No presente protocolo, a função de barreira endotelial da glândula submandibular (SMG) foi avaliada por meio da injeção de diferentes marcadores fluorescentes de peso molecular nas veias angulares de modelos animais de teste in vivo sob um microscópio de varredura a laser de dois fótons.
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Artigo de método
In vivo Detecção de Permeabilidade Vascular em Glândula Submandibular de Camundongo
Neste artigo
Resumo
Resumo
A saliva desempenha um papel importante na saúde oral e geral. A função de barreira endotelial intacta dos vasos sanguíneos permite a secreção de saliva, enquanto a disfunção da barreira endotelial está relacionada a muitos distúrbios secretores das glândulas salivares. O presente protocolo descreve um método de detecção de permeabilidade paracelular in vivo para avaliar a função das junções endoteliais apertadas (TJs) em glândulas submandibulares de camundongos (SMG). Primeiro, dextrans marcado com fluorescência com diferentes pesos moleculares (4 kDa, 40 kDa, ou 70 kDa) foram injetados nas veias angulares de camundongos. Posteriormente, o SMG unilateral foi dissecado e fixado no suporte personalizado sob um microscópio de varredura a laser de dois fótons e, em seguida, as imagens foram capturadas para vasos sanguíneos, ácinos e dutos. Utilizando este método, o vazamento dinâmico em tempo real dos traçadores de diferentes tamanhos dos vasos sanguíneos para os lados basais dos ácinos e até mesmo através do epitélio acinar para os ductos foi monitorado para avaliar a alteração da função de barreira endotelial sob condições fisiológicas ou fisiopatológicas.
Introdução
Várias glândulas salivares produzem saliva, que atua principalmente como a primeira linha de defesa contra infecções e ajuda a digestão, desempenhando assim um papel essencial na saúde bucal e geral1. O suprimento de sangue é crucial para a secreção das glândulas salivares, uma vez que fornece constantemente água, eletrólitos e moléculas que formam a saliva primária. A função de barreira endotelial, regulada pelo complexo de junção apertada (TJ), limita estrita e delicadamente a permeação dos capilares, que são altamente permeáveis à água, solutos, proteínas e até mesmo células que se deslocam dos vasos sanguíneos circulantes para os tecidos da....
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Protocolo
Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal do Centro de Ciências da Saúde da Universidade de Pequim e cumpriram o Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório (NIH Publication No. 85-23, revisado em 1996). Camundongos machos do tipo selvagem (WT) na faixa etária de 8-10 semanas foram utilizados para o presente estudo. Os animais experimentais foram cuidadosamente tratados para minimizar sua dor e desconforto.
1. Procedimentos para animais
- Preparar e administrar os anestésicos e traçadores.
- Manter condições estéreis durante todo o estudo e esterilizar ....
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Resultados
Seguindo o protocolo, o SMG unilateral foi anexado a um suporte personalizado, e a glândula foi mantida o mais longe possível do corpo do rato para evitar que a respiração causasse artefatos de movimento. O rápido fluxo dos glóbulos vermelhos (pontos pretos) nos vasos sanguíneos foi observado ao microscópio. Depois de encontrar o campo de tecido sob uma lente ocular, deve-se mudar para manipular o software do microscópio. No grupo controle, ambos os marcadores existiam nos vasos sanguíneos do camundongo SMG. Em particula.......
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Discussão
A manutenção e regulação da função de barreira endotelial são essenciais para a homeostase vascular. As células endoteliais e suas junções intercelulares desempenham um papel crítico na manutenção e controle da integridade vascular12. A força de cisalhamento do fluxo sanguíneo, fatores de crescimento e fatores inflamatórios podem causar alterações na permeabilidade vascular e, assim, participar da ocorrência e desenvolvimento de doenças sistêmicas como hipertensão, diabetes e doenças autoimunes
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (bolsas 31972908, 81991500, 81991502, 81771093 e 81974151) e pela Fundação de Ciências Naturais de Pequim (7202082 de subsídios).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Microscópio de 2 fótons (TCS-SP8 DIVE) | Leica, Alemanha | ||
| 4 kDa dextrano marcado com FITC | Sigma Aldrich | 46944 | |
| 70 kDa rodamina B marcado com dextrano | Sigma Aldrich | R9379 | |
| Separação de tecido rombudo níquel | Bejinghuabo Company | NZW28 | |
| Creme depilatório | Veet | ||
| Seringa estéril descartável | Zhiyu Company | 1 mL | |
| Image J software | National Institutes of Health | ||
| Seringa de insulina | Becton, Dickinson and Company | 0253316 | 1 mL |
| Leica Application Suite X software | Leica Microsystems | ||
| Microtubos | Axygen | MCT-150-C | 1,5 mL |
| Tamponamento fosfato solução salina 1x | Servicebio | G4207-500 | |
| Tesoura de tecido | Bejinghuabo Company | M286-05 | |
| Tribromoetanol | JITIAN Bio | JT0781 |
Referências
- Carpenter, G. H. The secretion, components, and properties of saliva. Annual Review of Food Science and Technology. 4, 267-276 (2013).
- Garrett, J. R. The proper role of nerves in salivary secretion: A review. Journal of Dental Research.
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Reimpressões e permissões
