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Artigo de método

Um modelo de estresse social integrado múltiplo para transtornos psiquiátricos em camundongos C57BL / 6J fêmeas

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DOI:

10.3791/67117

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15 de julho de 2025

 ,  ,  ,  , 
1Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesiology, Xuzhou Medical University, 2Jiangsu Province Key Laboratory of Anesthesia and Analgesia Application Technology, Xuzhou Medical University, 3NMPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Narcotic and Psychotropic Drugs, Xuzhou Medical University

Neste artigo

Resumo

Ao integrar quatro estressores sociais diários, o presente estudo descreve um modelo de estresse social integrado múltiplo (MISS) para transtornos psiquiátricos em camundongos C57BL / 6J fêmeas. Após dez dias de exposição repetida ao MISS, os camundongos desenvolveram fenótipos depressivos e ansiosos, fornecendo assim um modelo animal natural baseado em etiologia para estudar transtornos psiquiátricos em mulheres.

Resumo

Apesar de as fêmeas representarem a maioria dos indivíduos que sofrem de transtornos psiquiátricos, os estudos pré-clínicos se concentraram quase exclusivamente em indivíduos do sexo masculino, em parte devido à falta de paradigmas ideais para as fêmeas animais. O desenvolvimento de modelos eficazes para estudar transtornos psiquiátricos em fêmeas continua sendo um desafio científico de longa data nas ciências da vida. Um "modelo de Estresse Social Integrado Múltiplo (MISS)" em camundongos fêmeas C57BL / 6J foi recentemente estabelecido simulando e integrando fatores de risco social que contribuem para o desenvolvimento de transtornos psiquiátricos. Para estabelecer esse paradigma MISS, camundongos C57BL / 6J fêmeas foram submetidos aleatoriamente a cada dia, por dez dias consecutivos, a uma sequência de estressores: falha na competição social no teste do tubo, estresse de derrota social vicária modificado, estresse de superlotação inevitável e subsequente isolamento social. Em comparação com camundongos ingênuos, os camundongos expostos ao MISS exibiram fenótipos depressivos e ansiosos, medidos pela preferência por sacarose, suspensão da cauda, campo aberto e testes elevados de labirinto em cruz. Esse paradigma oferece uma ferramenta valiosa para investigar os mecanismos neurobiológicos subjacentes à depressão e ansiedade em mulheres, particularmente aquelas com etiologia ambígua e sintomatologia complexa.

Introdução

Centenas de milhões de pessoas vivem com transtornos psiquiátricos, sendo os transtornos de ansiedade e depressão os mais comuns. De acordo com a Organização Mundial da Saúde, mais de 280 milhões e 301 milhões de pessoas em todo o mundo viviam com depressão e ansiedade, respectivamente, em 20191. Devido à pandemia de COVID-19, o número de pessoas afetadas por transtornos de ansiedade e depressão aumentou significativamente - 26% e 28%, respectivamente - em apenas um ano. Entre os afetados, a prevalência de transtornos psiquiátricos ao longo da vida em mulheres é quase duas vezes maior do que em homens2, com mulheres apresentando sintomas mais graves, maior comprometimento funcional, fenótipos depressivos atípicos, recaídas mais frequentes e menor capacidade de resposta aos medicamentos 3,4,5.

Embora as diferenças entre os sexos em muitos aspectos dos transtornos psiquiátricos estejam bem documentadas 6,7,8, a maioria das pesquisas pré-clínicas tem se concentrado predominantemente em indivíduos do sexo masculino, principalmente devido à falta de modelos animais femininos apropriados 9,10. Como resultado, a patogênese desses distúrbios em mulheres permanece pouco compreendida. Isso enfatiza a necessidade urgente de desenvolver modelos animais que incluam indivíduos do sexo feminino, o que facilitaria a investigação dos mecanismos neurobiológicos subjacentes aos transtornos psiquiátricos nas mulheres.

Um número crescente de modelos de estresse social para camundongos fêmeas foi desenvolvido com base no paradigma de estresse de derrota social repetida (RSDS) 11,12,13,14. Por exemplo, dois modelos RSDS recentemente estabelecidos em camundongos fêmeas envolveram o aumento artificial da agressão masculina por meio da aplicação de urina masculina em camundongos fêmeas e ativação quimiogenética da subdivisão ventrolateral do hipotálamo ventromedial em agressores machos11 , 12 , 13 . No entanto, tem sido argumentado que esses comportamentos agressivos induzidos não ocorrem naturalmente e podem não representar estressores relevantes para camundongos fêmeas10. Além disso, a gravidez resultante do comportamento crescente complica os estudos mecanicistas subsequentes.

Outro modelo modificado baseado em RSDS é o paradigma de estresse de derrota social vicária, no qual camundongos fêmeas testemunham visualmente a derrota social entre machos12. Protocolos de derrota social fêmea-fêmea também foram desenvolvidos em várias linhagens de roedores 14,15,16. Apesar de algumas preocupações, os estressores sociais usados nesses dois últimos modelos parecem ser mais etiologicamente relevantes para os transtornos psiquiátricos humanos14. Um modelo de depressão ideal requer validade de construto (etiológica), o que significa que os métodos de indução de estresse usados no modelo devem refletir de perto as causas reais do transtorno.

Acredita-se que a etiologia dos transtornos psiquiátricos seja multifatorial, envolvendo fatores biológicos, genéticos, ambientais e psicossociais. A manipulação desses fatores de risco em animais de laboratório é essencial para o desenvolvimento de modelos relevantes para pesquisa mecanicista e triagem de drogas. Modelos animais sociais e não sociais que simulam um ou mais estressores podem replicar sintomas centrais e alterações neurobiológicas associadas a transtornos psiquiátricos humanos. Por exemplo, o modelo de estresse leve crônico (CMS) induz fenótipos comportamentais neuropatológicos e depressivos estáveis e eficazes alternando aleatoriamente combinações de vários estressores físicos (por exemplo, cama molhada, suspensão da cauda, pinçamento da cauda, jejum) 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23. Esses achados sugerem que a modelagem repetida de múltiplos fatores de risco é uma estratégia viável para a construção de paradigmas para estudar transtornos psiquiátricos. O modelo de estresse de derrota social crônica (CSDS) é um dos paradigmas mais utilizados para a depressão que simula estressores sociais 24,25,26. Embora esse modelo se limite a mimetizar um único tipo de estressor, sua relevância etiológica levou a um progresso significativo na pesquisa translacional. Por exemplo, estudos baseados em CSDS identificaram canais de potássio (K +) em neurônios dopaminérgicos na área tegmental ventral como alvos-chave que mediam a resiliência à depressão e destacaram os abridores de canais K + do tipo KCNQ - como a retigabina (ezogabina) - como candidatos promissores a antidepressivos em camundongos depressivos e pacientes com depressão27 , 28 , 29 , 30 , 31. Como resultado, vários estudos seminais tentaram modificar o paradigma da CSDS para modelar a depressão feminina, induzindo a agressão dirigida por mulheres11,12. A evidência acima apóia a noção de que a integração de múltiplos estressores sociais com exposição repetida representa uma direção importante para o desenvolvimento de modelos psiquiátricos em animais fêmeas.

Em camundongos C57BL / 6J fêmeas, um paradigma de estresse social integrado múltiplo (MISS) de 10 dias foi recentemente desenvolvido para modelar transtornos psiquiátricos, demonstrando validades etiológicas, faciais, de construção e preditivas confiáveis32. Para estabelecer o modelo MISS, camundongos C57BL / 6J fêmeas foram submetidos aleatoriamente a cada dia por 10 dias consecutivos a quatro estressores sequenciais: falha na competição social (teste de tubo), estresse de derrota social vicária modificado, estresse de superlotação inevitável e subsequente isolamento social32. Este estudo fornece um protocolo detalhado para modelar o paradigma MISS.

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Protocolo

Todos os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais da Universidade Médica de Xuzhou (Aprovação nº 202207S127) e foram conduzidos de acordo com as diretrizes do National Institutes of Health para o cuidado e uso de animais de laboratório. Camundongos fêmeas C57BL / 6J (7-8 semanas de idade para camundongos sujeitos; 10-14 semanas de idade para candidatos vencedores), camundongos machos C57BL / 6J (7-8 semanas de idade para triagem agressiva de CD1) e camundongos reprodutores aposentados CD1 usados nesses experimentos foram obtidos de uma fonte comercial. Todos os camundongos foram alojados em um ciclo claro/escuro de 12 horas com comida e água fornecidas ad libitum33. Medições comportamentais de linha de base foram feitas - embora não necessariamente para todas as coortes - antes do início do paradigma MISS, para garantir que os resultados comportamentais subsequentes fossem atribuíveis à exposição ao estresse e não à variabilidade individual. Uma visão geral do protocolo completo é apresentada na Figura 1, e as configurações experimentais concluídas são mostradas na Figura 2. Detalhes dos reagentes e equipamentos usados neste estudo são fornecidos na Tabela de Materiais.

1. Habituação

  1. Habituação ao meio ambiente
    1. Designe uma sala separada exclusivamente para o protocolo MISS, mantendo uma temperatura constante (23 °C ± 2 °C), umidade (50%-60%) e intensidade de luz (15-20 lux) em um ciclo claro-escuro de 12 h.
      NOTA: A menos que especificado de outra forma, alojar ratos nesta sala durante todo o período de modelagem.
    2. Prepare gaiolas de rato padrão (L × W × H: 37 cm × 16 cm × 12 cm) com tampas de arame de aço e cama de espiga de milho.
    3. Use camundongos fêmeas C57BL / 6J com idade entre 7 e 8 semanas como camundongos sujeitos. Atribua aleatoriamente os camundongos a grupos ingênuos e MISS e os aloje em cinco camundongos por gaiola.
      NOTA: Selecione camundongos fêmeas com idade e peso corporal comparáveis para o experimento.
    4. Use camundongos fêmeas C57BL / 6J com idade entre 10 e 14 semanas como candidatos para triagem de vencedores30. Alojar esses ratos em grupos de quatro por gaiola para estabelecer classificações sociais estáveis.
    5. Use camundongos reprodutores CD1 aposentados machos como candidatos agressores. Camundongos CD1 domésticos individualmente para estabelecer territorialidade e evitar brigas. Use camundongos machos C57BL/6J criados em coorte (5 camundongos por gaiola, com idades entre 7 e 8 semanas) como intrusos para triagem agressiva de CD1.
    6. Permita que todos os ratos se habituem e se recuperem do estresse de transporte por 7 dias após a compra (Figura 1A1).
    7. Abrigue todos os ratos com comida e água disponíveis ad libitum.
  2. Habituação a tubos e manuseio
    1. Coloque um tubo de acrílico curto (Figura 2A; 10 cm de comprimento, 26 mm de diâmetro interno) em cada gaiola de camundongos fêmeas e candidatos vencedores. Deixe os ratos se aclimatarem aos tubos e aprender a passar por eles por 3 dias.
      NOTA: O diâmetro do tubo deve ser suficiente para permitir que um camundongo adulto passe suavemente sem se virar.
    2. Manuseie camundongos fêmeas e candidatos vencedores por 1-2 min/dia por 3 dias para reduzir o estresse relacionado a experimentadores desconhecidos (Figura 1A2).
    3. No final do período de habituação, marque a cauda de cada camundongo com um marcador vermelho ou preto à base de óleo.
      NOTA: Verifique as marcações regularmente e reaplique se necessário.

2. Treinamento para competição de tubos, triagem de vencedores e triagem de agressores CD1

  1. Treinamento para competição de tubos
    NOTA: Para obter detalhes sobre este procedimento, consulte os relatórios anteriores32,34.
    1. Prepare camundongos fêmeas, candidatas a vencedoras, tubos de acrílico transparente (Figura 2B; 30 cm de comprimento, 26 mm de diâmetro interno), palitos de plástico, etanol 75% e toalhas de papel. Limpe a mesa, os tubos e os palitos de plástico com etanol a 75% para eliminar os sinais de odor.
    2. Segure suavemente a cauda de cada rato feminino ou candidato a vencedor e coloque o mouse sobre a mesa. Deixe-o explorar livremente por aproximadamente 1 min para aclimatação ambiental.
    3. Segure o mouse pela cauda e coloque-o em uma extremidade do tubo.
      NOTA: Certifique-se de que a cabeça do mouse esteja voltada para a extremidade do tubo, com as patas dianteiras tocando a mesa, para minimizar o estresse e facilitar a entrada.
    4. Solte a cauda assim que o mouse entrar no tubo e deixe-o passar voluntariamente.
      NOTA: Use um bastão de plástico para tocar suavemente a cauda se o mouse parar ou tentar dar ré.
    5. Coloque o mouse na extremidade oposta do tubo e repita a etapa 2.1.4. Conte as etapas 2.1.3 - 2.1.5 como um ciclo.
    6. Repita as etapas 2.1.3 e 2.1.5 por dois ciclos (figura 1B1).
    7. Retorne o mouse para sua gaiola inicial. Limpe o tubo com etanol 75% para remover odores, urina e fezes.
      NOTA: Certifique-se de que o tubo esteja limpo, seco e livre de odor residual de álcool antes de usar com o próximo mouse.
    8. Repita as etapas 2.1.2-2.1.7 para todos os camundongos fêmeas por 3 dias consecutivos, garantindo que cada camundongo se acostume a passar pelo tubo.
  2. Exibição do vencedor
    NOTA: Para obter detalhes sobre este procedimento, consulte os relatórios anteriores32,34.
    1. Prepare as candidatas vencedoras, tubos (30 cm de comprimento, 26 mm de diâmetro interno), bastões de plástico, etanol 75%, toalhas de papel e um cronômetro. Limpe e seque o equipamento para minimizar os sinais de odor.
    2. Antes da triagem, treine novamente cada mouse para passar pelo tubo por um ciclo. Desenhe uma linha intermediária visível no tubo.
    3. Segure os dois ratos pela cauda e coloque-os em extremidades opostas do tubo. Permita que eles entrem e se encontrem no ponto médio e, em seguida, solte-os simultaneamente e inicie o cronômetro.
      NOTA: Use ratos da mesma gaiola para cada competição.
    4. Identifique o "vencedor" como o mouse que empurra o outro para fora do tubo; atribua 1 ponto. O "perdedor" recebe 0 pontos.
      NOTA: Use um bastão de plástico para evitar que o vencedor recue. Se ambos os ratos congelarem e não recuarem em 1 minuto, toque suavemente a cauda de cada rato com palitos de plástico para solicitar a ação.
    5. Inverta as posições iniciais dos camundongos e repita as etapas 2.2.3-2.2.4, marcando o resultado novamente (Figura 1B2).
    6. Retorne os dois ratos para sua gaiola doméstica e limpe bem o tubo com etanol 75%.
    7. Use um formato round-robin para combinar cada mouse com todos os outros companheiros de gaiola, repetindo as etapas 2.2.3-2.2.5 para cada par.
      NOTA: Essa abordagem garante uma classificação abrangente e justa.
    8. Classifique os ratos com base nas pontuações totais. Selecione o mouse com maior pontuação em cada gaiola como o "vencedor" para experimentos subsequentes.
  3. Rastreio do agressor de CD1
    NOTA: Para obter detalhes sobre este procedimento, consulte o relatório anterior35.
    1. Prepare camundongos reprodutores aposentados CD1, camundongos machos C57BL / 6J (intrusos) e um cronômetro.
    2. Coloque um camundongo macho C57BL/6J diretamente na gaiola doméstica de um macho CD1 (agressor residente) por 3 min.
      NOTA: O intruso não pode escapar durante a sessão.
    3. Registre a latência do primeiro ataque, o número de ataques e a duração dos comportamentos agressivos no período de 3 minutos como indicadores de agressividade.
    4. Repita as etapas 2.3.2-2.3.3 uma vez ao dia por 3 dias consecutivos usando diferentes ratos intrusos a cada dia (Figura 1B3).
    5. Selecione camundongos CD1 como agressores para experimentos adicionais com base em dois critérios: (1) eles devem ter atacado em pelo menos duas das três sessões e (2) sua latência de ataque deve ser inferior a 1 min em cada sessão.

3. Modelagem

NOTA: Esta etapa envolve exposição aleatória à falha da competição social no teste do tubo, estresse de derrota social vicária modificado e estresse de superlotação inevitável, seguido de isolamento social, por 10 dias consecutivos.

  1. Fracasso da competição social
    NOTA: Para obter detalhes, consulte os relatórios anteriores32,34.
    1. Prepare camundongos fêmeas, camundongos "vencedores" rastreados, tubos (30 cm de comprimento, 26 mm de diâmetro interno), palitos de plástico, etanol 75%, toalhas de papel e um cronômetro.
    2. Realoje camundongos fêmeas individualmente (1 camundongo por gaiola) e aloje camundongos virgens em grupos (5 camundongos por gaiola).
      NOTA: Mova os mouses ingênuos para novas gaiolas de grupo no início da modelagem. A mudança para uma nova gaiola não é necessária durante o período de modelagem.
    3. Limpe a mesa, os tubos e os palitos de plástico com etanol a 75% para eliminar os sinais de odor.
    4. Remova cuidadosamente os ratos de suas gaiolas domésticas. Coloque um mouse MISS e um mouse "vencedor" nas extremidades opostas do tubo para que eles caminhem para frente e se encontrem no ponto médio. O mouse MISS será empurrado para fora do tubo pelo "vencedor".
      NOTA: O tamanho maior, o peso corporal mais alto e a posição social dominante do "vencedor" garantem que o camundongo MISS experimental quase sempre perca a competição do tubo. Se os ratos permanecerem imóveis por mais de 30 s, toque suavemente a cauda do vencedor com um bastão de plástico para incentivar o empurrão.
    5. Troque as posições dos dois mouses e repita a etapa 3.1.4. Conte as etapas 3.1.4 e 3.1.5 como um ciclo.
    6. Devolva os camundongos MISS e "vencedores" para suas gaiolas domésticas. Limpe a mesa, o tubo e o bastão de plástico para remover odores.
    7. Apresente um novo mouse vencedor e repita as etapas 3.1.4-3.1.5 com o mesmo mouse MISS. Cada camundongo MISS passa por dois ciclos consecutivos de competição de tubo fracassada (Figura 1C1, Figura 2E).
    8. Repita as etapas 3.1.4-3.1.7 para todos os mouses MISS por 10 dias consecutivos.
  2. Estresse de derrota social vicária modificado
    1. Prepare camundongos reprodutores CD1 agressivos selecionados (alojados individualmente), camundongos C57BL / 6J machos, camundongos MISS fêmeas e tampas de acrílico perfuradas (Figura 2C; L × W × H: 8 cm × 8 cm × 5,5 cm) com furos (5 × 5 no painel superior, 3 × 5 nas paredes laterais; cada furo com 0,5 cm de diâmetro).
    2. Coloque um camundongo MISS fêmea dentro da gaiola de um agressor CD1, confinado sob uma capa de acrílico perfurada, para permitir a observação indireta de interações agressivas.
      NOTA: Monitore a possível inclinação da tampa de acrílico pelo mouse CD1 ou MISS. Reduzir a cama de espiga de milho nas gaiolas CD1 ajuda a evitar o tombamento.
    3. Introduza um camundongo intruso C57BL/6J macho na gaiola para ser atacado fisicamente pelo camundongo CD1 por 10 min. A fêmea do camundongo MISS observa a interação através da tampa perfurada (Figura 1C2, Figura 2F).
      NOTA: Se o rato intruso estiver gravemente ferido, encerre imediatamente a sessão e trate o animal. O uso de pequenos pellets de espiga de milho aumenta a experiência imersiva do camundongo MISS, amplificando o deslocamento da cama durante as lutas.
    4. Após 10 minutos, remova o intruso macho e permita à fêmea do camundongo MISS mais 5 minutos de exposição sensorial ao camundongo CD1.
    5. Repita as etapas 3.2.3-3.2.4 mais duas vezes com diferentes intrusos do sexo masculino.
    6. Retorne o mouse MISS para sua gaiola inicial. Monitore e trate quaisquer ferimentos nos intrusos do sexo masculino.
    7. Limpe as tampas de acrílico perfuradas e varra qualquer roupa de cama derramada.
    8. Repita as etapas 3.2.2-3.2.5 usando um novo criador aposentado de CD1 por 10 dias consecutivos.
  3. Estresse de superlotação inevitável
    1. Prepare camundongos MISS fêmeas, uma manga branca opaca (Figura 2D; L × W × H: 14 cm × 10 cm × 20 cm), gaiolas de camundongo padrão com cama de espiga de milho, etanol 75%, toalhas de papel e um cronômetro.
    2. Coloque a manga opaca dentro de uma gaiola padrão com roupa de cama.
    3. Introduza 12-15 camundongos fêmeas (todos camundongos MISS ou misturados com outras fêmeas) na manga por 30 minutos diários (Figura 1C3, Figura 2G).
      NOTA: Ajuste o número de ratos de acordo com seu tamanho para garantir a aglomeração sem pisoteio. Evite a fuga cobrindo a manga com uma tampa perfurada transparente, se necessário.
    4. Devolva os ratos às gaiolas de casa e limpe a manga com etanol a 75%.
    5. Repita a etapa 3.3.3 por 10 dias consecutivos.
  4. Isolamento social
    1. Prepare camundongos MISS fêmeas e gaiolas de camundongos padrão com cama de espiga de milho.
    2. Camundongos MISS domésticos individualmente quando não estão passando por falha na competição social, estresse de derrota vicária ou estresse de superlotação, pelo restante do período de modelagem de 10 dias (Figura 1C4, Figura 2H).
      NOTA: Camundongos ingênuos são gentilmente transferidos pela cauda para uma gaiola temporária e, em seguida, devolvidos à gaiola de origem sem qualquer exposição ao estresse. Forneça comida e água ad libitum, como acontece com os camundongos MISS.

4. Testes comportamentais

NOTA: Experimentos comportamentais são conduzidos dentro de uma semana após a modelagem para avaliar comportamentos depressivos e ansiosos em camundongos. Antes de cada teste, camundongos fêmeas são movidos para a sala de testes comportamentais (iluminação de 15-20 lux) por 1 h de habituação. Após cada teste, os camundongos são devolvidos às suas instalações originais.

  1. Teste de preferência de sacarose
    NOTA: Para obter detalhes, consulte os relatórios anteriores 36,37,38.
    1. Prepare camundongos fêmeas, bebedouros (50 mL) com tubos esferográficas, gaiolas de camundongo padrão com tampas de arame de aço, sacarose, balança eletrônica, cilindro graduado, haste de agitação, papel de pesagem, água, caderno e caneta.
    2. Alojar todos os camundongos fêmeas (camundongos ingênuos e MISS) individualmente.
    3. Encha as garrafas com água potável (~2/3 do volume).
      NOTA: Certifique-se de que não haja vazamento das garrafas antes de iniciar o experimento.
    4. Forneça a cada rato duas garrafas cheias de água colocadas lado a lado por 2 dias de habituação.
    5. Prepare 1% de água com sacarose (1 g de sacarose por 99 mL de água).
    6. No início do teste, substitua a água em uma garrafa por solução de sacarose a 1%. Registre os pesos iniciais de ambas as garrafas.
    7. Após 12 h, registre os pesos das garrafas novamente e mude as posições das garrafas para evitar viés posicional.
    8. Após 24 h, registar os pesos finais e calcular a preferência por sacarose como:Preferência por sacarose (%) = (Ingestão de sacarose / Ingestão total de líquidos) × 100
    9. No final do teste, devolva os ratos às gaiolas de suas casas com garrafas de água comuns.
    10. Limpe bem todas as garrafas e tubos esferográficos com água.
  2. Ensaio da suspensão da cauda
    NOTA: Este teste32 pode ser realizado na mesma coorte ou em uma coorte separada de camundongos, dependendo do projeto experimental. Neste estudo, foi realizado 3 dias após o teste de preferência por sacarose.
    1. Prepare camundongos fêmeas, uma caixa de teste de suspensão de cauda (55 cm de altura × 60 cm de largura × 12 cm de profundidade), fita adesiva, cronômetro, álcool 75% e toalhas de papel.
    2. Configure o sistema de rastreamento de vídeo39. Defina uma zona ativa e inicie a gravação.
    3. Limpe a caixa de teste com etanol a 75%.
    4. Prenda suavemente o mouse a ~2 cm da ponta da cauda e suspenda-o de cabeça para baixo, garantindo que sua cabeça esteja a ~25 cm da parte inferior da caixa.
      NOTA: Minimize o balanço e evite estresse desnecessário.
    5. Registre o comportamento usando o software de rastreamento35 6 min. Use o tempo de imobilidade dos últimos 4 minutos para análise.
      NOTA: A imobilidade é definida como a ausência de movimento com o corpo pendurado passivamente. Exclua dados se o mouse cair ou subir.
    6. Retire cuidadosamente a fita e retorne o mouse à sua gaiola inicial.
  3. Ensaio em campo aberto
    NOTA: Para obter detalhes, consulte os relatórios anteriores40,41.
    1. Prepare camundongos fêmeas, uma caixa de teste de campo aberto (40 cm × 40 cm × 40 cm), etanol a 75% e toalhas de papel.
    2. Configure o sistema de rastreamento de vídeo. Divida virtualmente a arena em 4 × 4 subáreas; Defina as 4 unidades centrais como a zona central e o restante como a zona periférica.
    3. Limpe a caixa de teste com etanol a 75%.
    4. Coloque o mouse em questão suavemente no centro da caixa, com a cabeça voltada para a mesma direção. Deixe explorar por 5 min.
      NOTA: Use um palete para transferência para reduzir o estresse de manuseio.
    5. Registre a distância total percorrida e o tempo gasto na zona central usando o sistema de rastreamento de vídeo.
    6. No final do teste, retorne o mouse à sua gaiola inicial e limpe o aparelho.
  4. Teste de labirinto em cruz elevado
    NOTA: Para obter detalhes, consulte o relatório anterior32.
    1. Prepare camundongos fêmeas, um labirinto em cruz elevado, etanol a 75% e toalhas de papel.
      NOTA: O labirinto consiste em duas pistas perpendiculares (50 cm acima do chão), cada uma com dois braços (30 cm de comprimento × 5 cm de largura). Um conjunto tem paredes de 15 cm de altura (braços fechados), enquanto o outro conjunto é aberto. A área central é de 5 cm × 5 cm.
    2. Configure o sistema de rastreamento de vídeo e defina os braços abertos, braços fechados e área central.
    3. Limpe o labirinto com etanol 75%.
    4. Coloque suavemente o mouse no centro do labirinto, de frente para um braço aberto. Permita a exploração livre por 5 min.
      NOTA: Use um palete para minimizar o estresse durante a colocação.
    5. Registre o tempo gasto em cada braço usando o sistema de rastreamento.
      NOTA: Se um mouse cair do labirinto, exclua seus dados.
    6. Retorne o mouse para sua gaiola inicial e limpe bem o labirinto.

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Resultados

Para investigar se a exposição ao MISS induz mudanças comportamentais do tipo depressivo, camundongos C57BL / 6J fêmeas (n = 16 por grupo; tamanho da amostra determinado por meio de análise de poder, consulte o Arquivo Suplementar 1 e o Arquivo Suplementar 2) submetidos ao paradigma MISS foram avaliados usando os testes de preferência por sacarose e suspensão da cauda, que avaliam os principais sintomas de depressão-anedonia e desespero comportamental, respectivamente (

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Discussão

Um número crescente de estudos tem se concentrado no desenvolvimento de modelos específicos para mulheres para transtornos psiquiátricos usando paradigmas de estresse de derrota social crônica (CSDS) 11,13,14. Por exemplo, em dois modelos de CSDS fêmeas recentemente estabelecidos, a agressão masculina contra camundongos fêmeas foi induzida artificialmente por revestimento de camundongos fêmeas c...

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Divulgações

Os autores declaram não haver interesses conflitantes.

Agradecimentos

O presente estudo foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (31970937 e 82271255), Programa de Equipe Inovadora e Empreendedora da Província de Jiangsu, Projeto de Desenvolvimento Social do Programa de P&D da Província de Jiangsu (BE2023690) e Programa de Inovação em Pesquisa e Prática de Pós-Graduação da Província de Jiangsu (KYCX22_2932, KYCX23_2952).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Álcool 75%AladdinA171299-500 mLUsado para esterilizar e limpar equipamentos e instrumentos de laboratório
Garrafa com bico rollerballGarrafadeágua potável personalizada (50 ml) com tampa de borracha com bico de bola para o teste de preferência de sacarose
C57BL/6J camundongos fêmeas  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd219C57BL/6J camundongos fêmeas com idades entre 7 e 8 semanas são usados como camundongos sujeitos, e camundongos com idades entre 10 e 14 semanas são usados como candidatos a vencedores
C57BL/6J camundongos machos Camundongos fêmeas C57BL / 6J com idade entre 7 e 8 semanas são usados como camundongos sujeitos, e camundongos com idade entre 10 e 14 semanas são usados como candidatos vencedores219camundongos machos C57BL / 6J com idade entre 8 e 16 semanas como intrusos para triagem agressiva de CD1.
Labirinto em mais elevadoFeito sobmedida-Olabirinto em mais elevado consiste em perpendiculares, cruzando pistas elevadas (50 cm acima do chão). Cada pista tem dois braços opostos (30 cm de comprimento e 5 cm de largura). Uma das pistas tem paredes altas (15 cm de altura, braços fechados) e a outra não tem paredes altas (braços abertos). A área de interseção é chamada de área central (5 cm e vezes; 5 cm)
Camundongos reprodutores aposentados CD-1 machos  Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd201Camundongos reprodutores aposentados CD-1 machos com idade entre 4 e 6 meses como candidatos a agressores
Caixa de teste de campo abertodefeito sob medida(L × W &vezes; H: 40 cm &vezes; 40 cm &vezes; 40 cm) para o teste de campo aberto
Tampa perfuradaCustom-crafted-Transparent(L × W &vezes; H: 8 cm &vezes; 8 cm &vezes; 5,5 cm) para proteção das fêmeas do contato físico direto com camundongos CD1 (com 5 &vezes; 5 furos no teto superior e 3 & 5 furos nas paredes laterais, cada furo tem um diâmetro de 0,5 cm)
MangaCustom-crafted-Non-transparentplastic sleeve (L × W &vezes; H: 14 cm &vezes; 10 cm e vezes; 20 cm) para segurar ratos em exposição de aglomeração
Gaiola de rato padrão com topo de fio de açoSuzhou Fengshi Laboratory Equipment Co., Ltd.FS-SAGIVC-X30Gaiola de mouse padrão (L × W &vezes; H: 37 cm &vezes; 16 cm &vezes; 12 cm) com tampo de arame de aço 
SacaroseSigmaV900116Usado para preparar solução de sacarose a 1% no teste de preferência de sacarose
Caixa de suspensão traseirafeita sob medida(H × W &vezes; D: 55 cm e vezes; 60cm × 12cm) para o teste de suspensão da cauda  
Tubos acrílicos transparentesTubos acrílicos transparentes feitos sob medida com diâmetro interno de 26 mm: 30 mm de comprimento para competição de tubos, 10 mm de comprimento para adaptação de tubos.
Sistema de rastreamento de vídeo (SMART V3.0)Panlab76-0695Usado para rastrear, registrar e analisar as trajetórias de atividade e durações dos movimentos dos mouses
Caixa aberta acrílico branco Tampa perfurada Caixa de acrílico branco

Referências

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Um modelo de estresse social integrado múltiplo para transtornos psiquiátricos em camundongos C57BL / 6J fêmeas
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