Uma técnica de injeção intraperitoneal em peixe-zebra adulto que minimiza os danos corporais e a mortalidade associada

Resumo

Um novo método de injeção intraperitoneal (IP) em peixe-zebra adulto é descrito. Ao manusear compostos tóxicos como a doxorrubicina, esse procedimento é mais eficaz do que os dois métodos de IP relatados anteriormente. A técnica foi projetada para ser facilmente adotada por pesquisadores com experiência limitada no modelo de peixe-zebra.

Resumo

O peixe-zebra adulto (Danio rerio), que é geneticamente acessível, está sendo empregado como um valioso modelo de vertebrado para estudar doenças humanas, como a cardiomiopatia. A injeção intraperitoneal (IP) é um método importante que fornece compostos ao corpo para testar efeitos terapêuticos ou gerar modelos de doenças, como a cardiomiopatia induzida por doxorrubicina (CIVD). Atualmente, existem dois métodos de injeção de IP. Ambos os métodos têm limitações ao lidar com compostos tóxicos como a doxorrubicina, que resultam em efeitos colaterais que se manifestam como danos graves à forma do corpo e morte de peixes. Embora essas deficiências possam ser superadas por um extenso treinamento do investigador, é desejável um novo método de injeção de IP que tenha efeitos colaterais mínimos. Aqui, é relatado um método exclusivo de injeção de IP capaz de lidar com compostos tóxicos. A função cardíaca consistentemente reduzida pode resultar sem incorrer em morte significativa de peixes. A técnica pode ser facilmente dominada por pesquisadores que têm experiência mínima com peixes-zebra adultos.

Introdução

O peixe-zebra (Danio rerio) tem ganhado atenção como modelo experimental para o estudo de doenças humanas, pois esse animal engloba alta homologia gênica e orgânica em relação aos humanos, fertilização externa, facilidade de manipulação genética e transparência corporal até a maturidade precoce, o que facilita uma infinidade de aplicações de imagem¹. Ao contrário do processo direto de entrega de medicamentos diretamente na água para embriões e larvas de peixe-zebra, a administração de medicamentos a peixes-zebra adultos apresenta um esforço mais intrincado e desafiador².

Em peixes adu....

Protocolo

Todos os procedimentos realizados foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Mayo Clinic, aderindo aos padrões descritos no 'Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório' (National Academies Press, 2011). Todos os peixes-zebra do estudo pertencem à cepa Wild Indian Karyotype (WIK). Os detalhes dos reagentes e do equipamento usado para o estudo estão listados na Tabela de Materiais.

1. Preparação e armazenamento da solução-mãe de doxorrubicina

1. Obtenha o estoque de doxorrubicina de uma fonte comercial.
   NOTA: A doxorrubicina é sensível à luz, portanto, adquira....

Resultados

Anteriormente, dois métodos intraperitoneais (IP) foram empregados para a administração de doxorrubicina em peixes-zebra adultos ^4,10. No método I, também conhecido como método clássico de injeção IP, conforme descrito por Kinkel et ^al.4, a agulha foi inserida em um ângulo de 45° em relação à linha média entre as nadadeiras pélvicas com o abdome voltado para cima. No método II, ou no método de injeção IP alternativo descrito por Ma et

Discussão

Diferente dos dois métodos de injeção de IP existentes ^4,10, o novo método de injeção de IP é caracterizado pelas seguintes características distintas. Em primeiro lugar, é usado um ângulo de penetração da agulha exclusivo (próximo a zero); em segundo lugar, a agulha penetra no peixe através de um local único, ou seja, um orifício natural na superfície ventral de um peixe, o que facilitaria a injeção; e, finalmente, o movimento da agulha é de anterior par.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
10 μ L NanoFil-seringa	World Precision Instruments, Inc	Ferramenta de injeção	NANOFIL
34 G agulha	World Precision Instruments, Inc	NI34BV-2	ferramenta de injeção
60 mm Placa de Petri	fisher scientific/fisherbrand	FB0875713A	colocando a esponja
Microscópio de dissecação	Nikon	SMZ800	Injetando o medicamento Dox Doxorubicina
cloridrato	Sigma	D1515-10MG	para criar o modelo DIC
Ecocardiografia	VISUAL SONICS	Vevo 3100	medindo a função cardíaca
Esponja de Espuma	Jaece Industries	L800-D	colocando o peixe
Solução salina balanceada de Hank (HBBS)	Thermo Fisher	14025076	Veículo para
Microcentrífuga Dox	southernlabware	MyFuge/C1012	coleta a solução Dox
Balança de Precisão	Torbal	AD60	Balanças Digitais
Tricaine	Argent	MS-222	Tubo de anestesia para peixes
Eppendorf	1,5 mL	de armazenamento
software vevo LAB	FUJIFILM VISUAL SONICS	5.6.0	Quantificação do coração