Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

إنشاء نموذج سرطان التهاب القولون والمستقيم في الفئران وتقييم التأثير العلاجي للطب الصيني

Published: October 13, 2023 doi: 10.3791/66045
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 1, 1, 3
1College of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 2School of Clinical Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Radiotherapy, Jilin Provincial Cancer Hospital

Summary

يوفر هذا البروتوكول نموذجا للفأر لسرطان القولون والمستقيم المرتبط بالتهاب القولون التقرحي الناجم عن الأزوميثان مع كبريتات ديكستران الصوديوم. تم استخدام النموذج لتقييم فعالية مركبات الطب الصيني التقليدي في الوقاية والعلاج من سرطان القولون والمستقيم.

Abstract

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي وأصبح ثالث أكثر الأورام الخبيثة شيوعا في جميع أنحاء العالم والسبب الرئيسي الثاني للوفاة المرتبطة بالأورام الخبيثة. التهاب القولون التقرحي (UC) هو آفة سرطانية ، و CRC (UC-CRC) المرتبطة ب UC هي النوع الفرعي الأكثر شيوعا من CRC. لذلك ، فإن نموذج UC-CRC المعقول هو حجر الزاوية والضمان لتطوير أدوية جديدة. يستخدم الطب الصيني التقليدي (TCM) على نطاق واسع في علاج UC-CRC بسبب فعاليته الجيدة. كوصفة طبية منشط كلاسيكية من الطب الصيني التقليدي ، تم استخدام Liujunzi decoction (LJZD) على نطاق واسع في علاج UC-CRC. في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج UC-CRC من خلال الجمع بين أزوميثان وكبريتات ديكستران الصوديوم ، وتم إعطاء LJZD. أكدت البيانات أن LJZD يمكن أن يمنع بشكل فعال انتقال السرطان في UC-CRC باستخدام وزن جسم الفأر وطول القولون والمستقيم والعوامل المرضية والالتهابية ووظيفة حاجز القولون والمستقيم وعلامات السرطان. يوفر هذا البروتوكول نظاما لتقييم فعالية الطب الصيني التقليدي في الوقاية والعلاج من UC-CRC.

Introduction

سرطان القولون والمستقيم (CRC) هو ورم خبيث شائع في الجهاز الهضمي ، وهو ثالث أكثر الأورام الخبيثة شيوعا ، وثاني أكثر أسباب الوفاة شيوعا في العالم ، حيث يمثل 10٪ من حالات الإصابة بالسرطان في العالم و 9.4٪ من إجمالي الوفيات المرتبطة بالسرطان 1,2. العوامل الوراثية ، والالتهابات المزمنة ، والنظام الغذائي عالي الدهون ، ومرض السكري ، والنباتات المعوية غير الطبيعية هي عوامل خطر ل CRC 3,4. من بينها ، مرض التهاب الأمعاء ، وخاصة التهاب القولون التقرحي (UC) ، هو عامل خطر واضح ل CRC 5,6. CRC (UC-CRC) المرتبطة بجامعة كاليفورنيا هي عملية انتقالية من الالتهاب وفرط التنسج اللانمطي والسرطان بناء على التهاب مزمن في القولون والمستقيم ، والذي يختلف عن نموذج تطوير الورم الحميد والسرطان الغدي النموذجي لاتفاقية حقوق الطفل 7,8. بالمقارنة مع عامة السكان ، فإن خطر الإصابة ب CRC أعلى بحوالي 10-40 مرة في المرضى الذين يعانون من مرض التهاب الأمعاء9.

حاليا ، لا تزال الجراحة هي العلاج القياسي ل CRC ، واعتمادا على موقع الورم ومرحلته ، فإن العلاج الإشعاعي أو العلاج الدوائي الجهازي أو مزيج من الاثنين ممكنان10. على الرغم من أن طرق العلاج التقليدية هذه قد أحرزت تقدما كبيرا ، نظرا لارتفاع معدل عدم التجانس وتكرار CRC ، إلا أن التشخيص ضعيف ، وتأثير العلاج ليس مثاليا11,12. لذلك ، يعد الكشف المبكر والتشخيص المبكر والعلاج الشامل أمرا أساسيا لتحسين معدل بقاء مرضى CRC ، ومن المهم بشكل خاص الانتباه إلى تحويل UC إلى CRC. على مر السنين ، اجتذب الطب الصيني التقليدي (TCM) الكثير من الاهتمام في علاج UC-CRC أو التهاب المعدة المزمن بسبب آثاره الجانبية المحدودة وفعاليته الكبيرة. استنادا إلى العلاج الجدلي ، ابتكر ممارسو الطب الصيني المشهورون من أجيال مختلفة عددا كبيرا من الوصفات الكلاسيكية ، مثل Huangqi Jianzhong decoction13 و Sijunzi decoction14 و Sishen pill15.

نشأ Liujunzi decoction (LJZD) من أعمال Yi Xue Zheng Zhuan التي تم تجميعها في عهد أسرة مينغ وهي وصفة طبية كلاسيكية في TCM16. كما هو موضح في الجدول 1 ، يتكون LJZD من ستة أعشاب تقليدية ، بما في ذلك Codonopsis pilosula (Franch.) نانف. (دانجشين) ، بوريا كوكوس (شو.) الذئب (فولينغ) ، أتراكتيلوديس ماكروسيفالا كويدز. (بايتشو) ، غليسيرهيزا أورالينسيس فيش. (غانكاو) ، الحمضيات شبكية بلانكو (تشينبي) وبينيليا تيرناتا (ثونب.) Breit (Banxia) ، الذي له تأثير في تجديد تشي وتقوية الطحال ، وتجفيف الرطوبة ، وحل البلغم. في الممارسة السريرية الحديثة ، غالبا ما يستخدم لعلاج التهاب المعدة المزمن وقرحة المعدة وقرحة الاثني عشر. أظهرت الأبحاث الدوائية الحديثة أن LJZD و LJZD المعدل لهما قيمة تطبيق عالية في العلاج المساعد لسرطان UC وسرطان الجهاز الهضمي17،18،19.

في الوقت الحاضر ، هناك العديد من الطرق لبناء نماذج الفئران UC-CRC ، ولكن نموذج الماوس الناجم عن أزوكسي ميثان (AOM) / ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS) هو نموذج UC-CRC الأكثر استخداما. أثبتت الأعراض السريرية والملاحظات المورفولوجية والمرضية أن النموذج مشابه جدا ل UC-CRCالبشري 20,21. المبدأ الأساسي هو أولا إحداث التسرطن باستخدام مادة كيميائية مسرطنة AOM ثم تعريض الفئران باستمرار لبيئة التحفيز الالتهابية ل DSS لمحاكاة الضرر المستمر وإصلاح ظهارة الغشاء المخاطي المعوي ، وبالتالي بناء نموذج الماوس UC-CRC22. الهدف من هذه الدراسة هو إنشاء نموذج فأر ل UC-CRC عن طريق الحقن داخل الصفاق ل AOM والتحفيز الدوري ل DSS على المدى القصير وتقييم تأثير الدواء والآلية الجزيئية ل LJZD على UC-CRC من أجل توفير أساس علمي لعلاج UC-CRC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

تمت الموافقة على الإجراء الحيواني من قبل لجنة الأخلاقيات بجامعة تشانغتشون للطب الصيني (رقم السجل: 2021214). تم إيواء الفئران C57BL / 6J المحددة الخالية من مسببات الأمراض (8-10 أسابيع ، الوزن 18-22 جم) ، ذكورا وإناثا ، في أقفاص جيدة التهوية عند 22 درجة مئوية ورطوبة نسبية 65٪. بدأت الفئران التجربة بعد 7 أيام من التغذية التكيفية ، والتي كان لديهم خلالها حرية الوصول إلى الماء والنظام الغذائي.

1. إعداد المخدرات

  1. إعداد LJZD
    ملاحظة: تم شراء الدواء الصيني المستخدم من المستشفى التابع لجامعة تشانغتشون للطب الصيني وتم تحديده على أنه دواء صيني حقيقي (انظر الجدول 1).
    1. ضع Dangshen (12 جم) ، Baizhu (12 جم) ، Gancao (6 جم) ، Chenpi (12 جم) ، Jiangbanxia (9 جم) في وعاء خزفي متخصص (انظر جدول المواد). أضف 1000 مل من الماء المقطر وانقعه في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة (انظر الشكل 1 أ).
    2. مسحوق 12 جم يقلب في مسحوق ناعم بمطحنة وينقع في 300 مل من الماء المقطر في وعاء آخر لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة.
    3. امزج الدواء الصيني أعلاه في وعاء السيراميك المتخصص. اسلقي الخليط ثم اتركيه على نار متوسطة حتى يتبقى 300 مل فقط من ديكوتيون. استخدم الشاش الطبي للترشيح والحفاظ على المرشح في درجة حرارة الغرفة.
    4. أضف 1000 مل من الماء المقطر وكرر عملية ديكوتيون المذكورة أعلاه مرة أخرى. تصفية مرة أخرى باستخدام الشاش الطبي. يمزج المرشح ويغلى حتى يتبقى 150 مل فقط.
    5. قم بطرد السائل المركز عند 10000 × جم لمدة 5 دقائق ، وقم بزيادة تركيز المادة الطافية التي تم الحصول عليها إلى 30 مل على نار متوسطة. انقل المركز النهائي إلى طبق وجففه باستخدام فرن تجفيف كهربائي حتى يبقى المذاب فقط كمسحوق.
    6. قم بوزن المادة الصلبة المذكورة أعلاه وقم بإذابتها في ماء مقطر معقم للحصول على محلول يحتوي على 22.85 مجم من الدواء لكل 0.2 مل (114.16 مجم / مل) ، وهي الجرعة اليومية للفئران.
  2. إعداد 5-حمض الساليسيليك الأمينية
    ملاحظة: حمض الساليسيليك 5-amino (5-ASA ؛ انظر جدول المواد) له تأثير وقائي جيد على UC-CRC ، وقد تم استخدامه كدواء إيجابي في هذه الدراسة23.
    1. قم بإذابة 64 مجم مسحوق 5-ASA في 200 مل من الماء المقطر المعقم للحصول على محلول 1.82 مجم / مل 5-ASA. كانت الجرعة اليومية لفأر واحد 0.2 مل.
  3. تحضير محلول حقن AOM
    1. أضف 2.5 مل من الماء المقطر المعقم إلى مسحوق AOM 25 مجم (انظر جدول المواد) ، واخلطه بواسطة خلاط دوامة (انظر جدول المواد) لعمل محلول مخزون AOM سعة 10 مجم / مل ، واحفظه في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
    2. تحضير محلول حقن AOM عن طريق تخفيف محلول مخزون AOM بالماء المقطر المعقم عند 10: 1 (1 مجم / مل).

2. إنشاء نموذج UC-CRC

ملاحظة: تم تقسيم التجربة إلى 4 مجموعات: مجموعة التحكم ، والنموذج ، و LJZD ، ومجموعة 5-ASA ، 10 فئران في كل مجموعة. باستثناء المجموعة الضابطة ، عولجت المجموعات الأخرى باستخدام AOM و DSS.

  1. الحقن داخل الصفاق لمحلول حقن AOM
    ملاحظة: بعد التغذية التكيفية لمدة 7 د ، أعطيت الفئران محلول حقن AOM (1 ملغ / مل) عن طريق الحقن داخل الصفاق (انظر الشكل 1B).
    1. امسك الماوس مع بطنه لأعلى ورأسه لأسفل قليلا. أمسك الجلد الخلفي لشد جلد البطن واخترق الجلد حوالي 1 سم إلى يمين تقاطع خط الجذر لكلا الفخذين على خط منتصف البطن باستخدام حقنة سعة 1 مل (انظر جدول المواد).
    2. ادفع إبرة المحقنة سعة 1 مل لمسافة 3-5 مم تحت الجلد ، مع إبقائها موازية لخط الوسط البطني ، وأدخل الإبرة 0.3-0.5 مم في تجويف البطن بزاوية 45 درجة.
    3. بعد مرور الطرف عبر عضلة البطن ، يشعر المشغل بفقدان مفاجئ للمقاومة. بعد ذلك ، اسحب المحقنة للخارج والخلف لمراقبة ما إذا كان تسرب السائل يحدث. إذا لم يكن الأمر كذلك ، ادفع محلول حقن AOM ببطء إلى الفئران عند 0.1 مل / 10 جم.
  2. التحفيز الدوري لمحلول DSS 2٪
    ملاحظة: تم إعطاء كل فأر مستحث ب AOM 500 مل من محلول DSS في الأسابيع 3 و 6 و 9 ، وشربت الفئران بحرية خلال هذه الفترة.
    1. قم بإعداد محلول DSS بنسبة 2٪ بإضافة 500 مل من الماء المقطر المعقم إلى 10 جم DSS (انظر جدول المواد). تخلط مع خلاط دوامة وتحفظ على حرارة 4 درجات مئوية حتى الاستخدام.
    2. يشرب كل فأر مستحث ب AOM 500 مل من محلول DSS 2٪ بحرية لمدة 7 أيام في الأسابيع 3 و 6 و 9 بعد تحريض AOM.

3. العلاج من تعاطي المخدرات

ملاحظة: يحتاج البشر البالغون إلى 63 جم LJZD يوميا. وفقا لصيغة تحويل جرعة الفئران التجريبية والدواء البشري ، كانت الجرعة التجريبية المكافئة للفئران (ملغم / كغم) = الجرعة البشرية (ملغم / كغم) / وزن الجسم (60 كجم) × 9.1 ، كانت الجرعة اليومية من الفئران حوالي 9.6 جم / كجم.

  1. عالج مجموعة LJZD و 5-ASA ب 0.1 مل / 10 جم من محلول LJZD و 5-ASA المحضر عن طريق تجويف المعدة في الأسبوع 7 والأسبوع 15 على التوالي.
    1. للإعطاء داخل المعدة في الفئران ، قم بتنفيذ الإجراء التالي. امسك الماوس في اليد اليسرى ، وفي اليد اليمنى ، أمسك جهاز تروية المعدة. أدخل إبرة المحقنة في الفم وحركها أسفل الجدار الخلفي للبلعوم للفئران. انزلق لأسفل البلعوم بينما تبتلع الفئران واستمر في المضي قدما. عندما يكون هناك شعور بالمقاومة ، ويمكن دفع المحقنة إلى البلعوم ، اسحب الإبرة للخارج وأكمل الحقن.
  2. عالج مجموعة التحكم والطراز بنفس الكمية من المحلول الملحي (انظر جدول المواد).
  3. علاج الفئران في كل مجموعة مع الدواء المناسب مرة واحدة في اليوم في نفس الوقت خلال فترة الإدارة.

4. تقييم نموذج UC-CRC وفعالية LJZD

  1. درجة مؤشر نشاط المرض
    ملاحظة: وفقا للجدول 2 ، تم تقييم درجة مؤشر نشاط المرض (DAI) من خلال الجمع بين فقدان الوزن ولزوجة البراز ونزيف البراز للفئران.
    1. سجل وزن الفئران يوميا من بداية التغذية التكيفية حتى نهاية العلاج بالعقاقير.
    2. راقب اتساق البراز لكل فأر تجريبي بعناية وسجل حركات الأمعاء كواحدة من الحالات الثلاثة: البراز الطبيعي الرخو والإسهال المائي.
    3. سجل النزيف البرازي لحيوانات التجارب كواحد من الشروط الثلاثة: لا نزيف ، نزيف قليل ، ودم مرئي في البراز.
  2. الكشف عن مستوى IL-6 في المصل
    1. علاج الفئران مع LJZD أو 5-ASA لمدة 9 أسابيع. إصلاح الفئران عن طريق الإمساك جلد الرقبة من الماوس باليد اليسرى والضغط بلطف على الطاولة التجريبية لاتخاذ موقف الاستلقاء الجانبي. قطع شعيرات الفئران بالمقص. اقطع شعيرات الفئران بالمقص بعناية (انظر جدول المواد) لمنع تلوث الدم.
      ملاحظة: الفئران التي لا يمكن أن تذبذب بحرية اعتبرت ثابتة بشكل صحيح. إذا لم يحدث هذا ، يجب إصلاح الفئران.
    2. تخدير الماوس عن طريق استنشاق 2 ٪ إيزوفلوران. تعقيم الجلد حول مقلة العين بالإيثانول (انظر جدول المواد). اضغط على جلد العين على الجانب برفق لجعل مقلة العين مزدحمة وبارزة.
    3. المشبك مقلة العين مع ملقط الكوع وإزالة مقل العيون بدقة وبسرعة. اسمح للدم بالتنقيط في أنبوب الطرد المركزي (انظر جدول المواد). في هذه العملية ، اضغط على قلب الفأر لتسريع جمع الدم.
    4. احتفظ بالدم الذي تم جمعه في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة وطرده مركزيا عند 3500 × جم لمدة 10 دقائق. اجمع المادة الطافية واكتشف مستوى IL-6 وفقا لتعليمات مجموعة أدوات اكتشاف محتوى IL-6 (انظر جدول المواد).
  3. فصل أنسجة القولون والمستقيم
    1. القتل الرحيم للفئران بعد أخذ عينات الدم عن طريق استنشاق 5٪ جرعة زائدة من الأيزوفلوران وخلع عنق الرحم (انظر جدول المواد) وفقا لأخلاقيات.
    2. الحفاظ على الفئران في بيئة تشريحية مبردة. شل حركة الفئران في وضع ضعيف. قص شعر أسفل البطن بالمقص وتعقيمه بالإيثانول.
    3. اضغط على نقطة التقاطع بين جذري الفخذ وخط الوسط البطني باستخدام ملقط الجفن (انظر جدول المواد). قطع شق عرضي حوالي 1-1.5 سم بالمقص.
    4. قم بقص شق طولي على طول الخط المتوسط للبطن من منتصف الشق المستعرض باتجاه عملية الخنجري.
    5. قم بإزالة الأنسجة المحيطة بالقولون والمستقيم في اتجاه فتحة الشرج لفصل القولون والمستقيم عن الأنسجة المحيطة. احرص على عدم إتلاف القولون والمستقيم.
    6. ادفع جلد البطن إلى الجانبين لفضح القولون والمستقيم بالكامل. إزالة القولون والمستقيم من تجويف البطن مع ملقط الجفن وقطع الأجزاء من فتحة الشرج إلى الأعور (باستثناء) ؛ الطول الإجمالي حوالي 10 سم. قم بتخزين أنسجة القولون والمستقيم التي تم الحصول عليها في محلول ملحي عند 4 درجات مئوية.
  4. تقييم طول ووزن المستقيم
    1. استخرج المحلول الملحي عند 4 درجات مئوية بإبرة 5 مل (انظر جدول المواد) لشطف القولون والمستقيم من الداخل. ثم ضع القولون والمستقيم على ورق ماص لامتصاص رطوبة الأنسجة.
    2. قم بوزن أنسجة القولون والمستقيم ثم ضعها على ورق A4 لقياس طولها.
  5. قياس عدد الأورام في القولون والمستقيم
    1. قطع القولون والمستقيم بالطول لفتحه بالكامل ومراقبة عدد وحجم الأورام في القولون والمستقيم.
  6. التحليل المرضي للمستقيم
    1. إصلاح القولون والمستقيم في 4 ٪ بارافورمالدهيد لمدة 24 ساعة. قم بتضمين أنسجة المستقيم الثابتة في البارافين المذاب والمقطع بشكل مستمر بسمك 5 ميكرومتر بواسطة ميكروتوم تجميد الأنسجة.
    2. وفقا لإجراء Hou et al.24 ، قم بإزالة الشمع من الأقسام الموجودة في الزيلين ثم قم بتجفيفها بتركيزات تسلسلية من الإيثانول. بعد تلطيخ بمحلول الهيماتوكسيلين لمدة 5 دقائق ، شطف الأقسام بالماء النقي. بعد ذلك ، وصمة عار مع محلول eosin 0.5 ٪ لمدة 1 دقيقة (انظر جدول المواد).
    3. قم بإجراء تجفيف متدرج وعلاج شفاف للزيلين مرة أخرى. أغلق الأقسام وراقبها تحت المجهر الضوئي (انظر جدول المواد) والصورة الفوتوغرافية ، كما وصفها Xie et al.25.
  7. التحليل المناعي الكيميائي للقولون والمستقيم
    1. إزالة الشمع وتجفيف الأقسام وفقا للطريقة المذكورة أعلاه. إصلاح المستضد في الأقسام بتقنية الإصلاح الحراري عالي الضغط ، كما هو موضح بواسطة Gok et al.26.
    2. نقع الأقسام في حاصرات البيروكسيديز الذاتية في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. ختم الأقسام بمصل الماعز (انظر جدول المواد).
    3. أضف الجسم المضاد الأساسي ZO-1 (1: 1000) و Occludin (1: 1000) و KI67 (1: 500 ؛ انظر جدول المواد) إلى الأقسام واحتضانها طوال الليل عند 4 درجات مئوية. اشطف الأقسام بمخزن مؤقت PBS (انظر جدول المواد) ، وأضف جسما مضادا ثانويا للأغراض العامة (1: 5000 ؛ انظر جدول المواد) إليه واحتضانه عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
    4. أضف حل DAB (انظر جدول المواد) إلى الأقسام لتطوير اللون. عكس المقاطع بمحلول الهيماتوكسيلين.
    5. قم بتجفيف الأقسام وشفافيتها وإغلاقها مرة أخرى. مراقبة التعبير عن البروتين بواسطة المجهر الضوئي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تم تحضير ديكوتيون من LJZD وفقا لنسبة تكوين الأدوية في الجدول 1 وطريقة ديكوتيون من TCM في الشكل 1A. وفقا للنقطة الزمنية المشار إليها في الشكل 1B ، تم حقن الفئران داخل الصفاق ب 1 مجم / مل AOMفي اليوم السابع ، وتم منح الفئران حرية الوصول إلى مياه الشرب التي تحتوي على 2٪ DSSفي الأسابيع 3 و 6 و 9. تم إنشاء نموذج الماوس UC-CRC بنجاحفي الأسبوع 15. وفي الوقت نفسه ، عولجت الفئران ب LJZD عن طريق التزويج من الأسبوع 7 إلى الأسبوع 15. أظهرت البيانات أنه بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، شهدت مجموعة نموذج UC-CRC خسارة كبيرة في الوزن ، والتي تم تخفيفها عن طريق علاج LJZD (الشكل 2A ، P < 0.01). في نهاية التجربة ، حسن علاج LJZD درجة DAI مقارنة بمجموعة نماذج UC-CRC (الشكل 2B). بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، كان لمجموعة نموذج UC-CRC طول القولون والمستقيم أقصر ، والذي زاد عن طريق علاج LJZD (الشكل 2C ، D ، P < 0.01). تعكس نسبة وزن القولون والمستقيم إلى وزن الجسم تطور CRC في الفئران ، وتشير النسبة الأعلى إلى تطور الورم الحاد27. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، زاد مؤشر أعضاء القولون والمستقيم للمجموعة النموذجية بشكل كبير ، وقلل علاج LJZD بشكل كبير من مؤشر أعضاء القولون والمستقيم (الشكل 2E ، P < 0.05). بالإضافة إلى ذلك ، منع علاج LJZD أيضا تكوين أورام القولون والمستقيم (الشكل 2F ، P < 0.01) ومستوى عامل المصل المؤيد للالتهابات IL-628 (الشكل 2G ، P < 0.05).

أكدت النتائج المرضية أنه بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، كان لدى الفئران في مجموعة نموذج UC-CRC أورام القولون والمستقيم أكبر وشكلت سرطانا غديا، بينما قلل علاج LJZD من حجم ودرجة الأورام (الشكل 3). أظهرت البيانات المناعية الكيميائية أن علاج LJZD عزز وظيفة حاجز القولون والمستقيم في الفئران النموذجية UC-CRC ، كما يتضح من التعبير البروتيني المرتفع ل ZO-1 و Occludin29 (الشكل 4). في موازاة ذلك ، قمع علاج LJZD مستويات التعبير البروتيني لعلامة السرطان KI6730 (الشكل 4).

Figure 1
الشكل 1: تحضير LJZD وإنشاء نموذج فأر لسرطان التهاب القولون والمستقيم. أ) تم غمر خليط Dangshen (12 جم) و Baizhu (12 جم) و Gancao (6 جم) و Chenpi (12 جم) و Ban Xia المعالج بالزنجبيل (9 جم) في 1000 مل من الماء المقطر في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. تم نقع مسحوق Fuling 12 جم في 300 مل من الماء المقطر في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ساعة. تم إزالة خليط الأعشاب الستة المذكورة أعلاه عند 100 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة. (ب) في اليوم 7 ، تم حقن الفئران C57BL / 6J داخل الصفاق ب 1 مجم / مل AOM. أعطيت الفئران الماء الذي يحتوي على 2 ٪ DSS ad libitum في الأسابيع 3 و 6 و 9. من 7 إلى 15 أسبوعا ، أعطيت الفئران LJZD عن طريق gavage. الاختصارات: AOM ، أزوميثان. DAI ، مؤشر نشاط المرض ؛ DSS ، كبريتات ديكستران الصوديوم ؛ LJZD ، ليوجونزي ديكوتيون ؛ ث ، الأسبوع. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 2
الشكل 2: تقييم نموذج UC-CRC وفعالية LJZD. (أ) تحسن LJZD وزن الجسم في الفئران النموذجية UC-CRC. (ب) خفف LJZD من درجات DAI في الفئران النموذجية UC-CRC. (ج، د) زاد LJZD من طول القولون والمستقيم في الفئران النموذجية UC-CRC. (ه) خفض LJZD مؤشر العضو للقولون والمستقيم في الفئران النموذجية UC-CRC. (F) تثبيط LJZD تكوين أورام القولون والمستقيم في الفئران النموذجية لسرطان التهاب القولون. (ز) قمع LJZD مستوى مصل IL-6 في الفئران النموذجية UC-CRC. #P< 0.05 و ##P< 0.01 ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ؛ *P < 0.05 و ** P < 0.01 ، مقارنة بمجموعة الطرازات. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± الانحرافات المعيارية (ن = 10) وتم تحليلها من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعا باختبار توكي. P < 0.05 يشير إلى فرق ذو دلالة إحصائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 3
الشكل 3: تقييم الخصائص المرضية لأنسجة القولون والمستقيم في الفئران عن طريق تلطيخ الهيماتوكسيلين-يوزين. لم يكن هناك ضرر مرضي في المجموعة الضابطة. كان النسيج السرطاني لمجموعة نموذج UC-CRC كبيرا وشكل سرطانا غديا وروما عالي الدرجة ، في حين أن مجموعة علاج LJZD قد قللت من أنسجة الورم مصحوبة بكمية صغيرة من الورم الحميد الموضعي والأورام منخفضة الدرجة. يمثل السهم الأسود غدة ورم خلل التنسج السابقة للتسرطن. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Figure 4
الشكل 4: تأثير LJZD على وظيفة حاجز القولون والمستقيم وعلامة السرطان في الفئران النموذجية UC-CRC. (أ) الصور الكيميائية الهيستولوجية المناعية ل ZO-1 و Occludin و KI67. (ب) النتائج الإحصائية للتعبير البروتيني ل ZO-1 و Occludin و KI67. زاد علاج LJZD من التعبير عن البروتينات الوظيفية لحاجز القولون والمستقيم ZO-1 و Occludin ، بينما انخفض مستوى علامة السرطان KI67 في الفئران النموذجية UC-CRC. ## P < 0.01 ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ؛ ** P < 0.01 ، مقارنة بمجموعة الطرازات. تم التعبير عن البيانات كمتوسط ± الانحرافات المعيارية (ن = 10) وتم تحليلها من خلال تحليل التباين أحادي الاتجاه (ANOVA) متبوعا باختبار توكي. P < 0.05 يشير إلى فرق ذو دلالة إحصائية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

مكونات بينيين الوزن (جم)
كودونوبسيس راديكس دانجشين 12
بوريا كوكوس فولينغ 12
أتراكتيلوديس ماكروسيفالاي ريزوما بايتشو 12
سوس جانكاو 6
قشر البرتقال المجفف تشينبي 12
رهيزومي بينيليا بريباراتا جيانغبانكسيا 9

الجدول 1: تركيب ونسبة الأدوية في LJZD.

العناصر الدرجة أو الأعراض عشرات
فقدان الوزن < 1٪ 0
1%-5% 1
5%-10% 2
10%-15% 3
≥15٪ 4
فحص الدم الخفي في البراز سالب 0
موجب 2
دم مرئي في البراز بالعين المجردة 4
اتساق البراز عادي 0
براز رخو 2
الإسهال المائي 4

الجدول 2: درجة مؤشر نشاط المرض لنموذج UC-CRC في الفئران.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

يعد CRC أحد أكثر أنواع السرطان شيوعا في جميع أنحاء العالم ، مع ما يقرب من 1,148,000 حالة جديدة وأكثر من 576,000 حالة وفاة كل عام. يمكن تقسيم اتفاقية حقوق الطفل إلى ثلاثة أنواع وفقا لأسباب مختلفة ، بما في ذلك وراثية ومتفرقة و UC-CRC31. معدل حدوث CRC في المرضى الذين يعانون من أمراض الأمعاء الالتهابية مثل UC أعلى بكثير من ذلك في عموم السكان. تحفز جامعة كاليفورنيا تطور CRC من خلال مسار السرطان الالتهابي ، والذي يختلف عن مسار الورم الحميد والسرطان الغديالنموذجي 6. في الوقت الحاضر ، سبب UC-CRC غير معروف ، ويرجع ذلك أساسا إلى التهاب مزمن متكرر طويل الأجل ، مع معدل وفيات يصل إلى 60٪ 32,33. لا يوجد علاج فعال ل UC-CRC ، والتي كانت نقطة ساخنة للبحث في السنوات الأخيرة. يعد فهم الآلية الجزيئية ل UC-CRC أمرا بالغ الأهمية للكشف المبكر والعلاج الدقيق ل UC-CRC.

حاليا ، هناك العديد من الطرق لبناء نماذج حيوانية من UC-CRC ، وآليات التكوين مختلفة. IL-10 أو Muc2 / 4 الضربة القاضية للجينات ، مما يؤدي إلى عيوب الحاجز الظهاري ، يمكن أن يسبب التهاب القولون التلقائي في الفئران ، لذلك غالبا ما يستخدم لبناء نماذج CRC الحيوانية بناء على العيوب الوراثية المرتبطة بجامعة كاليفورنيا34،35،36. ومع ذلك ، فإن النموذج الحيواني ل UC-CRC الناجم عن الضربة القاضية الجينية لا يمكن أن يحاكي التسبب الكامل للمرض ، وطريقة تشغيله معقدة ، والتجربة باهظة الثمن ، ولها قيود واضحة. الحث الكيميائي هو الطريقة الكلاسيكية والشائعة لبناء نماذج حيوانية UC-CRC37,38. DSS و AOM و dimethylhydrazine كلها محفزات كيميائية شائعة الاستخدام لبناء UC-CRC. ومع ذلك ، فإن استخدام هذه الكواشف الكيميائية وحدها لإنشاء نماذج حيوانية يستغرق وقتا طويلا وله معدل نجاح منخفض39. أظهرت الدراسات أن حدوث UC-CRC الناجم عن الجمع بين AOM و DSS يمكن أن يصل إلى ما يقرب من 100٪ 40. بالمقارنة مع الطرق الأخرى ، فإن الجمع بين AOM / DSS له مزايا التشغيل البسيط ، والقدرة على التحكم القوي ، والدورة القصيرة ، ومعدل النسخ المتماثل العالي ، ويمكنه محاكاة UC-CRC البشري بشكل أفضل من حيث علم الأمراض والآلية الجزيئية40،41،42. على الرغم من أن استخدام تحفيز دورة AOM / DSS لبناء نموذج UC-CRC له العديد من المزايا ، إلا أنه يحتوي أيضا على عيوب وقت النمذجة الطويل ، وكواشف النمذجة باهظة الثمن ، ولا يزال غير قادر على محاكاة التسبب في UC-CRC البشري بشكل كامل.

من أجل البحث عن هدف علاجي محتمل ل UC-CRC ، استخدمنا AOM ، وهو مادة كيميائية مسرطنة ، بالاشتراك مع الفئران التي يسببها DSS لإنشاء نموذج UC-CRC. في هذه الدراسة ، أظهرت الفئران المعرضة ل AOM والتحفيز الدوري ل DSS درجات متفاوتة من الأعراض المرتبطة ب UC-CRC. بالمقارنة مع المجموعة الضابطة ، زادت درجة DAI للمجموعة النموذجية بشكل كبير ، والتي تجلت في فقدان الوزن أو براز الدم أو البراز الرخو أو الإسهال المائي. في حين أن LJZD خفضت بشكل كبير درجة DAI. يعد تقصير طول القولون والمستقيم علامة مهمة على الاستجابة الالتهابية في UC-CRC43,44. في هذه الدراسة ، كان طول القولون والمستقيم للفئران النموذجية أقصر بكثير من طول المجموعة الضابطة ، ويمكن ل LJZD تحسين القولون والمستقيم القصير. يتطور الغشاء المخاطي للقولون والمستقيم إلى التهاب مزمن ، والذي يتطور تدريجيا إلى تضخم غير نمطي في أنسجة القولون والمستقيم ويسبب السرطانفي النهاية 45. في هذه الدراسة ، زاد عدد الأورام في أنسجة القولون والمستقيم للفئران في المجموعة النموذجية بشكل ملحوظ مقارنة بالمجموعة الضابطة ، وفي المقابل ، زاد وزن أنسجة القولون والمستقيم أيضا. بعد علاج LJZD ، انخفض عدد الأورام بشكل ملحوظ ، وانخفض وزن القولون والمستقيم. يقترح أن LJZD له تأثير مثبط كبير على تكوين CRC الناجم عن UC. وجدت الدراسات السابقة أن LJZD يمكن أن يخفف الالتهاب ويقلل من مستويات التعبير عن TNF-α و IL-6 و IL-1β في الجسم الحي16،28،46. في هذه الدراسة ، تم زيادة مستوى مصل IL-6 من الفئران في المجموعة النموذجية ، ولكن تم تثبيط إنتاج مصل IL-6 بشكل كبير بعد علاج LJZD.

أظهرت الملاحظة المجهرية تسلل التهابي لأنسجة المستقيم ، وتدمير الحاجز المخاطي ، والحد من إفراز المخاط ، وعدم انتظام أو اختفاء الخلايا الكأسية ، وتشويه أو ضمور الخبايا المعوية ، واضطراب واضح في بنية الغدة في الفئران المعالجة ب AOM / DSS. بعد علاج LJZD ، كان مورفولوجيا الخلايا الكأسية في أنسجة القولون والمستقيم طبيعيا ، وكان هيكل العطلة والغدة منتظما ، وتم تحسين الأضرار التي لحقت بالحاجز المخاطي. الوصلة الضيقة الظهارية (TJ) هي حاجز ميكانيكي لا غنى عنه للحفاظ على سلامة الخلية ونفاذيتها ، بما في ذلك بشكل أساسي ZO-1 و Occludin29. تم الإبلاغ عن أن التعبير عن بروتينات TJ مثل ZO-1 في أنسجة القولون والمستقيم لمرضى UC-CRC انخفض بشكل كبير47,48. أظهرت هذه الدراسة أن بنية الأنسجة المخاطية للقولون والمستقيم لفئران UC-CRC قد دمرت ، وانخفض التعبير عن ZO-1 و Occludin في الأنسجة ، بينما يمكن ل LJZD عكس هذا الانخفاض ، مما يشير إلى أن LJZD قد يحمي سلامة الحاجز المخاطي للمستقيم عن طريق زيادة التعبير عن ZO-1 و Occludin. المستضد المرتبط بالمجال النووي (KI67) هو عنصر أساسي في تنظيم دورة الخلية ويستخدم على نطاق واسع كمؤشر للنشاط التكاثري للخلايا السرطانية30,49. في هذه الدراسة ، تم زيادة تعبير بروتين KI67 في المجموعة النموذجية مقارنة بالمجموعة الضابطة ، مما يشير إلى تكاثر كبير للخلايا السرطانية في أنسجة القولون والمستقيم. بعد علاج LJZD ، انخفض التعبير عن بروتين KI67 ، مما أظهر أن LJZD كان له تأثير جيد على UC-CRC.

باختصار ، يمكن للحقن داخل الصفاق AOM وتحفيز الدورة الدموية DSS إنشاء نموذج UC-CRC بشكل فعال في فترة قصيرة وتشبه UC-CRC البشري من حيث التشريح المرضي والآليات الجزيئية للتكوين. كوصفة طبية كلاسيكية ، يمكن أن يقلل LJZD من درجة DAI ، ووزن أنسجة القولون والمستقيم ، ومستويات العوامل الالتهابية ، ويمنع بشكل فعال تقصير طول القولون والمستقيم ، ويلعب دورا في مرحلة UC في الفئران UC-CRC. في الوقت نفسه ، يمكن أن يزيد من التعبير عن بروتينات TJ ، ويحسن بشكل كبير الضرر المرضي لأنسجة القولون والمستقيم ، ويقلل من التعبير عن بروتين KI67 ، ويقلل بشكل كبير من حدوث أورام الأنسجة ، ويمنع عملية تحويل UC إلى CRC. تقدم هذه الدراسة فكرة جديدة لعلاج UC-CRC.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgments

تم دعم هذا العمل من قبل إدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة جيلين (YDZJ202201ZYTS181).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Azoxymethane Sigma A5486
5-amino salicylic acid Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd 3819413
C57BL/6J mice Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd NO 210726210100853716
Cover slip Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432C
DAB color development kit Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 2005289
Dewatering machine  Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JJ-12J
Dextran sulfate sodium Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd MB5535
Embedding machine Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd JB-P5
Hematoxylin-eosin dye Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd B1000
IL-6 Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd MM-0163M2
Isoflurane RWD Life Science Co., Ltd R510-22-10
KI67 primary antibody Google Biotechnology Inc GB121141
Neutral gum Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd 10004160
Object slide Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd 10212432A
Occludin primary antibody Affnity DF7504
Orthostatic optical microscope Nikon Nikon Eclipse CI
Pathological microtome Shanghai Leica Instrument Co., Ltd RM2016
ZO-1 primary antibody Abcam ab221547

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 Cancers in 185 Countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Tsai, K. Y., et al. Novel heavily fucosylated glycans as a promising therapeutic target in colorectal cancer. J Transl Med. 21 (1), 505 (2023).
  3. Chen, X., et al. Smoking, genetic predisposition, and colorectal cancer risk. Clin Transl Gastroenterol. 12 (3), e00317 (2021).
  4. Keum, N., Giovannucci, E. Global burden of colorectal cancer: emerging trends, risk factors and prevention strategies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (12), 713-732 (2019).
  5. Sninsky, J. A., Shore, B. M., Lupu, G. V., Crockett, S. D. Risk factors for colorectal polyps and cancer. Gastrointest Endosc Clin N Am. 32 (2), 195-213 (2022).
  6. Rivera, A. P., et al. Ulcerative colitis-induced colorectal carcinoma: A deleterious concatenation. Cureus. 14 (2), e22636 (2022).
  7. Faye, A. S., Holmer, A. K., Axelrad, J. E. Cancer in inflammatory bowel disease. Gastroenterol Clin North Am. 51 (3), 649-666 (2022).
  8. Becker, W. R., et al. Single-cell analyses define a continuum of cell state and composition changes in the malignant transformation of polyps to colorectal cancer. Nat Genet. 54 (7), 985-995 (2022).
  9. Choi, J. K., Kim, D. W., Shin, S. Y., Park, E. C., Kang, J. G. Effect of ulcerative colitis on incidence of colorectal cancer: Results from the nationwide population-based cohort study (2003-2013). J Cancer. 7 (6), 681-686 (2016).
  10. Gallo, G., Kotze, P. G., Spinelli, A. Surgery in ulcerative colitis: When? How. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 32-33, 71-78 (2018).
  11. Shah, S. C., Itzkowitz, S. H. Colorectal cancer in inflammatory bowel disease: Mechanisms and management. Gastroenterology. 162 (3), 715.e3-730.e3 (2022).
  12. Fabregas, J. C., Ramnaraign, B., George, T. J. Clinical updates for colon cancer care in 2022. Clin Colorectal Cancer. 21 (3), 198-203 (2022).
  13. Hu, J., et al. Pharmacological and molecular analysis of the effects of Huangqi Jianzhong decoction on proliferation and apoptosis in GES-1 cells infected with H. pylori.Front Pharmacol. 13, 1009705 (2022).
  14. Shang, L., et al. Mechanism of Sijunzi decoction in the treatment of colorectal cancer based on network pharmacology and experimental validation. J Ethnopharmacol. 302 (Pt A), 115876 (2023).
  15. Zhang, X. Y., et al. Sishen pill maintained colonic mucosal barrier integrity to treat ulcerative colitis via Rho/ROCK signaling pathway. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5536679 (2021).
  16. Wu, X., Dai, Y., Nie, K. Research progress of Liujunzi decoction in the treatment of tumor-associated anorexia. Drug Des Devel Ther. 16, 1731-1741 (2022).
  17. Han, Y., et al. Liujunzi decoction exerts potent antitumor activity in oesophageal squamous cell carcinoma by inhibiting miR-34a/STAT3/IL-6R feedback loop and modifies antitumor immunity. Phytomedicine. 111, 154672 (2023).
  18. Chen, D., Zhao, J., Cong, W. Chinese herbal medicines facilitate the control of chemotherapy-induced side effects in colorectal cancer: Progress and perspective. Front Pharmacol. 9, 1442 (2018).
  19. Wang, M., Wang, S., Su, Q., Ma, T. Effect of combining early chemotherapy with Zhipu Liujunzi decoction under the concept of strengthening and consolidating body resistance for gastric cancer patients and nursing strategy. Contrast Media Mol Imaging. 2021, 2135924 (2021).
  20. Lin, Y., Koumba, M. H., Qu, S., Wang, D., Lin, L. Blocking NFATc3 ameliorates azoxymethane/dextran sulfate sodium induced colitis-associated colorectal cancer in mice via the inhibition of inflammatory responses and epithelial-mesenchymal transition. Cell Signal. 74, 109707 (2020).
  21. Yu, C. T., et al. Identification of significant modules and targets of Xian-Lian-Jie-Du decoction based on the analysis of transcriptomics, proteomics and single-cell transcriptomics in colorectal tumor. J Inflamm Res. 15, 1483-1499 (2022).
  22. Lin, L., Wang, D., Qu, S., Zhao, H., Lin, Y. miR-370-3p alleviates ulcerative colitis-related colorectal cancer in mice through inhibiting the inflammatory response and epithelial-mesenchymal transition. Drug Des Devel Ther. 14, 1127-1141 (2020).
  23. Qiu, X., Ma, J., Wang, K., Zhang, H. Chemopreventive effects of 5-aminosalicylic acid on inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer and dysplasia: a systematic review with meta-analysis. Oncotarget. 8 (1), 1031-1045 (2017).
  24. Hou, Y., et al. Longzhibu disease and its therapeutic effects by traditional Tibetan medicine: Ershi-wei Chenxiang pills. J Ethnopharmacol. 249, 112426 (2020).
  25. Xie, N., et al. Rhodiola crenulate alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury via adjusting NF-κB/NLRP3-mediated inflammation. Phytomedicine. 103, 154240 (2022).
  26. Gok, A., et al. Role of reduced Bdnf expression in novel Apc mutant allele-induced intestinal and colonic tumorigenesis in mice. In Vivo. 37 (4), 1562-1575 (2023).
  27. Lin, Y., et al. Pou3f1 mediates the effect of Nfatc3 on ulcerative colitis-associated colorectal cancer by regulating inflammation. Cell Mol Biol Lett. 27 (1), 75 (2022).
  28. Xu, W., Zhao, R., Yuan, B. The therapeutic effect of traditional LiuJunZi decoction on ovalbumin-induced asthma in Balb/C mice. Can Respir J. 2021, 6406295 (2021).
  29. Kaihara, T., et al. Redifferentiation and ZO-1 reexpression in liver-metastasized colorectal cancer: possible association with epidermal growth factor receptor-induced tyrosine phosphorylation of ZO-1. Cancer Sci. 94 (2), 166-172 (2003).
  30. Lei, H. T., et al. Ki67 testing in the clinical management of patients with non-metastatic colorectal cancer: Detecting the optimal cut-off value based on the restricted cubic spline model. Oncol Lett. 24 (6), 420 (2022).
  31. Olén, O., et al. Colorectal cancer in ulcerative colitis: a Scandinavian population-based cohort study. Lancet. 395 (10218), 123-131 (2020).
  32. Arnold, M., et al. Global patterns and trends in colorectal cancer incidence and mortality. Gut. 66 (4), 683-691 (2017).
  33. Biller, L. H., Schrag, D. Diagnosis and treatment of metastatic colorectal cancer: A review. Jama. 325 (7), 669-685 (2021).
  34. Talero, E., et al. Expression patterns of sirtuin 1-AMPK-autophagy pathway in chronic colitis and inflammation-associated colon neoplasia in IL-10-deficient mice. Int Immunopharmacol. 35, 248-256 (2016).
  35. Qian, Z., et al. Mulberry fruit prevents LPS-induced NF-κB/pERK/MAPK signals in macrophages and suppresses acute colitis and colorectal tumorigenesis in mice. Sci Rep. 5, 17348 (2015).
  36. Pothuraju, R., et al. Depletion of transmembrane mucin 4 (Muc4) alters intestinal homeostasis in a genetically engineered mouse model of colorectal cancer. Aging. 14 (5), 2025-2046 (2022).
  37. Perše, M., Cerar, A. Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks. J Biomed Biotechnol. 2012, 718617 (2012).
  38. Zeng, B., et al. Dextran sodium sulfate potentiates NLRP3 inflammasome activation by modulating the KCa3.1 potassium channel in a mouse model of colitis. Cell Mol Immunol. 19 (8), 925-943 (2022).
  39. Parang, B., Barrett, C. W., Williams, C. S. AOM/DSS model of colitis-associated cancer. Methods Mol Biol. 1422, 297-307 (2016).
  40. Tanaka, T., et al. A novel inflammation-related mouse colon carcinogenesis model induced by azoxymethane and dextran sodium sulfate. Cancer Sci. 94 (11), 965-973 (2003).
  41. Suzuki, R., Kohno, H., Sugie, S., Nakagama, H., Tanaka, T. Strain differences in the susceptibility to azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colon carcinogenesis in mice. Carcinogenesis. 27 (1), 162-169 (2006).
  42. De Robertis, M., et al. The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies. J Carcinog. 10, 9 (2011).
  43. Song, J. L., et al. Dietary mixed cereal grains ameliorate the azoxymethane and dextran sodium sulfate-induced colonic carcinogenesis in C57BL/6J mice. J Med Food. 23 (4), 440-452 (2020).
  44. Zou, Y. F., et al. Effects of Huaier extract on ameliorating colitis-associated colorectal tumorigenesis in mice. Onco Targets Ther. 13, 8691-8704 (2020).
  45. Luo, X., et al. Obacunone reduces inflammatory signalling and tumour occurrence in mice with chronic inflammation-induced colorectal cancer. Pharm Biol. 58 (1), 886-897 (2020).
  46. Dai, Y., et al. Liujunzi Decoction ameliorated cisplatin-induced anorexia by inhibiting theJAK-STAT signaling pathway and coordinating anorexigenic and orexigenic neuropeptides in rats. J Ethnopharmacol. 285, 114840 (2022).
  47. Ghosh, D., Dutta, A., Kashyap, A., Upmanyu, N., Datta, S. PLP2 drives collective cell migration via ZO-1-mediated cytoskeletal remodeling at the leading edge in human colorectal cancer cells. J Cell Sci. 134 (18), jcs253468 (2021).
  48. Yan, S., et al. Berberine regulates short-chain fatty acid metabolism and alleviates the colitis-associated colorectal tumorigenesis through remodeling intestinal flora. Phytomedicine. 102, 154217 (2022).
  49. Ma, Y. L., et al. Immunohistochemical analysis revealed CD34 and Ki67 protein expression as significant prognostic factors in colorectal cancer. Med Oncol. 27 (2), 304-309 (2010).

Tags

نموذج سرطان التهاب القولون المستقيم الفئران تأثير علاجي الطب الصيني سرطان القولون والمستقيم الجهاز الهضمي ورم خبيث آفة سرطانية CRC المرتبطة بجامعة كاليفورنيا تطوير دواء جديد الطب الصيني التقليدي ليوجونزي ديكوتيون أزوميثان كبريتات ديكستران الصوديوم وزن جسم الفأر طول القولون والمستقيم العوامل المرضية العوامل الالتهابية وظيفة حاجز القولون والمستقيم علامات السرطان الوقاية والعلاج
إنشاء نموذج سرطان التهاب القولون والمستقيم في الفئران وتقييم التأثير العلاجي للطب الصيني
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P.,… More

Lyu, D., Wang, W., Xu, H., Li, P., Zhang, W., Meng, X., Liu, S. Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine. J. Vis. Exp. (200), e66045, doi:10.3791/66045 (2023).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter