Técnicas para amostragem rápida de seis órgãos cruciais em Xenopus adultos

Resumo

Este artigo apresenta um guia para amostragem de seis órgãos significativos e diversos em Xenopus adultos que podem ser acessados de forma rápida e fácil: o ventrículo cardíaco, o lobo do fígado, o pâncreas, os corpos adiposos, os rins pareados e a pele.

Resumo

Xenopus tem sido um poderoso organismo modelo para entender o desenvolvimento e a doença dos vertebrados por mais de cem anos. Embora as técnicas de análise experimental e dissecação do embrião tenham sido bem documentadas, as descrições das estruturas e órgãos adultos de Xenopus , juntamente com as técnicas para trabalhar com adultos, não foram atualizadas para levar em consideração os requisitos de abordagens modernas como proteômica quantitativa e transcriptômica de célula única. As perspectivas centradas no tipo celular e no gene requerem observações contrastantes em estágios embrionários com as dos tecidos adultos. Os órgãos da larva sofrem mudanças significativas em sua estrutura geral, morfologia e localização anatômica ao longo da transição larval para adulta, principalmente durante a remodelação maciça da metamorfose. O estabelecimento de padrões robustos para identificação e dissecção de órgãos é crucial para garantir que os conjuntos de dados resultantes de estudos realizados em diferentes laboratórios possam ser consistentes. O presente protocolo identifica seis dos órgãos do Xenopus adulto, demonstrando métodos para dissecção e amostragem do ventrículo cardíaco, fígado, corpo adiposo, pâncreas, rim pareado e pele do Xenopus adulto. Dependendo dos métodos de preservação, os órgãos dissecados podem ser usados para proteômica quantitativa, transcriptômica de célula única/núcleo, hibridização in situ , imuno-histoquímica, histologia, etc. Este protocolo visa padronizar a amostragem de tecidos e facilitar as investigações multilaboratoriais dos sistemas de órgãos adultos.

Introdução

Embora a "dissecação digital" de Xenopus adulto esteja disponível¹, a amostragem replicável de órgãos e tecidos de Xenopus adulto permanece um desafio sem as instruções detalhadas disponíveis para outros modelos adultos (por exemplo, camundongos ^2,3,4). Este artigo tem como objetivo fornecer orientações claras para amostragem precisa e replicável de órgãos de Xenopus adultos, semelhante ao que está atualmente disponível para suas larvas⁵. A ênfase é colocada na facilidade de conclusão para manter o máx....

Protocolo

Todos os experimentos foram realizados de acordo com as normas e regulamentos do IACUC (Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais) da Harvard Medical School (IS 00001365_3). Os resultados representativos são mostrados para um macho albino maduro perfundido e não perfundido Xenopus laevis.

1. Preparação experimental

NOTA: Se o protocolo de perfusão⁸ estiver sendo seguido antes da amostragem, pule para a etapa 2.2.

1. Certifique-se de que a instituição de pesquisa aprovou a técnica de eutanásia descrita neste protocolo.
2. Preparar uma solução....

Resultados

Utilizando a Figura 1 à Figura 20 e seguindo todas as etapas deste protocolo, o ventrículo cardíaco, o lobo esquerdo do fígado, o pâncreas, os corpos adiposos esquerdos, rins pareados e um retalho de pele foram excisados de forma limpa dentro de uma hora após a eutanásia. Dentro desse tempo, as amostras são enxaguadas e aparadas para que apareçam, conforme mostrado na Figura 21.

Discussão

Como este protocolo visa maximizar o frescor, algumas amostras podem incluir tecidos indesejados. Por exemplo, o ducto hepatopancreático e algum mesentério são amostrados com o pâncreas, e algum tecido peritoneal, glândulas supra-renais e ureteres sempre serão amostrados com os rins pareados.  Se o frescor não for uma preocupação, uma amostragem mais precisa pode ser obtida usando técnicas modificadas.

A aparência e a localização dos órgãos são comparáveis entre os sexos e as espécies de X.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
5x Lupa com Luz LED e Suporte	amazon.com	B08QJ6J8P1	luz não deve produzir calor
Pipetas de Transferência Descartáveis	VWR	414004-036
Pinça de Dissecação de Ponta Fina Fisher	Scinetific	08-875
Tesoura de dissecação pione afiado, reto 6.5"	VWR	76457-374
Bandeja de Dissecção	Fisher Scinetific	14-370-284	são uma alternativa aceitável
Recipiente de eutanásia	US Plastic	Item  2860	recipientes opacos alternativos aceitáveis
Tampa de recipiente de eutanásia	US Plastic	Item  Tesoura de Iridectomia 3047
6"	vwr	470018-938	tesouras de íris são uma alternativa aceitável
MS-222: Síncaína (anteriormente tricaine)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Bicarbonato de Sódio, Pó, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Espécime de Pinça, Serrilhado	VWR	82027-442
T-Pins para dissecar	Fisher Scinetific	S99385

As folhas de isopor