É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Origem e Rota de Contaminação por Alcaloide Pirrolizidínico em Amostras de Chá

2.6K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/64375

⸱

28 de setembro de 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Key Laboratory of Agri-food Safety of Anhui Province, School of Resource & Environment, Anhui Agricultural University, 2State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, School of Tea and Food Science & Technology, Anhui Agricultural University, 3Key Laboratory of Tea Quality and Safety & Risk Assessment, Tea Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Ministry of Agriculture, 4Department of Molecular Biosciences and Bioengineering, University of Hawaii at Manoa

Neste artigo

Resumo

O presente protocolo descreve a contaminação de alcaloides pirrolizidínicos (APs) em amostras de chá de plantas daninhas produtoras de AP em jardins de chá.

Resumo

Alcaloides pirrolizidínicos tóxicos (APs) são encontrados em amostras de chá, que representam uma ameaça à saúde humana. No entanto, a origem e a via de contaminação por AP em amostras de chá permanecem obscuras. Neste trabalho, um método adsorvente combinado com UPLC-MS/MS foi desenvolvido para determinar 15 APs em plantas daninhas Ageratum conyzoides L., solo rizosférico de A. conyzoides, folhas de chá fresco e amostras de chá seco. As recuperações médias variaram de 78%-111%, com desvios-padrão relativos de 0,33%-14,8%. Quinze pares de A. conyzoides e A. conyzoides rhizospheric amostras de solo e 60 amostras de folhas de chá fresco foram coletadas no jardim de chá Jinzhai na província de Anhui, China, e analisadas para os 15 APs. Nem todos os 15 APs foram detectados em folhas de chá fresco, exceto N-óxido intermediário (ImNO) e senecionina (Sn). O conteúdo de ImNO (34,7 μg/kg) foi maior que o de Sn (9,69 μg/kg). Além disso, tanto o ImNO quanto o Sn concentraram-se nas folhas jovens da planta de chá, enquanto seu conteúdo foi menor nas folhas velhas. Os resultados indicaram que os APs no chá foram transferidos através do caminho de plantas daninhas produtoras de AF - solo e folhas frescas de chá em jardins de chá.

Introdução

Como metabólitos secundários, os alcaloides pirrolizidínicos (APs) protegem as plantas contra herbívoros, insetos e patógenos 1,2. Até o momento, mais de 660 APs e óxidos de AP-N (PANOs) com diferentes estruturas foram encontrados em mais de 6.000 espécies de plantas em todo o mundo 3,4. Plantas produtoras de AP são encontradas principalmente nas famílias Asteraceae, Boraginaceae, Fabaceae e Apocynaceae 5,6. Os APs são facilmente oxidados a alcaloides desidropirrolizidínicos instáveis, que apresentam forte eletrofilicidade e podem atacar nucleófilos como DNA e proteínas, resultando em necrose das células hepáticas, oclusões venosas, cirrose, ascite e outros sintomas 7,8. O principal órgão-alvo da toxicidade da AP é o fígado. Os APs também podem causar toxicidade pulmonar, renal e de outros órgãos e toxicidade mutagênica, carcinogênica e de desenvolvimento 9,10.

Casos de intoxicação humana e animal têm sido relatados em muitos países a partir da ingestão de ervas tradicionais, suplementos ou chás contendo APs ou da contaminação indireta de alimentos como leite, mel ou carne (tóxicos pela ingestão de pastagens contendo APs)11,12,13. As conclusões da Autoridade Europeia para a Segurança dos Alimentos (EFSA) indicam que substâncias como o chá (herbal) são uma importante fonte de exposição humana a APs/PANOs14. Amostras de chá não produzem APs, enquanto plantas produtoras de AF são comumente encontradas em jardins de chá (por exemplo, Emilia sonchifolia, Senecio angulatus e Ageratum conyzoides)15. Suspeitava-se anteriormente que o chá poderia estar contaminado com APs de suas plantas produtoras durante a colheita e processamento. No entanto, APs também foram detectados em algumas folhas de chá escolhidas manualmente (ou seja, sem plantas produtoras de AF), sugerindo que deve haver outras rotas ou fontes de contaminação16. Foi conduzido um experimento de co-cultivo de plantas de trapoeraba (Senecio jacobaea) com plantas de melissa (Melissa officinalis), hortelã-pimenta (Mentha piperita), salsa (Petroselinum crispum), camomila (Matricaria recutita) e nasturtium (Tropaeolum majus), cujos resultados mostraram que APs foram detectados em todas essas plantas17. Verificou-se que os APs são, de fato, transferidos e trocados entre plantas vivas via solo18,19. Van Wyk et al.20 verificaram que o chá de rooibos (Aspalathus linearis) estava severamente contaminado em locais ricos em plantas daninhas e continha APs do mesmo tipo e proporção. No entanto, não foram detectados APs no chá de rooibos em locais livres de plantas daninhas.

Atualmente, a cromatografia líquida de ultra-alta eficiência acoplada à espectrometria de massas (UPLC-MS/MS) com alta seletividade e sensibilidade tem sido amplamente utilizada na análise qualitativa e quantitativa de APs em produtos agrícolas ealimentícios21,22. O método de tratamento da amostra é geralmente composto por extração em fase sólida (SPE) ou limpeza QuEChERS (Quick Easy Cheap Effective Rugged Safe) de extratos de matrizes alimentares complexas, que podem obter a maior sensibilidade possível12,19. No entanto, métodos analíticos robustos que permitam a detecção e quantificação de APs em matrizes complexas como solo, plantas daninhas e folhas de chá fresco ainda estão ausentes.

Este estudo analisou 15 APs em amostras de chá seco, folhas de chá fresco, plantas daninhas e amostras de solo rizosférico de plantas daninhas com UPLC-MS/MS combinado com um método de purificação por adsorvente. Além disso, 15 amostras pareadas de solo rizosférico de plantas daninhas e plantas daninhas e 60 amostras de folhas de chá fresco foram coletadas de cinco pontos de amostragem no jardim de chá Jinzhai na província de Anhui, China, e foram analisadas para 15 APs. Estes resultados podem fornecer um método de levantamento e algumas informações sobre a origem e rota de APs (contaminação) em amostras de chá para garantir a qualidade e segurança do chá.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Protocolo

Para o presente estudo, foram coletadas as seguintes espécies de plantas daninhas: Ludwigia prostrata Roxb., Murdannia triquetra (Wall. ex C. B. Clarke) Bruckn., Ageratum conyzoides L., Chenopodium ambrosioides, Trachelospermum jasminoide (L.) Lem., Ageratum conyzoides L., Emilia sonchifolia (L.) DC, Ageratum conyzoides L. e Crassocephalum crepidioides (Benth.) S. Moore. As folhas de chá fresco foram colhidas da variedade de árvores de chá Longjing 43#, e as amostras de chá seco foram comercialmente disponíveis chá processado de acordo com o processo de fabricação do chá verde (ver Tabela de Materiais).

1. Coleta de amostras

  1. Coletar 40 amostras reais.
    1. Colete 10 ervas daninhas, 10 solos e 10 folhas de chá fresco aleatoriamente de vários jardins de chá.
      OBS: Para o presente estudo, o solo foi amostrado na profundidade de 20 cm com uma quantidade de amostra de 200 g.
    2. Recolha aleatoriamente 10 produtos de chá seco (250 g) de um supermercado.
  2. Coletar amostras de ervas daninhas, solo e folhas de chá fresco para estudar a fonte de contaminação de APs no chá.
    1. Defina cinco pontos de amostragem no mesmo jardim de chá, com três repetições em cada ponto.
    2. Coletar amostras de plantas daninhas de Ageratum conyzoides L. com maior teor de PA comumente encontrado em jardins de chá.
      OBS: A quantidade amostral foi de 250 g para o presente estudo.
    3. Coletar as amostras de solo.
      NOTA: As amostras de solo foram de A. conyzoides rhizospheric na profundidade de 20 cm com uma quantidade de amostra de 200 g.
    4. Colete as folhas de chá fresco de diferentes partes das plantas de chá, incluindo um botão com duas folhas, um botão com três folhas, um botão com quatro folhas e folhas maduras.
      NOTA: A quantidade de amostra foi de 250 g.

2. Tratamento da amostra

  1. Pré-trate as amostras seguindo os passos abaixo.
    1. Triture as amostras secas de chá e solo com um moedor, passe as amostras pulverizadas por uma peneira de 200 malhas e armazene-as a -20 °C.
      NOTA: O chá seco era um produto de chá disponível comercialmente (ver Tabela de Materiais), por isso foi diretamente triturado e peneirado para armazenamento. As amostras de solo (200 g) foram colocadas em local ventilado no escuro para secar ao ar por cerca de uma semana.
    2. Homogeneizar a erva daninha e as folhas de chá fresco com um homogeneizador e armazená-las a -20 °C.
  2. Realizar o tratamento de amostra dos produtos de chá seco, folhas de chá fresco e ervas daninhas.
    1. Pesar 1,00 g de cada amostra (produtos secos de chá, folhas de chá fresco e ervas daninhas) e colocá-lo em tubos de centrífuga de 50 mL.
    2. Adicionar 10 ml de solução de ácido sulfúrico 0,1 mol/L e vórtice durante 2 minutos para extracção em fase sólida (utilizando cartucho SPE, ver Tabela de Materiais) e 1 min para purificação do adsorvente. Realizar extração ultra-sônica23 por 15 min e, em seguida, centrifugar por 10 min a uma velocidade de 9.390 x g à temperatura ambiente.
      NOTA: A potência do oscilador ultra-sônico foi de 290 W, a frequência de oscilação foi de 35 kHz e a temperatura foi ajustada para 30 °C.
    3. Transfira o sobrenadante para um tubo de centrífuga de 50 mL com um conta-gotas de plástico.
    4. Siga as etapas acima para repetir a extração uma vez. Combine os dois sobrenadantes.
      1. Ativar os cartuchos SPE com 5 mL de metanol e 5 mL de água deionizada. Adicionar 10 ml de sobrenadante ao cartucho pré-ativado e efectuar a limpeza da amostra.
      2. Após o nível da solução da amostra atingir a camada superior dos cartuchos, eluir os analitos com 5 mL de solução de ácido fórmico a 1% e, em seguida, 5 mL de metanol. Descarte o eluato.
      3. Eluir com 5 mL de metanol (contendo 0,5% de água de amônia), filtrar o eluato através de um filtro de membrana de 0,22 μm e analisar por UPLC-MS/MS (ver Tabela de Materiais).
    5. Realizar a limpeza da amostra usando adsorventes.
      1. Tomar 2 ml do sobrenadante (passo 2.2.4) num tubo de centrifugação de 10 ml preenchido com os adsorventes de GCB:PSA:C18 (10 mg:20 mg:15 mg, ver Tabela de Materiais), vórtice durante 1 minuto e centrifugar a 9.390 x g durante 8 minutos à temperatura ambiente.
      2. Passar 1 mL do sobrenadante através de um filtro de membrana de 0,22 μm antes da análise por UPLC-MS/MS.
  3. Realizar tratamento das amostras de solo.
    1. Pesar uma amostra de solo de 1,00 g. Colocá-lo num tubo de centrifugação de 50 ml e adicionar 0,1 ml de solução de citrato trissódico 0,1 mol/L (ver Tabela de Materiais) para ajustar o valor de pH do solo para 6,0.
    2. Deixe repousar por 2 minutos e, em seguida, adicione 10 mL de solução de metanol de ácido sulfúrico 0,1 mol/L, vórtice por 2 min e agite por 30 minutos e, em seguida, execute a extração ultra-sônica por 30 min.
    3. Centrifugar a 9.390 x g por 10 min e transferir o sobrenadante para um tubo de centrífuga de 50 mL com conta-gotas de plástico.
    4. Siga os passos acima para repetir a extração e combinar o sobrenadante duas vezes.
      NOTA: O método de purificação foi o mesmo que nas etapas 2.2.5.1 e 2.2.5.2.

3. Análise instrumental

  1. Detectar os 15 PAs em amostras de chá seco, folhas de chá fresco, ervas daninhas e solo (amostras da etapa 2) usando um sistema UPLC-MS/MS disponível comercialmente (2,1 mm x 100 mm, 1,8 μm) (consulte a Tabela de Materiais).
  2. Ajuste a temperatura da coluna para 40 °C, o fluxo para 0,250 mL/min e o volume de injeção para 3 μL.
  3. Definir a fase móvel A: metanol (contendo 0,1% de ácido fórmico + 1 mmol/L de formato de amônio) e a fase móvel B: água (contendo 0,1% de ácido fórmico + 1 mmol/L de formato de amônio).
  4. Defina um procedimento de eluição de gradiente: 10% A de 0,0 min a 0,25 min, 10%-30% A de 0,25 min a 6,0 min, 30%-40% A de 6,0 min a 9,0 min, 40%-98% A de 9,0 min a 9,01 min que foi mantido por 1,9 min e 98%-100% A de 11,0 min a 11,1 min que foi mantido por 2,9 min.
  5. Definir os parâmetros do espectrômetro de massa: modo de ionização, fonte de íons positivos por eletrospray (ESI+); pressão do atomizador, 7,0 bar; tensão capilar, 4,0 kV; fluxo de sopro de volta do furo de cone, 150 L/h; fluxo de gás solvente, 800 L/h; temperatura de dissolução, 400 °C; fluxo de gás de impacto, 0,25 mL/min.

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Resultados

O método otimizado de purificação e análise de adsorventes de 15 APs em amostras de chá seco, folhas de chá fresco, plantas daninhas e solo foi estabelecido e comparado com o método de purificação comumente usado usando o cartucho SPE. Os resultados mostraram que a recuperação dos 15 APs em amostras de chá seco, plantas daninhas e folhas de chá fresco usando o cartucho de SPE foi de 72%-120%, enquanto que com purificação de adsorvente foi de 78%-98% (Figura 1). As recuperações dos 15 APs no ...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Discussão

O presente trabalho foi projetado para desenvolver um método eficaz e sensível para explorar as rotas de contaminação e fontes de APs em amostras de chá, bem como a distribuição de APs em diferentes partes das plantas de chá. No entanto, neste estudo, apenas 15 APs foram separados com sucesso na coluna cromatográfica, o que é um número muito pequeno em comparação com o grande número de alcaloides nas espécies vegetais 3,4. Isso não só foi relacionado às proprieda...

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pela National Natural Scientific Foundation of China (32102244), pelo National Agricultural Products Quality and Safety and Risk Assessment Project (GJFP2021001), pela Natural Scientific Foundation of Anhui Province (19252002) e pelo USDA (HAW05020H).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Acetonitrila (99,9%)Tedia Company,Inc.21115197Nº CAS: 75-05-8
Amônia (25%-28%)Wuxi Zhanwang Reagente Químico Co., Ltd.181210Nº CAS: 1336-21-6
Formato de amônio (97,0%)Anpel Laboratory Technoiogies (xangai)G0860050Nº CAS: 540-69-2
Carbono-GCBCNWB7760030120-400 MESH, 10g. por caixa 
Centrífuga Z 36 HKHERMLEZ36HK30000  rpm (min:10 rpm), Dimensões (L x A x P):  71,5 cm&vezes; 42 cm &vezes; 51 cm
Produto de chá disponível comercialmente Lvming, Qingshan, Luyuchun, Changling, Huixing, Wuyunjian, Heshengchunchá a granelChá verde
Europine N-oxid (EuNO) (98,0%)BioCrick323256Nº CAS:65582-53-8
Europine (UE) (98,0%)BioCrick98222Nº CAS:570-19-4
Formato (98,0%)AladdinE2022005Nº CAS:64-18-6
HC-C18CNWD211006040-63 μ m, caixa 100g.per
Heliotrine (He) (98,0%)BioCrick906426Nº CAS: 303-33-3
Heliotrina-N-óxido (HeNO) (98,0%)BioCrick22581Nº CAS: 6209-65-0
Centrífuga de alta velocidade TG16-WS203158000Máximo: 16000 r/min, 330 &vezes; 390 &vezes; 300 mm (L &vezes; W &vezes; H), Capacidade: 6 e vezes; Coluna
HSS T3Waters186004976ACQUITY UPLC HSS T3 (2.1 × 100 mm 1.8 μ m)
Intermedina (Im) (98,0%)BioCrick114843Nº CAS: 10285-06-0
Óxido de N-intermedino (ImNO) (98,0%)BioCrick340066Nº CAS: 95462-14-9
Jacobina (Jb) (98,0%)BioCrick132282048Nº CAS: 6870-67-3
Óxido de Jacobina-N (JbNO) (98,0%)ChemFacesCFN00461Nº CAS: 38710-25-7
Álcool metílico (99,9%)Tedia Company, Inc.21115100Nº CAS: 67-56-1
PSAAgelaP19-0083340-60 μ m, 60 & 100g.per caixa
Retrorsina (Re) (98,0%)BioCrick5281743Nº CAS: 480-54-6
Retrorsina-N-óxido (ReNO) (98,0%)BioCrick5281734Nº CAS: 15503-86-3
Senecionina (Sc) (98,0%)BioCrick5280906Nº CAS: 130-01-8
Senecionina-N-óxido (ScNO) (98,0%)BioCrick5380876Nº CAS: 13268-67-2
Senecifilina N-óxido (SpNO) (98,0%)BioCrick6442619Nº CAS: 38710-26-8
Senecifilina (Sp) (98,0%)BioCrick5281750Nº CAS: 480-81-9
Senkirkine (Sk) (98,0%)BioCrick5281752Nº CAS: 2318-18-5
SPE PCXAgilent Technologies12108206Cation Mixed Mode, 6 mL
Ácido sulfúrico (97%)Wuxi Zhanwang Chemical Reagent Co., Ltd. 1003019Nº CAS: 7664-93-9
Citrato trissódicoSinpharm Chemical Reagent Co., Ltd.20121009Nº CAS: 6132-04-3
Limpador ultrassônicoSupmileKQ-600BTamanho interno do slot: 500 &vezes; 300 &vezes; 150 mm; Capacidade: 22.5 L
UPLC-xevoTQMSWatersZPLYY-003Analisador de massa de haste tripla de quatro estágios, Waters Alliance 2695/Waters ACQUITY UPLC Sistema de Fase Líquida
Oscilador de termostato de banho de água InstrumentoGuoyuSHY-2AHSTempos de oscilação:  60-300 vezes/min, Faixa de temperatura constante: temperatura ambiente até 100 ° O
de 50 mL

Referências

  1. Schramm, S., Kohler, N., Rozhon, W. Pyrrolizidine alkaloids: Biosynthesis, biological activities and occurrence in crop plants. Molecules. 24 (3), 498(2019).
  2. EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Scientific opinion on pyrrolizidine alkaloids in food and feed. EFSA Journal. 9 (11), 134(2011).
  3. Ma, C., et al. Determination and regulation of hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids in food: A critical review of recent research. Food and Chemical Toxicology. 119, 50-60 (2018).
  4. Keuth, O., Humpf, H. U., Fürst, P. Pyrrolizidine Alkaloids: Analytical Challenges. Encyclopedia of Food Chemistry. Melton, L., Shahidi, F., Varelis, P. 1, Elsevier. 348-355 (2019).
  5. Huang, D. Y., et al. Pyrrolizidine alkaloids and its source analysis in tea. Journal of Food Safety & Quality. 9 (2), 229-236 (2018).
  6. Liang, A. H., Ye, Z. G. General situation of the toxicity researches on Senecio. China Journal of Chinese Materia Medica. 31 (2), 93-97 (2006).
  7. Li, Y. H., et al. Proteomic study of pyrrolizidine alkaloid-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in rats. Chemical Research in Toxicology. 28 (9), 1715-1727 (2015).
  8. Jia, Z. J., et al. Catalytic enantioselective synthesis of a pyrrolizidine-alkaloid-inspired compound collection with antiplasmodial activity. The Journal of Organic Chemistry. 83, 7033-7041 (2018).
  9. Yang, M., et al. First evidence of pyrrolizidine alkaloid N-oxide-induced hepatic sinusoidal obstruction syndrome in humans. Archives of Toxicology. 91 (12), 3913-3925 (2017).
  10. Chen, Z., Huo, J. R. Hepatic veno-occlusive disease associated with toxicity of pyrrolizidine alkaloids in herbal preparations. Netherlands Journal of Medicine. 68 (6), 252-260 (2010).
  11. Mattocks, A. R. Chemistry and Toxicology of Pyrrolizidine Alkaloid. , Academic Press. London, UK. (1986).
  12. Picron, J. F., Herman, M., Van Hoeck, E., Goscinny, S. Analytical strategies for the determination of pyrrolizidine alkaloids in plant based food and examination of the transfer rate during the infusion process. Food Chemistry. 266, 514-523 (2018).
  13. Kowalczyk, E., Kwiatek, K. Application of the sum parameter method for the determination of pyrrolizidine alkaloids in teas. Food Additives & Contaminants: Part A. 37 (4), 622-633 (2020).
  14. EFSA Panel on Contaminants in the Food Chain (CONTAM). Risks for human health related to the presence of pyrrolizidine alkaloids in honey, tea, herbal infusions and food supplements. EFSA Journal. 15 (7), 04908(2017).
  15. Han, H., et al. Pyrrolizidine alkaloids in tea: A review of analytical methods, contamination levels and health risk. Food Science. 42 (17), 255-266 (2021).
  16. Nowak, M., et al. Interspecific transfer of pyrrolizidine alkaloids: An unconsidered source of contaminations of phytopharmaceuticals and plant derived commodities. Food Chemistry. 213, 163-168 (2016).
  17. Selmar, D., et al. Transfer of pyrrolizidine alkaloids between living plants: A disregarded source of contaminations. Environmental Pollution. 248, 456-461 (2019).
  18. Izcara, S., et al. Miniaturized and modified QuEChERS method with mesostructured silica as clean-up sorbent for pyrrolizidine alkaloids determination in aromatic herbs. Food Chemistry. 380, 132189(2022).
  19. Izcara, S., Casado, N., Morante-Zarcero, S., Sierra, I. A miniaturized QuEChERS method combined with ultrahigh liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids in oregano samples. Foods. 9 (9), 1319(2020).
  20. Van Wyk, B. E., Stander, M. A., Long, H. S. Senecio angustifolius as the major source of pyrrolizidine alkaloid contamination of rooibos tea (Aspalathus linearis). South African Journal of Botany. 110, 124-131 (2017).
  21. Johnson, A. E., Molyneux, R. J., Merrill, G. B. Chemistry of toxic range plants. Variation in pyrrolizidine alkaloid content of Senecio, Amsinckia, and Crotalaria species. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 33 (1), 50-55 (1985).
  22. Vrieling, K., de Vos, H., van Wijk, C. A. M. Genetic analysis of the concentrations of pyrrolizidine alkaloids in Senecio jacobaea. Phytochemistry. 32 (5), 1141-1144 (1993).
  23. Han, H. L., et al. Development, optimization, validation and application of ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry for the analysis of pyrrolizidine alkaloids and pyrrolizidine alkaloid N-oxides in teas and weeds. Food control. 132, 108518(2022).
  24. Bodi, D., et al. Determination of pyrrolizidine alkaloids in tea, herbal drugs and honey. Food Additives & Contaminants: Part A. 31 (11), 1886-1895 (2014).
  25. European Union Commission. Commission Regulation (EU) 2020/2040 of 11 December 2020 amending Regulation (EC) No 1881/2006 as regards maximum levels of pyrrolizidine alkaloids in certain foodstuffs. Official Journal of the European Union. 14 (12), 1-4 (2020).

Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.

Reimpressões e permissões

Etiquetas

Alcaloides PirrolizidínicosContaminação de CháUPLC-MS/MSPurificação por AdsorventeExtração em Fase SólidaAnálise de Amostras de SoloN-Óxido de IntermedinaDetecção de SenecioninaAnálise de Folhas de CháVia de Transferência de Alcaloides
Origem e Rota de Contaminação por Alcaloide Pirrolizidínico em Amostras de Chá
Fale conosco
Recomendar à biblioteca

Privacidade

Termos de Uso

Políticas

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Todos os direitos reservados.