Dissecção e Isolamento de Tecido Pulmonar Descelularizado Regional-Específico

Resumo

Apresenta-se um protocolo para o isolamento de tecido pulmonar decelularizado regional. Este protocolo fornece uma ferramenta poderosa para o estudo de complexidades na matriz extracelular e interações célula-matriz.

Resumo

O transplante pulmonar é muitas vezes a única opção para pacientes em estágios mais avançados de doença pulmonar grave, mas isso é limitado tanto devido ao suprimento de pulmões de doadores adequados quanto à rejeição aguda e crônica após o transplante. Determinar novas abordagens de bioengenharia para a substituição de pulmões doentes é imperativo para melhorar a sobrevida dos pacientes e evitar complicações associadas às metodologias atuais de transplante. Uma abordagem alternativa envolve o uso de pulmões inteiros descelularizados sem constituintes celulares que são tipicamente a causa da rejeição aguda e crônica. Como o pulmão é um órgão tão complexo, é de interesse examinar os componentes da matriz extracelular de regiões específicas, incluindo a vasculatura, as vias aéreas e o tecido alveolar. O objetivo dessa abordagem é estabelecer métodos simples e reprodutíveis pelos quais os pesquisadores possam dissecar e isolar tecidos específicos da região de pulmões totalmente decelularizados. O protocolo atual foi desenvolvido para pulmões de suínos e humanos, mas pode ser aplicado a outras espécies também. Para esse protocolo, foram especificadas quatro regiões do tecido: via aérea, vasculatura, alvéolos e tecido pulmonar volumoso. Este procedimento permite a obtenção de amostras de tecido que representam com mais precisão o conteúdo do tecido pulmonar decelularizado, em oposição aos métodos tradicionais de análise em massa.

Introdução

Atualmente, as doenças pulmonares, incluindo a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), a fibrose pulmonar idiopática (FPI) e a fibrose cística (FC), permanecem sem cura 1,2,3,4. O transplante pulmonar é muitas vezes a única opção para pacientes em estágios mais avançados, porém continua sendo uma opção limitada, tanto pelo suprimento de pulmões de doadores adequados quanto pela rejeição aguda e crônica após o transplante ^3,5,6. Como tal, há uma n....

Protocolo

Todos os estudos em animais foram realizados de acordo com a IACUC da Universidade de Vermont (UVM). Todos os pulmões humanos foram adquiridos dos Serviços de Autópsia da UVM e os estudos relacionados foram realizados de acordo com as diretrizes do IRB da UVM.

NOTA: A decelularização de pulmões de suínos e humanos já foi descrita pelo nosso grupo 7,8,9,10,21. Em resumo, lobos pulmonares inteiros são decelularizados através da perfusão sequencial das vias aéreas e da vasculatura c....

Resultados

Um esquema geral do protocolo é mostrado na Figura 1. Uma vez dominada, a dissecção regional do tecido pulmonar decelularizado é facilmente reprodutível. A determinação da categorização de cada amostra de tecido cortado é imprescindível para o sucesso do procedimento de dissecção. O tecido vascular é substancialmente mais elástico do que as vias aéreas, portanto, o uso de pinças para esticar o tecido é frequentemente um forte indicador de se uma determinada amostra é vasculatura ou via aérea.......

Discussão

Tecidos decelularizados de humanos e de outras espécies são frequentemente utilizados como biomateriais para estudar a composição da MEC, bem como interações célula-MEC em modelos de cultura ex vivo, incluindo hidrogéis 3D^12,13. À semelhança de outros órgãos, pulmões descelularizados têm sido previamente utilizados para determinar diferenças na composição da MEC em pulmões saudáveis versus doentes (isto é, enfisematosos e FPI) e estão sendo cada vez mais.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Bonn Scissors	Fine Science Tools	14184-09
Dumont #5 - Pinça Fina	Ferramentas de Fine Science	11254-02
Fórceps, Curvado, S/S, Sem Corte, Serrilhado - 130mm	CellPath	N/A
de	Ciência Fina	14090-11
Pinça Moria Iris Ferramentas	de Ciência Fina	11373-22
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