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Artigo de método

Uma técnica modificada para induzir a síndrome dos ovários policísticos em camundongos

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DOI:

10.3791/66637

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5 de julho de 2024

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* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo introduz uma técnica para induzir modelos de síndrome dos ovários policísticos (SOP) em camundongos por meio da liberação controlada de letrozol usando mini-bombas. Sob anestesia adequada, a minibomba foi implantada por via subcutânea e a SOP foi induzida com sucesso nos camundongos após um certo período de liberação da minibomba.

Resumo

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é uma das principais causas de infertilidade em mulheres. Modelos animais são amplamente utilizados para estudar os mecanismos etiológicos da SOP e para o desenvolvimento de medicamentos relacionados. Modelos de camundongos induzidos por letrozol replicam os fenótipos metabólicos e reprodutivos de pacientes com SOP. O método tradicional de tratamento com letrozol em camundongos com SOP requer dosagem diária durante um determinado período, o que pode ser trabalhoso e causar estresse significativo aos camundongos. Este estudo descreve um método simples e eficaz para induzir SOP em camundongos, implantando uma minibomba de liberação controlada de letrozol. Uma mini-bomba capaz de liberar estável e contínua uma quantidade quantitativa de letrozol foi fabricada e implantada por via subcutânea em camundongos sob anestesia. Este estudo demonstrou que o modelo de camundongo imitou com sucesso as características da SOP após o implante da minibomba de letrozol. Os materiais e equipamentos usados neste estudo estão prontamente disponíveis para a maioria dos laboratórios, não exigindo personalização especial. Coletivamente, este artigo fornece um método único e fácil de executar para induzir SOP em camundongos.

Introdução

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é uma das condições mais comuns entre as mulheres em idade reprodutiva1. Afeta até 18% das mulheres em todo o mundo e é a principal causa de infertilidade feminina em todo o mundo 2,3. A SOP é caracterizada por uma série de anormalidades reprodutivas inter-relacionadas, incluindo secreção perturbada de gonadotrofinas, anovulação crônica, aumento da produção de andrógenos e morfologia ovariana policística4. Além dos distúrbios ginecológicos, a SOP também aumenta o risco de doenças cardiova....

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Protocolo

Todos os protocolos experimentais em animais neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Fudan. Camundongos C57BL/6J fêmeas, com 4 semanas de idade, foram usados aqui. Os detalhes dos animais, reagentes e equipamentos usados neste estudo estão listados na Tabela de Materiais.

1. Preparação da mini-bomba

  1. Pegue o pó de letrozol (50 mg) armazenado no frasco da embalagem original, centrifugue o pó de letrozol no frasco a 300 x g por 5 s (à temperatura ambiente) e abra a tampa.
  2. Adicione lentamente 625 μL de DMSO ao pó ....

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Resultados

O protocolo experimental e algumas etapas críticas são mostrados na Figura 1 e na Figura 2. Os níveis séricos de testosterona são exibidos na Figura 3A. Camundongos tratados com mini-bomba de letrozol (doravante denominados camundongos LTZ) exibiram níveis séricos de testosterona significativamente elevados em comparação com camundongos controle fêmeas. Enquanto isso, a análise histológica dos ovários mostrou que os camundongos LTZ .......

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Discussão

Este relatório demonstra um protocolo simples para induzir SOP em camundongos usando materiais de fácil acesso. O modelo de SOP em camundongos é essencial para explorar os mecanismos da SOP e rastrear drogas26. Dos métodos disponíveis para induzir modelos de SOP em camundongos, a indução de letrozol é um dos mais comumente usados. O uso de letrozol pode desenvolver e manter um quadro hiperandrogênico inibindo a conversão de testosterona em estradiol ou aumentando .......

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Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

O estudo foi apoiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China (subsídios 2021YFC2700701), a Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (subsídios 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), Fundo de Inovação da Academia Chinesa de Ciências Médicas para Ciências Médicas (subsídio 2019-I2M-5-064), a Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (subsídios 21Y11907600), Comissão Municipal de Saúde e Planejamento Familiar de Xangai (subsídio 20215Y0216), Programa de Inovação Colaborativa da Comissão Municipal de Saúde de Xangai (concessão 2020CXJQ01), Plano de Pesquisa Clínica do Centro de Desenv....

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
SeringaBofeng BiotechBD3008411ML (estéril)
Tubo de centrifugaçãoBiological Hope1850-K15ML (estéril)
PipetaEppendorf3123000268-A100μ L-1000μ L (estéril)
PipetaTopPette701010100810μ L-100μ L (estéril)
Letrozole em póSigmaL6545-50MGDrogas de ação primária (estéril)
PEG (Poli (etilenoglicol))SolarbioP8250Usado para dissolução (estéril)
Solução salina fisiológica estérilBiosharpBL158Ade armazenamento de mini-bomba
ALZET1004Armazenamento de letrozol e liberação sustentada (estéril)
Dimetilsulfóxido BiosharpBS087Usado para dissolução (estéril)
Máquina de anestesia para pequenos animaisRWD R500IPUsado para anestesia
Isoflurano RWD20071302Usado para anestesia
HemostáticosBiosharpBS-HF-S-125Tesoura de instrumento cirúrgico
BiosharpBS-SOR-S-100PInstrumento cirúrgico
Porta-agulhasShangHaiJZJ32010Instrumento cirúrgico
FórcepsRWD F12028Instrumento cirúrgico
Agulha e sutura absorvível 4-0JINGHUANCR413Instrumento cirúrgico
Cotonetes de iodopovidonaSingleLadyGB26368-2010Desinfecção da pele
Creme depilatórioZIKER BIOTECHNOLOGYZK-L2701 Agente de depilação para animais de laboratório
Luvas de nitriloBiosharpBC040-LUsado para operação asséptica
Gaze estérilZHENDEBA69087Usado para limpar líquidos
C57BL / 6J RatosShanghai Model Organisms CenterN / AIdade: 4 semanas
Lubrificante para olhos de animais de estimaçãoBAITESHF021153Usado para lubrificante de olho de rato
Injeção de meloxicamMEIDAJIAR21064-21Usado para analgesia de camundongo (estéril)
Bombas osmóticas

Referências

  1. Dapas, M., Dunaif, A. Deconstructing a syndrome: Genomic insights into PCOS causal mechanisms and classification. Endocr Rev. 43 (6), 927-965 (2022).
  2. Teede, H., et al. Anti-müllerian hormone in PCOS: A review informing intern....

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Reimpressões e permissões

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