a laringectomia total é muitas vezes a única opção1. A laringectomia total deixa o paciente sem a capacidade de respirar e falar por conta própria, além de vivenciar sofrimento social e psicológico2. Pacientes com câncer de laringe que necessitam de laringectomia total são excelentes potenciais candidatos para o transplante laríngeo. Embora o transplante laríngeo humano no contexto de dano laríngeo irreparável tenha sido realizado, o alotransplante da laringe é atualmente evitado nesses pacientes devido ao medo de recorrência tumoral, à possibil....

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Protocolo

Esta pesquisa foi realizada em conformidade com o Mayo Clinic Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Camundongos BalbC (10-12 semanas de idade) foram usados como doadores e camundongos C57/BL6 (10-12 semanas de idade) foram usados como receptores porque seus principais complexos de histocompatibilidade, H-2Db e H-2Kb, respectivamente, são imunologicamente incompatíveis e, portanto, a resposta imune ao enxerto pode ser mais estudada. Todos os instrumentos utilizados durante a cirurgia foram esterilizados (ver Figura Suplementar S1 e Figura Suplementar S2), e o campo cirúrgico foi mantido estéril durante todo o protocolo d....

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Resultados

Confirmação do sucesso do transplante
Utilizando o protocolo descrito acima, é possível avaliar o fluxo sanguíneo para o complexo LTE observando a pulsação da artéria carótida doadora após a remoção dos grampos dos vasos. A pulsação é tipicamente visível, e a coloração vermelha imediata da artéria doadora confirma o fluxo sanguíneo ativo (Figura 4A). Se a anastomose não for eficaz, a artéria não terá pulsação, parecerá parcialmente colapsada e será de cor pálida (

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Discussão

A incidência e a prevalência de câncer de laringe aumentaram 12% e 24%, respectivamente, nas últimas três décadas, e muitos desses pacientes foram submetidos à laringectomia para tratamento10. Este procedimento piora significativamente a qualidade de vida de uma pessoa e, portanto, um tratamento alternativo é desejado. O alotransplante composto vascularizado da laringe pode melhorar a capacidade do paciente de respirar e falar; no entanto, a pesquisa ainda é necessária antes que essa técnica possa.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes. As despesas de viagem e de vida de Egehan Salepci para pesquisa foram financiadas pelo Conselho de Pesquisa Científica e Tecnológica da Turquia (TUBITAK).

Agradecimentos

Gostaríamos de agradecer a Randall Raish por sua excelente videografia e assistência de edição.

....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
#1 Clipes de PapelGramposOP-7404Os clipes são moldados manualmente para serem usados como retratores Seringas de
Insulina de 1 cc BD 32941227 G 5/8
Ethicon2870G10-0 10-0
BD 305125
Seringa de Ponta Luer-Lok de 1 em 3 mLBD 
30 G Agulhas Estéreis Padrão Blunt CellinkNZ5300505001
5-0 Sutura MonocrylEthiconY822G
8-0 Sutura de Nylon EthilonEthicon2815G
Adson FórcepsFine Science Tools11027-12Em linha reta, 1 x 2 dentes
Adventícia tesouraS & TSAS-1019 mm, 10 cm, reto
Pinça AngularFerramentas de Belas Ciências00109-1145/11 cm
Lágrimas Artificiais Lubrificante Pomada OftálmicaAkorn Saúde Animal59399-162-35
Bandaid Tecido Ponta do DedoCardinal Healthcare299399
Solução Betadine CotonetesProdutos Purdue67618-153-01
Buprenex InjectionCIII12495-0757-10,3 mg/mL
Braçadeira aplicando pinça sem travaPreciso Cirúrgico & Instrumentos CientíficosASSI. Pinças de Algodão CAF514 cm
Puritan10806-001-PKPinças
DeBakey
Dermabond MiniCardinal Healthcare315999
Placas de DissecaçãoMopec22-444-314
Falcon Placa de Petri Descartável Estéril Corning25373-04135 mm
Tesouras FinasFerramentas de Ciência Fina14029-10Curvado Sharp-Blunt 10 cm
Dourado A5 2-Velocidade Cortador de LâminasOster008OST-78005-140#10
Removedor de Pêlos Fórmula SensívelNair2260000033
Heparina Meitheal Pharmaceuticals71288-4O2-1010.000 unidades USP por 10 mL
IsofluranoPiramal Healthcare66794-013-25
Baixa Temperatura Micro Ponta Fina CauteryBovie MedicalAA90
Mercian Visibilidade Material de FundoSynovis Micro CompaniesVB3Green
Microvascular Aproximator Clamp sem MolduraPrecisão Cirúrgica & AMP; Instrumentos CientíficosASSI. ABB11V0.4-1 mm Diâmetro da embarcação
Kit de máscara facial do mouseXenotecXRK-SPequeno
porta-agulhasS & TC-14 W5,5", 8 mm, 0,4 mm
Press n' SealGlad70441
BisturiBraunBA21010 lâminas
Abraçadeira de Mini Vaso PrecisoCirúrgico & Instrumentos CientíficosASSI. ABB11M.31(8 mm), 3 x 1 mm Rnd. Bl., Par Preto
EstereomicroscópioAlmofadasOlympus SZ61
Fisherbrand06-669-62
Descartáveis EstéreisDynarexDYN4410-CASE
Almofadas de Gaze EstérilDukal1212
Solução Salina Estéril Hospira236173NaCl 0,9%
Luvas cirúrgicas estéreisGammex851_A
fórceps retosFerramentas de ciências finas00108-11pinças
de tecidoCirúrgica e cirúrgica precisa Instrumentos CientíficosASSI. JFLP3de 13,5 cm, 8 mm, 0,3 mm
 Cirúrgico preciso e Instrumentos CientíficosASSI. SDC15RVlâmina de 15 cm, 8 mm, curvada de 7mm
Tesoura de Mola VannasFerramentas de Ciência Fina15000-103 mm de ponta, curvada
Ponta Dilatadora de VasoFine Science Tools00126-11Diâmetro 0,1 mm/Dilatador de vaso angular 10/11 cm
, linha clássicaS& TD-5a.3 W9 mm, 0,3 mm, angular 10
10-0 Agulha de Precisão de Deslizamento de Precisão 309657 de Preparação de Álcool Estéril Folhas de Campo de 11 cm Tesoura de Padrão Vannas

Referências

  1. Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. The New England Journal of Medicine. 344 (22), 1676-1679 (2001).
  2. Hilgers, F. J. M., Ackerstaff, A. H., Aaronson, N. K., Schouwenburg, P. F., Zandwijk, N. Physical and psychosocial consequences of t....

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

Modelo de Transplante em CamundongosTransplante HeterotópicoAnastomose da Artéria CarótidaVeia Jugular ExternaTécnica MicrocirúrgicaEstudos ImunológicosAnastomose VascularPreservação do EnxertoRejeição de Órgãos