Artigo de método

Bioensaio de Letalidade Utilizando Artemia salina L.

DOI:

10.3791/64472

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11 de outubro de 2022

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1CBIOS - Lusófona University's Center for Research in Biosciences & Health Technologies, Universidade Lusófona de Humanidades e Tecnologias, 2Facultad de Farmacia, Departamento de Ciencias Biomédicas (Área de Farmacologia; Nuevos agentes antitumorales, Acción tóxica sobre células leucémicas), Universidad de Alcalá de Henares, 3Instituto de Investigação do Medicamento (iMed.ULisboa), Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

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Este trabalho tem como objetivo avaliar e revisar o procedimento de bioensaio de letalidade de Artemia salina , também identificado como ensaio de letalidade de camarão em salmoura. Este método simples e barato fornece informações sobre a toxicidade geral (considerada como uma avaliação preliminar de toxicidade) das amostras, ou seja, produtos naturais.

Resumo

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Os produtos naturais têm sido usados desde os tempos antigos para produzir medicamentos. Hoje em dia, existem muitas drogas quimioterápicas obtidas de fontes naturais e usadas contra uma infinidade de doenças. Infelizmente, a maioria desses compostos geralmente exibe toxicidade sistêmica e efeitos adversos. A fim de melhor avaliar a tolerabilidade de amostras potencialmente bioativas selecionadas, o camarão de salmoura (Artemia salina) é geralmente utilizado como modelo em estudos de letalidade. O teste de A. salina baseia-se na capacidade dos compostos bioativos estudados de matar os microcrustáceos em seu estágio larval (náuplios). Este método representa um ponto de partida conveniente para estudos de citotoxicidade, bem como para a triagem de toxicidade geral de produtos sintéticos, semissintéticos e naturais. Pode ser considerado um ensaio simples, rápido e de baixo custo, em comparação com muitos outros ensaios (células in vitro ou cepas de levedura , peixe-zebra, roedores) geralmente adequados para os fins acima mencionados; além disso, pode ser facilmente realizado mesmo sem qualquer treinamento específico. No geral, o ensaio de A. salina representa uma ferramenta útil para a avaliação preliminar da toxicidade de compostos selecionados e o fracionamento bioguiado de extratos de produtos naturais.

Introdução

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Os produtos naturais de plantas, animais ou microrganismos têm sido uma área de interesse crescente ao longo dos anos no desenvolvimento de novas moléculas bioativas devido à sua variada gama de atividades biológicas e farmacológicas1. No entanto, os efeitos colaterais associados, a resistência aos medicamentos ou a especificidade inadequada dos agentes, especialmente quando utilizados como drogas anticancerígenas, representam os principais fatores que podem levar a um tratamento ineficaz 1,2.

Nas últimas décadas, vários agentes citotóxicos derivados de plant....

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Protocolo

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1. Preparação do equipamento

  1. Adquirir equipamentos de incubação comercialmente disponíveis. Selecione um local adequado para configurar o equipamento de eclosão (Figura 2A). Coloque o recipiente em forma de funil no suporte preto (incluído no conjunto) e gire o funil em uma direção adequada para ver a marca de nível e a torneira.
  2. Para fazer equipamentos de migração feitos à mão, corte a parte superior de duas garrafas plásticas de 0,5 L (5,8 cm de diâmetro) para obter uma altura final de 12 cm. Crie um orifício de 1,5 cm de diâmetro de um lado a 7 cm do fundo em cada garrafa e insira um tubo de borrach....

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Resultados

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A toxicidade geral de alguns produtos naturais recentemente estudados pelo nosso grupo foi avaliada através do bioensaio de letalidade de camarão em salmoura. Quatro extratos (Pa- P. ambigerus; Pb- P. barbatus; Pc- P. cylindraceus; e Pe- P. ecklonii) do gênero Plectranthus , conhecido por sua atividade antioxidante (resultados não publicados), foram testados. Além disso, dois compostos naturais (1 e 2) obtidos de Plectranthus spp., e três derivados semissintéticos (3,.......

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Discussão

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Nos últimos anos, a comunidade científica tem aumentado sua atenção para modelos alternativos para exames de toxicidade21. Além do bioensaio de letalidade de A. salina, outras metodologias são geralmente realizadas para a avaliação da tolerabilidade da amostra e incluem bioensaios de vertebrados (como roedores), invertebrados (como o peixe-zebra), métodos in vitro usando cepas ou células de levedura e métodos in silico 22,23,24,25

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Divulgações

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Os autores declaram não haver conflitos de interesse, financeiros ou não.

Agradecimentos

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Em memória do professor Amílcar Roberto.

Este trabalho foi apoiado financeiramente pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT, Portugal) no âmbito dos projetos UIDB/04567/2020 e UIDP/04567/2020 atribuídos ao CBIOS e à bolsa de doutoramento SFRH/BD/137671/2018 (Vera Isca).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Placas de 24 poçosThermo Fisher Scientific, Dinamarca174899Thermo Scientific Nunc Up Cell 24 multidish
Folha de alumínioAlbal-Podeser comprado no supermercado
Artemio SetJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Alemanha61066000Pode ser comprado em lojas de animais
Microscópio binocularCeti, Bélgica  1700.0000Flexum-24AED, 220-240 V, 50 Hz
Garrafas--0,5 L Diâmetro: 5,8 cm; Altura: 12 cm
Cistos de artêmiaJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Alemanha3090700Pode ser comprado em pet shops
Sal de camarão salgadoJBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Alemanha3090600Pode ser comprado em pet shops
Dimetilsulfóxido (DMSO)VWR produtos químicosCAS: 67-68-5  99% de pureza
Pontas descartáveisDiamanteF171500Faixa de volume: 100 - 1000 µ L
Eppendorfmicrotubos MARCA7,80,546Microtubos, PP, 2 mL, BIO-CERT  QUALIDADE DE PCR
Frasco ErlenmeyerVWR produtos químicos4,47,109volume: 100 mL
Copo de vidroNormax3.2111654NVolume: 1000 mL
LuvasGuantes LunaGLSP3-GraphPad
Prism GraphPadSoftware, San Diego, CA, USA-GraphPadPrism versão 5.00 para Windows, www.graphpad.com, acessado em 5 de fevereiro de 2021; estatística comercial software
de análise Cultivador caseiro de A. salina - -Feito emcasa: duas garrafas plásticas conectadas por uma mangueira
Cola quenteParksidePHP500E3230 V, 50 Hz, 25 W
IncubadoraHeidolph Instruments, Dinamarca -Um equipamento Heidolph Unimax 1010 e uma lâmpada LED Heidolph Inkubator 1006
RoblanSKYC3008FE14
MicropipetasProdutos químicos VWR613-5265 Faixa devolume: 100 - 1000 µ L
Dicromato de potássio (K2Cr2O7)VWR produtos químicosCAS: 7778-50-9  Bomba de pureza 99%
ProAir a50JBL GmbH and Co. KG, D-67141, Neuhofen Alemanha -Incluído no kit Artemio Set+1
Tubo de borracha--1,3 cm de diâmetro exterior e 0,9 cm de diâmetro interior
Vareta de agitaçãoVWR chemicals441-0147figure-materials-1 6 mm, 250 mm
TermometerVWR chemicals620-08210 - 100 ° O

Referências

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  1. Ntungwe, N. E., et al. Artemia species: An important tool to screen general toxicity samples. Current Pharmaceutical Design. 26 (24), 2892-2908 (2020).
  2. Cragg, G. M., Newman, D. J. Natural products: A continuing sour....

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