Otimização dos procedimentos de coleta de amostras de biópsia de mama e mastectomia para aplicações de biobanco, medicina personalizada e pesquisa

Resumo

Este artigo apresenta um protocolo detalhado para coleta de amostras de câncer de mama, projetado para otimizar sua utilidade para biobancos, medicina personalizada e outras aplicações de pesquisa. O fluxo de trabalho para coleta de amostras, incluindo procedimentos de biópsia de mama e mastectomia, é descrito em detalhes, com foco em minimizar danos teciduais e maximizar a qualidade da amostra.

Resumo

O câncer de mama é o câncer mais prevalente que afeta as mulheres, principalmente na Ásia, com maior incidência nas Filipinas. Apesar dos esforços contínuos, a compreensão da biologia do câncer de mama permanece inadequada, agravada pela falta de programas de rastreamento eficazes e tratamentos oportunos. Abordando essas questões, os biobancos e outros repositórios de espécimes biológicos ganharam impulso global. A Universidade das Filipinas - Hospital Geral das Filipinas (UP-PGH) estabeleceu um biobanco de câncer, demonstrando a viabilidade de uma iniciativa apoiada pelo governo para a pesquisa do câncer nas Filipinas. O estudo envolve uma observação prospectiva de 100 pacientes filipinos com câncer de mama em vários estágios da doença, aproveitando a experiência do UP-PGH, do Centro de Genoma das Filipinas (PGC) e da Universidade das Filipinas Diliman - Instituto de Biologia (UPD-IB). Ele integra a coleta, processamento e armazenamento de bioespécimes juntamente com dados abrangentes do paciente. Os procedimentos incluem extração de RNA, preparação de biblioteca e sequenciamento. Além disso, um subconjunto de pacientes participa de um experimento de cultura de células tridimensional (3D) in vitro para pré-triagem de quimioterapia. Os dados agregados visam descobrir estratégias terapêuticas que podem levar a tratamentos personalizados onde as abordagens clínicas padrão são inadequadas. As principais técnicas incluem biópsia por agulha grossa guiada por ultrassom, coleta meticulosa de tecido mamário normal e determinação precisa da porcentagem de tumor para garantir extração de RNA de alta qualidade, sequenciamento e cultura de células 3D. O estudo também aborda os desafios encontrados em empreendimentos anteriores de biobancos. Em última análise, esta pesquisa visa contribuir significativamente para a pesquisa do câncer de mama, posicionando-se como um modelo para pesquisa colaborativa, estabelecimento de biobancos e avanço da medicina de precisão em países em desenvolvimento, como as Filipinas.

Introdução

O câncer de mama é a forma mais prevalente de câncer entre as mulheres filipinas. Na Ásia, as Filipinas exibem uma das maiores taxas de mortalidade por câncer de mama e a menor taxa de mortalidade/incidência¹. As taxas podem ter sido muito afetadas pela ausência de programas de rastreamento e tratamento oportuno e eficaz para o câncer de mama. No país, o câncer de mama é normalmente diagnosticado em estágios posteriores, uma vez que a maioria dos pacientes com câncer só procura consulta em estágios avançados do câncer. Nas Filipinas, onde se observa uma alta taxa de incidência de câncer de mama, 53% dos casos de câncer de mama foram diagnosticados nos estágios III e IV, e apenas 2-3% foram diagnosticados no estágio I ^1,2,3. Além de promover a aceitação do rastreamento e a educação do paciente sobre o câncer de mama, a pesquisa e o desenvolvimento relacionados ao câncer de mama devem ser explorados mais para diminuir a incidência de câncer de mama no país.

O estabelecimento de biobancos em todo o mundo permitiu a aceleração dos avanços médicos. Os biobancos são usados para o armazenamento e preservação de espécimes biológicos cientificamente valiosos para pesquisa e desenvolvimento futuros⁴. Desde então, os biobancos têm sido usados para pesquisa translacional⁵ e aprimoramento de abordagens médicas personalizadas⁶. Na Ásia, os biobancos estão concentrados principalmente no Leste Asiático, especialmente na China, Japão e Coréia⁴. Em países de baixa e média renda da Ásia, como as Filipinas, o conceito de biobanco ainda está surgindo. Os biobancos nas Filipinas são principalmente de propriedade de instituições de saúde privadas, onde o estado de saúde e exposição da demografia filipina mais ampla pode não estar bem representado.

O estabelecimento do biobanco de câncer no Hospital Geral das Filipinas (PGH) da Universidade das Filipinas em Manila (UPM) provou a viabilidade de estabelecer um biobanco de câncer apoiado pelo governo que possa promover estudos relacionados ao câncer nas Filipinas⁷. Com base nessa base por meio de um esforço colaborativo que une experiência médica, inovação em pesquisa e política de saúde, nos esforçamos para criar uma mudança positiva no cenário do tratamento e pesquisa do câncer de mama nas Filipinas. Com isso, há uma necessidade imperativa de ter um fluxo de trabalho de biobanco de fenômenos de câncer e uma abordagem expandida que agilize a coleta de dados extensos e estratificados específicos do paciente em escala nacional. Este estudo descreve o protocolo para procedimentos de coleta de amostras de biópsia de mama e mastectomia, com foco em sua integração na estrutura do biobanco. Antecipando não apenas o avanço de nossa compreensão da patogênese do câncer de mama no contexto da população filipina, mas também facilitando o desenvolvimento de tratamentos de precisão que se alinham com os atributos genéticos, ambientais e clínicos exclusivos dos indivíduos afetados.

Protocolo

Este é um estudo prospectivo e observacional com uma coleção de bioespécimes não identificados (tumor e tecido mamário normal) e dados clínico-patológicos, de tratamento e de resultados de 100 pacientes filipinas com câncer de mama em vários estágios. Este é um trabalho colaborativo entre o Hospital Geral das Filipinas (PGH), o Centro de Genoma das Filipinas (PGC) e o Instituto de Biologia (IB) da Universidade das Filipinas Diliman, cada um com tarefas designadas. O protocolo foi registrado no Escritório de Administração de Bolsas de Pesquisa (RGAO-2020-0933) e revisado e aprovado pelo Conselho de Ética em Pesquisa da Universidade das Filipinas em Manila (UPMREB) para implementação sob o número de autorização ética UPMREB 2020-822-01. Todos os laboratórios utilizados seguem as diretrizes de biossegurança de cada instituição. O recrutamento de pacientes do PGH garantiu a variância e a representação em termos de fatores clínico-patológicos, etnia e exposições ambientais. Um procedimento operacional padrão (POP) desenvolvido e validado em projetos anteriores foi utilizado como estrutura para a aquisição, coleta, transporte e outros arranjos logísticos relacionados às amostras.

NOTA: Veja a Figura 1 - Fluxo de trabalho diagramático do protocolo para o resumo do fluxo de trabalho do protocolo e as funções de cada instituição envolvida no estudo.

1. Procedimento de coleta de amostras pré-mama

1. Identifique e rastreie os pacientes elegíveis para inclusão no estudo durante uma consulta clínica ou conferência pré-operatória.
   1. Critérios de inclusão para pacientes com câncer
      1. Incluem filipinas, mulheres, com idades entre 19 e 75 anos diagnosticadas com câncer de mama nos estágios 1, 2 e 3, e mulheres filipinas com idades entre 19 e 70 anos diagnosticadas com câncer de mama nos estágios 3B e 4.
      2. Inclua casos clinicamente suspeitos ou diagnosticados patologicamente de câncer de mama invasivo de qualquer estágio.
      3. Inclua pacientes que serão submetidos a tratamento cirúrgico (mastectomia radical modificada ou mastectomia radical) antecipadamente (Estágio Clínico I ou II) ou quimioterapia pós-neoadjuvante (Estágio IIIB, IIIC). Os pacientes em estágio IIIA podem ser submetidos a cirurgia inicial ou terapia neoadjuvante de acordo com as recomendações do médico. Para pacientes em estágio IV, aqueles dispostos a se submeter a biópsia por agulha grossa do tumor de mama e tecido normal adjacente. Pacientes com câncer de mama em estágio IV não serão submetidos a tratamento cirúrgico.
      4. Inclua pacientes com câncer de mama em estágio III que foram submetidos a terapia neoadjuvante antes do recrutamento, e há um registro completo de resposta ao tratamento médico e clínico.
      5. Inclua pacientes que possam entender e assinar o consentimento informado.
   2. Critérios de exclusão para pacientes com câncer
      1. Excluir pacientes com malignidade prévia ou concomitante, incluindo diagnóstico prévio de câncer de mama.
      2. Exclua pacientes com câncer de mama bilateral.
      3. Exclua pacientes que foram submetidos a radioterapia neoadjuvante ou terapia hormonal anterior.
      4. Excluir pacientes submetidos a biópsia central ou incisional anterior onde não há consentimento para repetir o procedimento de biópsia para os pacientes que serão submetidos à quimioterapia neoadjuvante (uma vez que nenhuma amostra de tumor fresco pré-quimioterapia pode ser obtida)
      5. Excluir pacientes submetidos a biópsia excisional prévia sem tumor residual.
      6. Excluir pacientes com comorbidades que impeçam o tratamento cirúrgico ou a quimioterapia neoadjuvante.
   3. Critérios de retirada
      1. Informe aos participantes que eles podem se retirar a qualquer momento por questões de segurança ou outras preocupações sem afetar seus cuidados médicos. Este estudo não intervencionista não afetará a escolha do tratamento para os participantes.
2. Obtenha o consentimento do paciente e preencha o formulário de coleta de dados.
   NOTA: O bolsista responsável designado (FIC) ou o consultor, juntamente com o pesquisador associado da universidade (URA), obtém o consentimento.
3. Obtenha e verifique o cronograma do paciente para o procedimento de biópsia por agulha grossa após confirmar sua participação no estudo.
4. Conduzir procedimentos em conformidade com as diretrizes estabelecidas e aprovadas pelo Comitê de Ética e Comitê de Biossegurança da instituição.

2. Procedimento de coleta de amostra de biópsia de mama

NOTA: Consulte a Figura 2 para obter o fluxo de trabalho detalhado do procedimento de biópsia de mama por agulha grossa para pacientes em estágio III e IV, mostrando a distribuição de amostras para cada procedimento.

1. Pré-rotule os tubos antes da coleta da amostra como GB, ou seja, Genômica - Mama (o estudo em que a amostra está), xxx que é o número do participante e pode variar de 001 a 100, ou mais, e as letras A, C e D. A seguir estão os códigos de letras a serem usados na rotulagem dos tubos:
   A - significa biópsia por agulha grossa, tecido tumoral, para envio ao PGC
   C - significa biópsia por agulha grossa, tecido tumoral, para biobanco
   D - significa biópsia por agulha grossa, tecido normal
   1. Atribua as amostras enviadas para sequenciamento com o rótulo do laboratório: "BC" e dois números de amostra de dois dígitos (por exemplo, BC01, BC21). Cada amostra tem um código "GB" correspondente que se correlaciona com o código atribuído durante a coleta de amostras.
2. Obtenha até nove núcleos de tecido usando uma pistola de biópsia com agulha grossa de 14 G sob orientação de ultrassom, em um ambulatório, sala de cirurgia ou outro ambiente asséptico.
   1. Para cada núcleo, obtenha uma amostra de mama de aproximadamente 2 cm de comprimento no centro do tumor e 1 cm de distância do tumor para tecido normal adjacente. Colete dois tipos de amostras de cada participante: tecido tumoral e tecido normal.
   2. Entregue cada amostra à URA para colocação em uma placa de Petri contendo solução salina tamponada com fosfato (PBS).
      NOTA: Neste estudo, as biópsias por agulha grossa foram realizadas apenas em pacientes com câncer de mama em estágio III e IV. Para pacientes em estágio III, as biópsias por agulha grossa forneceram amostras de tumor virgens de quimioterapia. Para pacientes em estágio IV, as biópsias com agulha grossa serviram como amostra primária do tumor, pois a mastectomia não foi realizada. Para pacientes com câncer de mama em estágio I e II, não foram realizadas biópsias por agulha grossa. Em vez disso, o tumor e os tecidos normais adjacentes foram obtidos de amostras de mastectomia.
3. Corte as amostras de biópsia ao meio para distribuir uniformemente entre o estudo e a análise histopatológica.
   1. Para tecido tumoral, obtenha até 9 núcleos por paciente do estudo usando uma agulha de 14 G.
   2. Separe os núcleos tumorais obtidos em 2 grupos na placa de Petri: amostras para análise de RNA (6 núcleos) e amostras para biobanco (3 núcleos).
   3. Corte cada núcleo em 2 no sentido do comprimento, mas nos casos em que for difícil fazer isso, corte os núcleos em 2 transversalmente. Use uma lâmina estéril para cortar os núcleos. Envie metade do núcleo do tecido para análise de RNA ou armazene para biobanco. Envie a outra metade do núcleo do tecido para Patologia para análise histopatológica de rotina.
   4. Para tecido normal, obtenha até 3 núcleos por paciente do estudo usando uma agulha de 14 G. Use uma agulha diferente da usada para obter tecidos tumorais para evitar contaminação. Nos casos em que isso não for possível, obtenha tecidos mamários normais antes de obter tecidos tumorais.
   5. Coloque cada tecido normal obtido em uma placa de Petri semelhante ao que foi feito com os tecidos tumorais e corte os núcleos ao meio. Distribuir as amostras para o estudo e para o Departamento de Patologia para a análise histopatológica.
4. Após a coleta da amostra, distribua as amostras entre os tubos, seguindo uma forma e ordem de prioridade.
   1. Coloque metade dos núcleos no criovial designado de 2 mL pré-preenchido com 1,25 mL de solução de estabilização de RNA (todos os núcleos para análise de RNA colocados juntos em 1 frasco para injetáveis e todos os núcleos para biobanco em um frasco separado, mantenha as amostras em temperatura fria o tempo todo) e coloque as metades correspondentes desses núcleos em frasco/tubo de amostra comum e fixados com formalina tamponada neutra a 10% (10% NBF), para análise histopatológica. Certifique-se de que os dois meios-grupos correspondentes, aquele que vai para o centro designado (por exemplo, amostras enviadas para análise de RNA) e a amostra de patologia correspondente tenham o mesmo código de amostra.
5. Preencha os formulários de patologia cirúrgica. Juntamente com os formulários, envie os espécimes de patologia fixados com formalina à patologia para histopatologia de rotina.
6. Sele com parafilme as amostras de biópsia por agulha grossa embebidas em tubos contendo solução de estabilização de RNA (idealmente proporção de 5:1 de solução para tecido, portanto, se tecido de 0,25 cm, 1,25 mL de solução de estabilização de RNA).
7. Armazenar as amostras a 4 °C durante 24 h e, em seguida, transferi-las para o congelador ultrabaixo, com uma temperatura de -80 °C.
   NOTA: Um guia sobre armazenamento será discutido na Seção 4 (Armazenamento, embalagem e transporte de amostras).

3. Procedimento de coleta de amostra de mastectomia mamária

1. Siga o procedimento de coleta de amostra pré-mama na Seção 1.
   NOTA: As pacientes em estágio I, II e III inscritas no estudo serão submetidas à mastectomia na sala de cirurgia (SO). Para pacientes nos estágios I e II, a mastectomia será feita antecipadamente, enquanto para pacientes no estágio III, a mastectomia só será feita após a conclusão de 8 ciclos de terapia neoadjuvante. Para o estágio 4, nenhuma amostra de mastectomia é coletada. Consulte a Figura 3 para obter o protocolo detalhado de coleta de amostras de mastectomia mamária mostrando a distribuição de amostras por procedimento.
2. Coordenar o cronograma com os colaboradores e o departamento de Patologia. Faça isso pelo menos 2 dias antes da data prevista do procedimento. Em caso de alterações no cronograma definido, informe imediatamente o pessoal envolvido para evitar conflitos no cronograma.
3. Pré-rotule os tubos antes da coleta da amostra como GB, ou seja, Genomics Breast (o estudo em que a amostra está), xxx que é o número do participante e pode variar de 001 a 100, ou mais, e as letras E e F. A seguir estão os códigos de letras a serem usados na rotulagem dos tubos:
   E - significa mastectomia, tecido tumoral, para envio ao PGC, IB e para biobanco
   F - significa mastectomia, tecido normal
   1. Atribua as amostras enviadas para sequenciamento com o rótulo do laboratório: "BC" e número de amostra de dois dígitos (por exemplo, BC01, BC21). Cada amostra tem um código "GB" correspondente que se correlaciona com o código atribuído durante a coleta de amostras.
4. Preencha os formulários de patologia cirúrgica durante a cirurgia, enquanto aguarda a amostra. Envie atualizações ao patologista responsável para que ele faça os preparativos necessários para a coleta de amostras.
5. Coloque a amostra em um saco plástico / amostra limpo logo após a remoção e documentação da amostra de mama. Certifique-se de que a amostra de mastectomia seja imediatamente levada ao departamento de patologia para macroscopia para minimizar o tempo isquêmico frio. Não coloque a amostra em formalina após a apresentação.
   NOTA: Exemplos de fotos de ação durante a mastectomia são mostrados na Figura 4 (Imagens representativas da coleta de amostras durante o procedimento de mastectomia).
6. Obtenha dois tipos de amostras de cada amostra após a macroscopia: tecido tumoral e tecido normal.
   1. Tecido tumoral
      1. Obtenha no mínimo um bloco (de preferência mais) medindo 1 cm × 1 cm × 1 cm de tecido tumoral por espécime.
      2. Corte o bloco de tecido obtido em duas partes, com cada meio bloco medindo 1 cm × 0,5 cm × 0,5 cm. Entregue mais da metade do bloco de tecido à URA para biobanco e análise e, em seguida, fixe a outra metade em formalina para histopatologia de rotina.
      3. Ssecção uniformemente o meio bloco de tecido fresco. Isso será destinado ao sequenciamento de RNA, biobanco e cultura de organoides.
      4. Para sequenciamento de RNA: Coloque imediatamente em criogeniais de 5 mL pré-resfriados e pré-marcados, pré-preenchidos com 2,5 mL de solução estabilizadora de RNA (não excedendo 30 min, deve ser mantido frio o tempo todo).
      5. Para biobanco: Coloque imediatamente em criogeniais pré-resfriados, pré-marcados e pré-preenchidos de 5 mL com solução estabilizadora de RNA de 2,5 mL (não excedendo 30 min, deve ser mantido frio o tempo todo).
      6. Para cultura organoide: Coloque imediatamente em frascos cônicos pré-resfriados, pré-rotulados e pré-cheios de 15 mL com 5 mL de solução de armazenamento de tecido e 0,01 mL de Primocin (não excedendo 30 min, deve ser mantido frio o tempo todo). Agrupe em um tubo cônico um terço de todos os blocos tumorais obtidos de diferentes seções da amostra.
   2. Tecido normal
      1. Obtenha um mínimo de um bloco (de preferência mais) medindo 1 cm × 1 cm × 1 cm de tecido mamário normal por amostra.
      2. Corte o bloco de tecido obtido em duas partes, com cada meio bloco medindo 1 cm × 1 cm × 0,5 cm. Entregue mais da metade do bloco de tecido à URA para biobanco e análise e, em seguida, fixe a outra metade em formalina para histopatologia de rotina.
      3. Corte o bloco de tecido igualmente em dois para o estudo. Estes serão destinados ao sequenciamento de RNA e biobanco.
      4. Para sequenciamento de RNA: Coloque imediatamente em criogeniais pré-resfriados e pré-marcados de 5 mL, pré-preenchidos com criogeniais de 2,5 mL com solução de estabilização de RNA (não excedendo 30 min, mantenha em temperatura fria o tempo todo).
      5. Para biobanco, coloque imediatamente em criogenias pré-resfriadas, pré-marcadas e pré-cheias de 2,5 mL com solução estabilizadora de RNA (não excedendo 30 min, mantenha sempre em temperatura fria).
         NOTA: As amostras de tumor rotuladas como "E" são normalmente obtidas de três ou mais seções diferentes da amostra. Para evitar confusão, as amostras de tumor destinadas à análise de RNA e biobanco devem ser colocadas em tubos separados rotulados como E1, E2, E3, etc., enquanto as amostras de tumor agrupadas destinadas à cultura de células devem ser colocadas em tubos rotulados simplesmente como E. Para amostras rotuladas como E1, E2 e E3, a posição/localização relativa de cada amostra de tecido em relação ao tumor (por exemplo, centro, posição das 10 horas) deve ser registrada.
7. Sele com parafilme os criogeniais contendo as amostras obtidas da mastectomia.
8. Armazene os criotubos em 4 ° C por 24 h e, em seguida, transfira-os para o freezer ultrabaixo, com uma temperatura de -80 ° C para armazenamento de longo prazo.
9. Embale o tubo cônico contendo os blocos tumorais agrupados e prepare-o para o transporte. Esses blocos tumorais serão usados para cultura de células em organoides.

4. Armazenamento, embalagem e transporte de amostras

1. Selar imediatamente com parafilme todos os crioviais que contenham o tumor e os tecidos normais e conservá-los a 4 °C durante 24 h. Após 24 h, transfira os tubos para -20 °C por cerca de 2-4 h e, eventualmente, transfira-os para -80 °C indefinidamente, para armazenamento de longo prazo até o transporte.
2. Atualize o rastreador de amostras e o banco de dados antes do transporte de amostras para análise de RNA, incluindo os resultados da histopatologia de rotina e porcentagens de tumores, para garantir a identidade da amostra.
3. Realize um manifesto de transporte para cada amostra, antes do transporte. Certifique-se de que o processo de embalagem seja rápido e que os tubos contendo as amostras não sejam deixados em temperatura ambiente (RT) por um período prolongado.
   1. Sele todas as tampas crioviais com parafilme para evitar vazamentos.
   2. Coloque todos os tubos em um rack de tubos de ensaio.
   3. Defina o registrador de temperatura e coloque-o sobre o rack ao lado dos tubos para transporte.
   4. Enrole os tubos com material absorvente, depois com plástico bolha e coloque os itens dentro do saco que pode ser fechado novamente. Certifique-se de que o registrador de temperatura esteja registrando a temperatura e que os tubos estejam intactos e posicionados na vertical antes de selar os itens dentro do saco.
   5. Coloque os pacotes de gel no fundo da caixa de transporte de poliestireno e, em seguida, coloque o saco que pode ser fechado novamente contendo os tubos em cima dos pacotes de gel. Coloque outra camada de pacotes de gel em cima do saco. Certifique-se de que os tubos estejam entre os pacotes de gel para garantir que as amostras sejam mantidas frias durante o transporte.
   6. Feche a caixa de poliestireno e coloque-a dentro de uma caixa de papelão. Se não houver uma caixa de papelão grande disponível, use uma caixa de poliestireno maior. Coloque o manifesto de transporte preenchido dentro de um saco ziplock e coloque-o dentro da caixa. A colocação dos itens dentro da caixa é mostrada na Figura 5.
   7. Feche a caixa de papelão e coloque a etiqueta de remessa apropriada fora da caixa.
4. Informe o destinatário sobre o cronograma de coleta de amostras e quando será o envio de amostras.
   1. Para a cultura de organoides, apenas tecidos tumorais derivados de mastectomias são enviados e utilizados. Certifique-se de que estes são entregues frescos, em gelo húmido e no prazo de 24 horas após a recolha das amostras. Depois que as amostras estiverem embaladas e a caixa lacrada, reserve rapidamente um mensageiro para transportá-las. Certifique-se de que as caixas não serão deixadas em áreas de alta temperatura por períodos prolongados, pois uma queda ou aumento severo de temperatura pode comprometer a viabilidade das amostras.
   2. Antes de entregar ao correio, anote o número de frascos/tubos enviados e a hora em que o mensageiro saiu do Biobanco. Após a chegada do pacote, certifique-se de que o destinatário anote o seguinte: Hora de chegada e recebimento no centro designado, temperatura na chegada, número de frascos/tubos recebidos e qualquer amostra comprometida
   3. Para análise de RNA, verifique se as amostras a serem entregues têm um resultado histopatológico correspondente e porcentagens tumorais da Divisão de Patologia Cirúrgica, antes de enviar amostras para análise de RNA. Identifique e selecione o bloco de tecido com maior conteúdo tumoral para cada paciente a ser submetido à extração de RNA. Transporte amostras apenas aquelas com porcentagens de tumor.
   4. Envie as amostras em grupos de no máximo 40 para facilitar o processamento em lote. Escolha qualquer combinação de tecido tumoral de biópsia por agulha grossa ou mastectomia e tecido normal de mastectomia. Revise as seguintes condições se o tecido normal da biópsia por agulha grossa for transportado:
      -Inscrito como Estágio 3, mas o resultado histopatológico mostra o Estágio 4
      -Inscrito no Estágio 3, mas o resultado histopatológico mostra progressão locorregional da doença.
   5. Certifique-se de que todas as amostras sejam transportadas em gelo úmido. Semelhante ao protocolo que está sendo seguido ao enviar amostras para cultura de células 3D, uma vez que as amostras são embaladas e a caixa é lacrada, reserve imediatamente um correio para transporte. Evite deixar as caixas em áreas de alta temperatura por períodos prolongados, pois flutuações significativas de temperatura podem comprometer a viabilidade das amostras.
   6. Antes de entregar ao correio, anote o número de frascos/tubos enviados e a hora em que o mensageiro saiu do Biobanco. Observe o seguinte na chegada do pacote: hora de chegada e recebimento no centro designado, temperatura na chegada, número de frascos/tubos recebidos e qualquer amostra comprometida (se houver).
5. Atualize o banco de dados de amostras enviadas e insira todas as informações necessárias antes do processamento posterior das amostras. Monitore e avalie o banco de dados uma vez por semana.

Resultados

Para a coleta de amostras durante a biópsia por agulha grossa, fazer o procedimento sob orientação de ultrassom teve um enorme impacto na conveniência do paciente e na eficiência do fluxo de trabalho, bem como na integridade do RNA das amostras. Se isso não for feito, os resultados esperados podem não ser obtidos, e os pacientes devem voltar às clínicas para repetir o procedimento, prolongando a coleta e o processamento da amostra.

Além disso, a identificação ...

Discussão

A implementação bem-sucedida deste protocolo depende não apenas da precisão técnica, mas também da coordenação das equipes clínicas e de pesquisa para garantir a qualidade consistente da amostra e a integridade dos dados. Este protocolo incorpora vários procedimentos-chave projetados para maximizar a precisão do diagnóstico e gerar bioespécimes de alta qualidade adequados para análises moleculares a jusante. As principais etapas incluem biópsia por agulha grossa guiada por ultrassom para...

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Solução de formalina 37%	PHILUSA Corporation	N/A	Usado como conservante de tecidos para análise histopatológica
Álcool isopropílico 70%	Green Cross Inc.	N/A	Usado como desinfetante
Impressora de código de barras	Zebra	GC420t	Para impressão de etiquetas de código de barras a serem usadas na rotulagem de tubos contendo as amostras
Água sanitária	Green Cross Inc.	N/A	Usado como desinfetante; para descontaminação de ferramentas cirúrgicas
Bolsas de gelo azuis	Rubbermaid	1002	Para manter amostras em baixas temperaturas durante o transporte
Biópsia com agulha do núcleo 14-G	Bardo	MN1410	Um instrumento cirúrgico tubular invasivo projetado para ser conectado a uma pistola de biópsia para a extração automática de uma pequena amostra de tecido de uma estrutura anatômica (biópsia), causando danos mínimos ao tecido ao redor, para exame/teste patológico tecidual.
Pistola de biópsia mamária com agulha de núcleo	Bardo	MG1522	Instrumento reutilizável de biópsia de núcleo usado na coleta de amostras de tecido durante biópsia por agulha de núcleo
Placa de Petri descartável 90 mm x 15 mm	Produtos Biomédicos Phoenix	LOT: 20220206	Usado na coleta de amostras de biópsia por agulha de núcleo ao submergir tecidos em PBS
Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (PBS)	Thermo Fisher Scientific	21600010	Uma solução salina balanceada usada para diversas aplicações de cultura celular, como lavagem de células antes da dissociação, transporte de células ou tecidos, diluição de células para contagem e preparação de reagentes.
Pinças	Fornecedor Local	N/A
Kimtech Science Kimwipes Limpadores de Tarefas Delicados	Kimberly Clark Profissional	KC34120	4,3 x 8,4 pol. (11,0 cm x 21,3 cm); 1 camada 280 Contagem; Para limpar superfícies, peças, instrumentos e consultórios médicos, esses lenços limpam facilmente líquidos, poeira e pequenas partículas.
Solução de armazenamento de tecidos MACS	Miltenyi Biotec	130-100-008	Solução de armazenamento usada para permitir um armazenamento otimizado de amostras frescas de órgãos e tecidos
Micropipeta	Shanghai Lichen Instrument Technology Co., Ltd.	STEM-GC-3197-Y	para pipetear/transferir líquidos em pequenos volumes
Pontas de micropipeta	Tarsons	521100	para pipetear/transferir líquidos em pequenos volumes
Parafilm	Parafilm M	5259-04LC PM996	Para vedação hermética e à prova de umidade dos tubos para evitar vazamentos
Primocin 250 mg (5 x 1 mL)	InvivoGen	ANT-PM-05	Usado para proteger tecidos contra contaminação microbiana
Geladeira (4 & deg; C)	LG	Modelo: GR-Y331SLZB	Para armazenamento de amostras de tecido e reagentes
Solução RNAlater	Thermo Fisher Scientific	AM7021	Solução de estabilização de RNA usada no armazenamento e biobanco de tecidos
Tubo cônico estéril de 15 mL	Termo Científica	339650	Usado para fazer alíquotas de reagentes/meios usados no armazenamento de tecidos
Cryovials estéreis de 5 mL	Termo Científica	5000-1020	Usado para fazer alíquotas de reagentes/meios usados no armazenamento de tecidos
Lâmina de bisturi estéril (#11)	Surgitech	N/A	Para tumor cortante e tecidos mamários normais
Tesoura cirúrgica (18,5 cm 7 & frac14; " força)	Olten Instruments	BO-0125	Para tumor cortante e tecidos mamários normais
Registrador de temperatura	Extech Instruments	42280	Para registrar temperatura e umidade durante o transporte de amostras
Tinta de tecido	Epredia	3120123	Para coloração das margens de amostras cirúrgicas excisadas para análise histopatológica
Freezer ultra-baixo	Haier Biomédica	DW-86L579	Para armazenamento indefinido do tumor e dos tecidos mamários normais
Recipiente de amostra de urina 60mL	Seguro Guarda	0016UCS06PC	Para armazenamento de tecidos para análise histopatológica
Sacolas Ziplock	Reynolds Consumer Products LLC		Usado no embalagem das amostras para transporte