Artigo de método

Uma técnica modificada para induzir a síndrome dos ovários policísticos em camundongos

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DOI:

10.3791/66637

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5 de julho de 2024

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1Obstetrics and Gynecology Hospital, Institute of Reproduction and Development, Fudan University, 2Women's Hospital, Key Laboratory of Reproductive Genetics (Ministry of Education), Zhejiang University School of Medicine, 3International Institutes of Medicine, the Fourth Affiliated Hospital, Zhejiang University School of Medicine, 4Research Units of Embryo Original Diseases, Chinese Academy of Medical Sciences (No. 2019RU056), 5State Key Laboratory of Cardiology

* These authors contributed equally

Neste artigo

Resumo

Este protocolo introduz uma técnica para induzir modelos de síndrome dos ovários policísticos (SOP) em camundongos por meio da liberação controlada de letrozol usando mini-bombas. Sob anestesia adequada, a minibomba foi implantada por via subcutânea e a SOP foi induzida com sucesso nos camundongos após um certo período de liberação da minibomba.

Resumo

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é uma das principais causas de infertilidade em mulheres. Modelos animais são amplamente utilizados para estudar os mecanismos etiológicos da SOP e para o desenvolvimento de medicamentos relacionados. Modelos de camundongos induzidos por letrozol replicam os fenótipos metabólicos e reprodutivos de pacientes com SOP. O método tradicional de tratamento com letrozol em camundongos com SOP requer dosagem diária durante um determinado período, o que pode ser trabalhoso e causar estresse significativo aos camundongos. Este estudo descreve um método simples e eficaz para induzir SOP em camundongos, implantando uma minibomba de liberação controlada de letrozol. Uma mini-bomba capaz de liberar estável e contínua uma quantidade quantitativa de letrozol foi fabricada e implantada por via subcutânea em camundongos sob anestesia. Este estudo demonstrou que o modelo de camundongo imitou com sucesso as características da SOP após o implante da minibomba de letrozol. Os materiais e equipamentos usados neste estudo estão prontamente disponíveis para a maioria dos laboratórios, não exigindo personalização especial. Coletivamente, este artigo fornece um método único e fácil de executar para induzir SOP em camundongos.

Introdução

A síndrome dos ovários policísticos (SOP) é uma das condições mais comuns entre as mulheres em idade reprodutiva1. Afeta até 18% das mulheres em todo o mundo e é a principal causa de infertilidade feminina em todo o mundo 2,3. A SOP é caracterizada por uma série de anormalidades reprodutivas inter-relacionadas, incluindo secreção perturbada de gonadotrofinas, anovulação crônica, aumento da produção de andrógenos e morfologia ovariana policística4. Além dos distúrbios ginecológicos, a SOP também aumenta o risco de doenças cardiovasculares 5,6. Apesar de décadas de pesquisa, a etiologia da SOP permanece obscura 7,8.

Para obter melhores insights sobre a patogênese da SOP e desenvolver novas terapias, a criação de modelos animais que imitam de perto a fisiologia humana é de tremenda importância9. Os modelos de roedores de SOP atualmente relatados incluem aqueles induzidos por tratamentos com testosterona, letrozol e valerato de estradiol, entre outros. A testosterona induz hiperandrogenemia e é mais comumente usada como indutor da SOP em ratos10. O DHEA tem sido usado para induzir SOP em roedores, aumentando os níveis de testosterona, as relações LH/FSH (hormônio luteinizante/hormônio folículo-estimulante) e causando ciclos estrais irregulares11. O valerato de estradiol (EV) é um estrogênio de ação prolongada, e estudos usando esse método mostram que os níveis de hormônios esteróides sexuais e gonadotrofinas variam dependendo da dose de EV administrada 12,13,14. O letrozol é um inibidor da aromatase não esteróide15. O tratamento com letrozol induz estro não cíclico, aumenta o peso ovariano, o peso corporal, aumenta os adipócitos, maximiza o desenvolvimento folicular e eleva os níveis de testosterona em ratas16,17. Camundongos tratados com letrozol apresentam aumento do número de folículos sinusais e cistos hemorrágicos, bem como concentrações elevadas de LH, FSH, estradiol e progesterona18,19.

Atualmente, os principais métodos para modelagem da SOP induzida por letrozol envolvem administração oral e injeção subcutânea, ambas exigindo doses diárias repetidas 20,21,22. Esses métodos são demorados e trabalhosos, e a administração repetitiva provavelmente causa estresse significativo aos animais23. Embora alguns estudos utilizem pellets de letrozol24,25, esses produtos precisam ser personalizados e são caros. Este relato descreve uma técnica para induzir SOP em camundongos usando mini-bombas. Este método é simples, economiza tempo e usa ferramentas e equipamentos cirúrgicos que estão prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.

Protocolo

Todos os protocolos experimentais em animais neste estudo foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Fudan. Camundongos C57BL/6J fêmeas, com 4 semanas de idade, foram usados aqui. Os detalhes dos animais, reagentes e equipamentos usados neste estudo estão listados na Tabela de Materiais.

1. Preparação da mini-bomba

  1. Pegue o pó de letrozol (50 mg) armazenado no frasco da embalagem original, centrifugue o pó de letrozol no frasco a 300 x g por 5 s (à temperatura ambiente) e abra a tampa.
  2. Adicione lentamente 625 μL de DMSO ao pó de letrozol com uma pipeta e misture bem para obter uma solução estoque na concentração de 8 mg / 100 μL, totalizando 625 μL.
    NOTA: Se estiver usando um tamanho de embalagem diferente de pó de letrozol, calcule o volume necessário de DMSO com antecedência para configurar a solução estoque. O pó de letrozol, DMSO e outros compostos relacionados devem ser de grau estéril. As pontas da pipeta, tubos e outros itens relacionados devem ser estéreis ou esterilizados antes do uso.
  3. Conte o número de ratos necessários de acordo com o projeto experimental.
  4. Retire a quantidade total de solução-mãe de letrozol necessária com uma pipeta, dependendo do número de camundongos necessários, e injete-a lentamente no tubo de centrífuga.
    NOTA: Camundongos de 4 semanas de idade para uma exposição de 8 semanas foram selecionados para induzir o modelo de camundongos SOP. A dose total de letrozol é de 8 mg para cada camundongo, o que requer duas bombas consecutivas para serem implantadas (uma bomba é liberada por 4 semanas), ou seja, 4 mg / 4 semanas por bomba. Conforme mencionado na etapa 1.2, a concentração da solução estoque de letrozol é de 8 mg / 100 μL. Para preparar as bombas, são necessários 50 μL de solução estoque para cada bomba, conforme calculado abaixo: um total de 4 mg de letrozol dividido por 8 mg / 100 μL.
  5. Retire uma quantidade igual de PEG300, adicione-o à solução de letrozol e misture bem (pode ser vórtice adequadamente).
  6. Prepare a solução do veículo de controle para o grupo de controle (50 μL de DMSO + 50 μL de PEG300 para cada bomba sem letrozol).
  7. Preparar um número adequado de tubos de centrífuga estéreis de acordo com o número de bombas necessárias; um tubo de centrífuga de 15 mL precisa ser preparado para cada bomba.
  8. Retire a solução salina com uma seringa e adicione 5 mL de solução salina a cada tubo de centrifugação. Em seguida, tampe os tubos da centrífuga e coloque-os em um suporte de tubos para uso posterior.
  9. Use um novo par de luvas estéreis, retire as mini-bombas na quantidade desejada e coloque-as em uma bancada ou recipiente limpo e estéril.
  10. Aperte suavemente a tampa que corresponde ao corpo da bomba com o polegar e o indicador e segure o corpo da bomba com a outra mão.
  11. Lentamente, cutuque a porta de enchimento da bomba várias vezes com o tubo fino preso à tampa (Figura 1B).
    NOTA: Se não estiver desobstruído, o fluido pode não fluir livremente no tubo após o enchimento.
  12. Pegue a agulha que corresponde à bomba e uma seringa estéril de 1 mL. Encaixe a agulha na seringa e aperte-a (Figura 1C).
  13. Retire cuidadosa e lentamente a solução final de letrozol configurada acima com a seringa recém-montada (Figura 1D).
    NOTA: A aspiração da solução de letrozol precisa ser feita lenta e uniformemente. A aspiração rápida pode gerar bolhas de ar, que podem afetar a injeção subsequente da solução do medicamento.
  14. Injete a solução de letrozol na mini-bomba.
    1. Aperte cuidadosamente uma minibomba com uma mão para que fique em pé e, com a outra mão, segure a seringa de 1 mL acima mencionada e insira-a lentamente no fundo da bomba (Figura 1E).
      NOTA: Se a agulha não for inserida na parte inferior da bomba, o líquido na bomba pode borbulhar facilmente durante a injeção, o que afetará a liberação subsequente do medicamento na bomba.
    2. Em seguida, injete lentamente a solução configurada; A injeção pode ser notada quando a abertura da bomba borbulha levemente.
    3. Injetar mais lentamente quando o volume de injeção se aproximar de 90 μL. Quando a bomba estiver totalmente cheia (cerca de 100 μL), retire a seringa.
    4. Insira cuidadosamente a tampa no corpo da bomba e aperte-a; Neste ponto, uma pequena quantidade de solução será derramada. Limpe-o com cuidado.
  15. Pegue a bomba carregada com o medicamento, com a saída voltada para cima (a extremidade com a tampa), pegue o tubo de centrífuga previamente preparado e mergulhe totalmente a bomba em solução salina estéril (Figura 1F). Em seguida, tampe o tubo da centrífuga e coloque-o no suporte do tubo.
    NOTA: Tome cuidado para evitar contaminar a bomba durante todo o processo.
  16. Depois de feitas todas as minibombas, coloque todos os tubos da centrífuga em um termostato a 37 °C por 48 h.

2. Preparação para operação e anestesia

  1. Prepare e esterilize todos os instrumentos necessários no dia da cirurgia, incluindo fórceps, hemostáticos, tesouras cirúrgicas, porta-agulhas e suturas cirúrgicas absorvíveis 4-0.
  2. Antes de usar a máquina de anestesia com isoflurano (Figura 2B), verifique cuidadosamente se a conexão da tubulação está correta e certifique-se de que a tubulação esteja intacta e não vaze.
  3. Desaparafuse a tampa de vedação de enchimento no evaporador da máquina de anestesia e, em seguida, adicione lentamente o anestésico.
  4. Mantenha o nível anestésico entre os limites superior e inferior rotulados na máquina de anestesia.
  5. Converta o interruptor da válvula de três vias para garantir que o fluxo de ar do evaporador da máquina de anestesia esteja conectado à caixa de indução de anestesia.
  6. Abra a bomba de ar e o evaporador e, em seguida, ajuste a concentração de isoflurano para indução anestésica (geralmente 3%-4%).
  7. Aguarde cerca de 1 min até que o anestésico encha a caixa de indução, depois coloque o mouse na caixa de indução e aguarde até a anestesia completa (esse processo leva cerca de 2-3 min).
  8. Verifique se os ratos estão adequadamente anestesiados inclinando suavemente a caixa. Se os camundongos forem virados e não mostrarem sinais de retornar à posição reclinada, a anestesia é induzida.

3. Implantação da mini-bomba de letrozol

  1. Coloque uma máscara cirúrgica e luvas estéreis.
  2. Retire os camundongos pré-anestesiados da caixa de indução e aplique o creme depilatório na parte de trás dos camundongos, depois aguarde 1 min. Limpe suavemente o creme depilatório e o cabelo com gaze úmida.
  3. Ao mesmo tempo, troque o interruptor da válvula de três vias para garantir que o fluxo de ar do evaporador da máquina de anestesia esteja conectado à máscara de anestesia e ajuste a concentração de manutenção (geralmente 2%).
  4. Após a depilação, segure o mouse com a mão dominante e coloque sua cabeça/nariz na máscara de anestesia.
  5. Verifique a profundidade da anestesia testando o reflexo de retirada do pedal.
    NOTA: Todos os procedimentos que envolvem anestesia devem ser realizados com filtros de gás equipados com pastilhas de carvão ativado, e o procedimento deve ser realizado em capela de exaustão.
  6. Prenda o mouse na posição de bruços na placa de operação e aplique lubrificante ocular em ambos os olhos.
  7. Aplique cotonetes de iodopovidona três vezes na pele exposta (Figura 2C). Em seguida, injete meloxicam por via subcutânea na dose de 2 mg/kg.
  8. Confirme a profundidade do anestésico por meio de uma pitada no dedo do pé novamente. Em seguida, na linha média da nuca, favorecendo a pele do lado sem pelos, pegar a pele com pinça e fazer uma incisão de aproximadamente 0,5 cm lateralmente com bisturi ou tesoura cirúrgica (Figura 2D).
  9. Em seguida, abra a epiderme sob a incisão e acesse-a com um hemostático ou porta-agulha para liberar a pele, abrindo espaço para uma minibomba (cerca de 2 cm de distância da incisão) (Figura 2E).
  10. Retire a bomba da solução salina no tubo da centrífuga com uma pinça estéril, com a extremidade aberta da bomba voltada para baixo, e esteja pronto para inserir a bomba por via subcutânea nos camundongos (Figura 2F).
  11. Prenda um lado da incisão na pele com uma pinça e empurre a bomba para o espaço subcutâneo. Não deve haver resistência ao entrar na bomba. Uma vez dentro, use os dedos para apertar leve e suavemente a bomba para dentro o máximo possível (Figura 1G).
  12. Suturar cuidadosamente o local da incisão com suturas cirúrgicas 4-0 (Figura 2H).
    NOTA: Tome cuidado para não danificar o corpo da bomba subcutânea durante a sutura.
  13. Após a sutura, desinfete a pele no local da cirurgia duas vezes com swabs de iodóforo.

4. Recuperação de animais

  1. Após a cirurgia, transfira suavemente os camundongos do colchão usado durante a anestesia para um colchão seco e limpo. Certifique-se de que os mouses estejam em um ambiente quente e silencioso.
  2. Monitore de perto as condições dos camundongos, como a profundidade e a frequência de suas respirações.
  3. Observe o comportamento dos camundongos à medida que sua mobilidade começa a retornar. Por fim, certifique-se de que eles possam ficar de pé e andar sem comportamentos anormais óbvios, como tonturas ou movimentos descoordenados.
  4. Depois que os ratos se recuperarem, transfira-os suavemente para gaiolas pré-preparadas. Coloque geléia estéril e comida no fundo da gaiola para os ratos se alimentarem.
    NOTA: O alongamento do local da cirurgia pode impedir que os camundongos bebam e comam facilmente durante o período pós-operatório imediato, então coloque geléia e comida no fundo da gaiola.
  5. Injete meloxicam por via subcutânea na dose de 2 mg/kg (a cada 24 h durante os primeiros 3 dias após a cirurgia). Após 8 semanas de tratamento com letrozol (ou seja, dois implantes consecutivos de mini-bomba), teste os modelos de camundongos.

Resultados

O protocolo experimental e algumas etapas críticas são mostrados na Figura 1 e na Figura 2. Os níveis séricos de testosterona são exibidos na Figura 3A. Camundongos tratados com mini-bomba de letrozol (doravante denominados camundongos LTZ) exibiram níveis séricos de testosterona significativamente elevados em comparação com camundongos controle fêmeas. Enquanto isso, a análise histológica dos ovários mostrou que os camundongos LTZ apresentaram ovários policísticos com uma redução significativa no número de corpos lúteos (Figura 3B, C), indicando anovulação. Além disso, os camundongos LTZ exibiram aciclicidade estral significativa em comparação com os camundongos controle fêmeas (Figura 3D). A avaliação do peso corporal revelou que os camundongos LTZ eram mais pesados que os camundongos controle (Figura 3E). Os resultados dos testes de tolerância à glicose e os cálculos da AUC demonstraram que os camundongos LTZ desenvolveram intolerância à glicose em comparação com os camundongos controle (Figura 3F, G). O ensaio lipídico sérico indicou que os camundongos LTZ exibiram uma alteração no perfil lipídico sérico em comparação com os camundongos controle (Figura 3H).

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Figura 1: Materiais e etapas críticas para a preparação da minibomba. (A) Ilustração esquemática mostrando a preparação de mini-bombas de letrozol. (B) A minibomba foi desbloqueada por um tubo fino preso à tampa. (C) Uma agulha correspondente à bomba foi conectada à extremidade da agulha de uma seringa de 1 mL. (D) A solução de letrozol foi aspirada lentamente sem borbulhar. (E) A solução de letrozol foi injetada lentamente a partir do fundo da bomba. (F) As bombas cheias foram tampadas e armazenadas em solução salina com a extremidade da tampa voltada para cima. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 2: Materiais e etapas críticas de implantação das bombas nos camundongos para indução da SOP. (A) Ilustração esquemática mostrando a implantação de minibombas de letrozol. (B) Equipamento de anestesia: bomba de ar, máquina de anestesia, caixa de indução e filtros de gás. (C) Os camundongos anestesiados foram fixados e esterilizados. (D) Um corte de 0,5 cm perto da linha média dorsal. (E) A pele foi liberada para dar espaço para a inserção da minibomba. (F) Uma mini-bomba foi retirada da solução salina com pinça limpa e estéril. (G) A minibomba foi implantada sob a pele previamente liberada. (H) A pele foi fechada com pontos 4-0. (I) O camundongo implantado foi autorizado a se recuperar. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 3: Caracterização dos fenótipos reprodutivos e metabólicos nos modelos de camundongos implantados com mini-bomba de letrozol. (A) Os níveis plasmáticos de testosterona nos camundongos tratados com LTZ foram significativamente maiores do que nos camundongos controle (n = 9 animais por grupo). (B) Análise histológica dos ovários. A seta indica corpos lúteos. Barra de escala: 1 mm. (C) Número de corpos lúteos nos grupos indicados (n = 9 animais por grupo). (D) Os camundongos LTZ mostraram aciclicidade em comparação com os camundongos fêmeas controle. (E) O peso corporal nos grupos indicados (n = 10 animais por grupo). (F, G) Resultados do teste de tolerância à glicose nos grupos indicados (n = 8 animais por grupo). (H) Níveis séricos de lipídios nos grupos indicados (n = 8 animais por grupo). Os dados são expressos como média ± SEM. A AUC indica a área sob a curva; E, estágio estral; LDL-C, colesterol de lipoproteína de baixa densidade; HDL-C, colesterol de lipoproteína de alta densidade; P, estágio de proestro; M/D, estágio de metaestro/diestro; CT, colesterol total; e TG, triglicerídeos. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Discussão

Este relatório demonstra um protocolo simples para induzir SOP em camundongos usando materiais de fácil acesso. O modelo de SOP em camundongos é essencial para explorar os mecanismos da SOP e rastrear drogas26. Dos métodos disponíveis para induzir modelos de SOP em camundongos, a indução de letrozol é um dos mais comumente usados. O uso de letrozol pode desenvolver e manter um quadro hiperandrogênico inibindo a conversão de testosterona em estradiol ou aumentando a síntese de testosterona27. O modelo de camundongo induzido por letrozol mostra semelhanças metabólicas e reprodutivas com pacientes com SOP28. No entanto, as técnicas convencionais de tratamento com letrozol no modelo de SOP em camundongos requerem alimentação oral diária ou injeção de letrozol em camundongos por 21 dias ou mais29,30. A alocação contínua de medicamentos a longo prazo com dosagem cronometrada de alimentação ou injeção é demorada e trabalhosa, e a administração repetida de medicamentos pode ser notoriamente estressante para camundongos, introduzindo fatores não experimentais que afetam os resultados do modelo23,31. Embora alguns estudos de SOP em ratos e camundongos usem pastilhas de letrozol implantáveis28,32, os produtos usados precisam ser personalizados e podem não estar disponíveis em tempo hábil. O presente estudo propõe uma técnica de implantação de minibombas de letrozol para induzir SOP em camundongos. O método é simples, economiza tempo e usa ferramentas e equipamentos cirúrgicos prontamente disponíveis na maioria dos laboratórios.

Etapas críticas e solução de problemas
É essencial observar algumas etapas importantes para obter os melhores resultados ao praticar esse método. Em primeiro lugar, desentupa a bomba usando o tubo fino preso à tampa correspondente antes de usar. A experiência anterior indica que uma bomba entupida pode interromper o carregamento e a liberação de medicamentos. Além disso, cada etapa na configuração da solução de letrozol deve ser executada com cuidado para garantir que a solução final esteja precisamente na concentração desejada. Durante todo o processo de montagem da bomba, deve-se prestar atenção para evitar contaminação. Além disso, ajustes cuidadosos são necessários antes e durante a anestesia para garantir anestesia adequada para os camundongos experimentais e minimizar os efeitos adversos da anestesia nos camundongos operados.

Vantagens e limitações
O método descrito neste estudo oferece várias vantagens: (1) economiza tempo e permite a liberação contínua de letrozol após o implante da bomba; (2) evita o estresse da administração repetida de medicamentos em animais experimentais e minimiza a influência de fatores não experimentais nos resultados da modelagem; (3) os materiais, ferramentas cirúrgicas e equipamentos necessários estão comumente disponíveis na maioria dos laboratórios; (4) o método induz efetivamente fenótipos de SOP em camundongos. No entanto, este método também apresenta limitações: (1) a anestesia e o procedimento cirúrgico necessários para o implante da minibomba podem causar irritação nos camundongos, e a presença da minibomba sob a pele pode atrapalhar sua atividade; (2) a eficácia deste método de modelagem pode ser afetada por contaminação ou danos ao corpo da bomba durante o processo. Com base na experiência dos autores, a execução meticulosa das etapas do protocolo pode levar a uma alta taxa de sucesso na indução do modelo de camundongo SOP.

Divulgações

Os autores não têm nada a divulgar.

Agradecimentos

O estudo foi apoiado pelo Programa Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento da China (subsídios 2021YFC2700701), a Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (subsídios 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), Fundo de Inovação da Academia Chinesa de Ciências Médicas para Ciências Médicas (subsídio 2019-I2M-5-064), a Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Xangai (subsídios 21Y11907600), Comissão Municipal de Saúde e Planejamento Familiar de Xangai (subsídio 20215Y0216), Programa de Inovação Colaborativa da Comissão Municipal de Saúde de Xangai (concessão 2020CXJQ01), Plano de Pesquisa Clínica do Centro de Desenvolvimento Hospitalar de Xangai (concessão SHDC2020CR1008A), Centro de Pesquisa Clínica de Xangai para Doenças Ginecológicas (concessão 22MC1940200), Centro de Pesquisa de Doenças do Sistema Urogenital de Xangai (concessão 2022ZZ01012), Base de Pesquisa Científica de Reprodução e Desenvolvimento das Fronteiras de Xangai, Comissão de Ciência e Tecnologia do Município de Quzhou (concessão 2022K54), Projeto de Fundo Aberto do Laboratório Chave de Genética Reprodutiva, Ministério da Educação, Universidade de Zhejiang (concessão KY2022035) e Projeto de Fundo Aberto da Academia de Ciências Médicas de Guangdong (concessão YKY-KF202202).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
SeringaBofeng BiotechBD3008411ML (estéril)
Tubo de centrifugaçãoBiological Hope1850-K15ML (estéril)
PipetaEppendorf3123000268-A100μ L-1000μ L (estéril)
PipetaTopPette701010100810μ L-100μ L (estéril)
Letrozole em póSigmaL6545-50MGDrogas de ação primária (estéril)
PEG (Poli (etilenoglicol))SolarbioP8250Usado para dissolução (estéril)
Solução salina fisiológica estérilBiosharpBL158Ade armazenamento de mini-bomba
ALZET1004Armazenamento de letrozol e liberação sustentada (estéril)
Dimetilsulfóxido BiosharpBS087Usado para dissolução (estéril)
Máquina de anestesia para pequenos animaisRWD R500IPUsado para anestesia
Isoflurano RWD20071302Usado para anestesia
HemostáticosBiosharpBS-HF-S-125Tesoura de instrumento cirúrgico
BiosharpBS-SOR-S-100PInstrumento cirúrgico
Porta-agulhasShangHaiJZJ32010Instrumento cirúrgico
FórcepsRWD F12028Instrumento cirúrgico
Agulha e sutura absorvível 4-0JINGHUANCR413Instrumento cirúrgico
Cotonetes de iodopovidonaSingleLadyGB26368-2010Desinfecção da pele
Creme depilatórioZIKER BIOTECHNOLOGYZK-L2701 Agente de depilação para animais de laboratório
Luvas de nitriloBiosharpBC040-LUsado para operação asséptica
Gaze estérilZHENDEBA69087Usado para limpar líquidos
C57BL / 6J RatosShanghai Model Organisms CenterN / AIdade: 4 semanas
Lubrificante para olhos de animais de estimaçãoBAITESHF021153Usado para lubrificante de olho de rato
Injeção de meloxicamMEIDAJIAR21064-21Usado para analgesia de camundongo (estéril)
Bombas osmóticas

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