Aqui, apresentamos um protocolo para criar xenoenxertos de carcinoma hepatocelular ortotópico com e sem ligadura da artéria hepática e realizamos tomografia por emissão de pósitrons (PET) não invasiva de hipóxia tumoral usando [18 F]Fluoromisonidazol ([18 F]FMISO) e [18 F]Fluorodesoxiglicose ([18F]FDG).
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Artigo de método
Imagem PET/MR não invasiva em um modelo ortotópico de carcinoma hepatocelular em camundongo
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Modelos experimentais pré-clínicos de carcinoma hepatocelular (CHC) que recapitulam a doença humana representam uma ferramenta importante para estudar a tumorigênese e avaliar novas abordagens terapêuticas. A imagem não invasiva de corpo inteiro usando tomografia por emissão de pósitrons (PET) fornece insights críticos sobre as características in vivo dos tecidos no nível molecular em tempo real. Apresentamos aqui um protocolo para a criação de xenoenxertos ortotópicos de CHC com e sem ligadura da artéria hepática (HAL) para induzir hipóxia tumoral e a avaliação de seu metabolismo tumoral in vivo usando [18 F]Fluoromisonidazol ([18 F]FMISO) e [18F]Fluorodesoxiglicose ([18F]FDG) PET/RESSONÂNCIA MAGNÉTICA (MR) de imagem. A hipóxia tumoral pôde ser prontamente visualizada usando o marcador de hipóxia [18 F]FMISO, e verificou-se que a captação de [18 F]FMISO foi maior em camundongos com CHC submetidos a HAL do que no grupo não-HAL, enquanto [18F]FDG não conseguiu distinguir a hipóxia tumoral entre os dois grupos. Os tumores HAL também apresentaram um nível mais alto de expressão do fator induzível por hipóxia (HIF)-1α em resposta à hipóxia. A quantificação dos tumores HAL mostrou um aumento de 2,3 vezes na captação de [18F]FMISO com base na abordagem padronizada de captação de valor (SUV).
Introdução
O carcinoma hepatocelular (CHC) é o sexto câncer mais diagnosticado e a terceira causa mais comum de morte por câncer em todo o mundo, com mais de 900.000 novos casos e 800.000 mortes em 20201. O principal fator de risco é a cirrose, que ocorre como resultado de infecções virais (vírus das hepatites B e C), abuso de álcool, diabetes e esteato-hepatite não alcoólica2. O manejo do CHC é bastante complexo, e várias opções de tratamento estão disponíveis, incluindo ressecção cirúrgica, ablação térmica ou química, transplante, quimioembolização transarterial, radiação e quimioterapia, dependendo do estadiamento da doença
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Protocolo
Todos os estudos em animais foram realizados de acordo com o Comitê sobre o Uso de Animais Vivos no Ensino e Pesquisa (CULATR) no Centro de Pesquisa em Medicina Comparada (CCMR) da Universidade de Hong Kong, um programa credenciado pela Associação para a Avaliação e Acreditação de Cuidados com Animais de Laboratório Internacional (AAALAC). Os animais utilizados no estudo foram fêmeas de camundongos BALB/cAnN-nu (Nude) com idade entre 6-8 semanas, pesados a 20 g ± 2 g. Comida e água foram fornecidas ad libitum.
1. Injeção subcutânea de linhagens celulares de carcinoma hepatocelular humano
N....
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Resultados
Para obter um bloqueio tumoral adequado para o implante ortotópico sucessivo, clones estáveis foram primeiramente gerados por injeção subcutânea de 200 μL de suspensão celular em DPBS (contendo células MHCC97L) no flanco inferior de camundongos nus (Figura 1A). O crescimento do tumor foi monitorado e, quando o tamanho do tumor atingiu 800-1000 mm 3 (cerca de 4 semanas após a injeção), os camundongos foram sacrificados e o bloqueio tumoral resultante foi cortado em aproximadamente .......
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Discussão
Neste estudo, descrevemos os procedimentos para a realização de HAL em xenoenxertos ortotópicos hepáticos de CHC utilizando tumores subcutâneos, juntamente com métodos para o monitoramento não invasivo da hipóxia tumoral em xenoenxertos ortotópicos utilizando [18 F]FMISO e [18F]FDG PET/MR. Nosso interesse está na imagem metabólica de vários modelos de câncer e doença para diagnóstico precoce e avaliação da resposta ao tratamento11,13,14,15
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Divulgações
Os autores não têm conflitos de interesse a divulgar.
Agradecimentos
Reconhecemos o apoio do Fundo Fiduciário Anticâncer de Hong Kong, do Fundo de Pesquisa Colaborativa do Conselho de Bolsas de Pesquisa de Hong Kong (CRF C7018-14E) para os experimentos de imagem de pequenos animais. Também agradecemos o apoio do Molecular Imaging and Medical Cyclotron Center (MIMCC) da Universidade de Hong Kong pelo fornecimento de [18 F]FMISO e [18F]FDG.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| 0,9% de solução salina estéril | BBraun | N/A | 0,9% de cloreto de sódio infusão intravenosa, 500 mL |
| 10# lâmina de bisturi | RWD Life Science Co.,ltd | S31010-01 | Ferramenta de cirurgia animal |
| 10% solução de iodopovidona | Banitore | 6.425.678 | Para desinfecção |
| Agulha 25G com uma seringa de 1 mL | BD PrecisionGlide | N/A | Seringa de 1 mL com agulha 25G para suspensões celulares injeções |
| Seringa de 5 mL | Terumo | SS05L | Seringa de 5 mL Luer Lock |
| 70% Etanol | Merck | 1.07017 | Para desinfecção |
| Contador Automatizado de Células | Invitrogen | AMQAF2000 | Para contagem automatizada de células |
| Buprenorfina | HealthDirect | N/A | Injeção subcutânea (0,05-0,2 mg/kg/12 horas) para analgésico após cirurgia |
| Placa de cultura celular (60 mm de diâmetro) | Thermo Scientific | 150462 | Para processamento de tecido tumoral |
| Centrífuga | Sigma | 3-16KL, rotor de ângulo fixo 12311 | Para coleta de suspensões celulares |
| Centrífuga Tubo cônico | Eppendorf | EP0030122151 | Para coleta de suspensões celulares |
| Meios de cultura (Dulbecco' s Águia modificada' s meio) | Gibco | 10566024 | glicose alta, GlutaMAX™ Paquímetro |
| Digital | RS PRO | 841-2518 | Para medição do tamanho do tumor subcutâneo |
| Calor direto CO2 incubadora | Techcomp Limited | NU5841 | Para cultura de células |
| Calibrador de dose | Biodex | N/A | Atomlab 500 |
| DPBS (Dulbecco' s solução salina tamponada com fosfato) | Gibco | 14287072 | Para lavagem e injeção de células |
| Lubrificante para os olhos | Alcon Duratears | N / A | Pomada lubrificante ocular estéril, 3,5 g |
| Soro bovino fetal (FBS) | Gibco | A4766801 | Usado para uma ampla gama de tipos de células, especialmente linhas celulares sensíveis |
| Fórceps (curvo fino e reto rombudo) | RWD Life Science Co., ltd | F12012-10 & F12011-13 Ferramenta de | cirurgia animal |
| Almofada de aquecimento | ALA Scientific Instruments | N/A | Almofada térmica para camundongos durante a cirurgia |
| Seringa de insulina | Terumo | 10ME2913 | Seringa de insulina de 1 mL com agulha para injeções de radiotraçador Software |
| de fusão InterView | Mediso Versão 3.03 | Software de pós-processamento e análise de imagem | |
| Microscópio invertido | Yu Lung Scientific Co., Ltd | BM-209G | Para visualização da morfologia celular |
| Isoflurano | Chanelle Pharma | N/A | Iso-Vet, anestésico inalatório, 250 mL |
| de cetamina | Alfasan International B.V. | HK-37715 | Solução de injeção de cetamina a 10%, 10 mL |
| Oxigênio medicinal | Linde HKO | 101-HR | gás comprimido, 99,5% de pureza |
| nanoScan PET/MR Scanner | Mediso | N/A | 3 Tesla MR |
| Agulha titular | RWD Life Science Co., ltd | F31026-12 | Ferramenta de cirurgia animal |
| Nucline nanoScan software | Mediso | Versão 3.0 | Scanner software operacional |
| Sutura de nylon (6/0 e 5/0) | Healthy Medical Company Ltd | 000524 & 000526 | Ferramenta de cirurgia animal |
| Penicilina-Estreptomicina | Gibco | 15140122 | Meios de cultura para uma concentração final de 50 a 100 UI / mL de penicilina e 50 a 100 µ g/mL de estreptomicina. |
| Pentabarbital | AlfaMedic | 13003 | Injeção intraperitoneal (330 mg / kg) para induzir a cessação da respiração de camundongos |
| Tesoura afiada | RWD Life Science Co., ltd | S14014-10 Ferramenta de | cirurgia animal |
| Tesoura de mola | RWD Life Science Co., ltd | S11005-09 Ferramenta de | cirurgia animal |
| Solução azul de tripano, 0,4% | Gibco | 15250061 | para contagem de células |
| Ácido tripsina-etilenodiaminotetracético (EDTA, 0,25%), vermelho de fenol | Gibco | 25200072 | Para digestão celular |
| Xilazina | Alfasan International B.V. | HK-56179 | Solução injetável de xilazina a 2%, 30 mL |
Referências
- Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
- Chen, C., Lou, T.
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Reimpressões e permissões
