Estabelecimento e avaliação de um modelo avançado de fibrose pulmonar in vitro baseado em humanos

Xihui Huang; Guilin Li; Zhixiang Lei; Xu Chen; Yunpeng Xiao; Penghui Yang

doi:10.3791/67845

Artigo de método

Estabelecimento e avaliação de um modelo avançado de fibrose pulmonar in vitro baseado em humanos

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DOI:

10.3791/67845

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22 de julho de 2025

Xihui Huang¹^,² , Guilin Li¹^,² , Zhixiang Lei¹ , Xu Chen¹^,² , Yunpeng Xiao² , Penghui Yang¹

¹State Key Laboratory of Respiratory Disease, The First Affiliated Hospital, Guangzhou Medical University, ²Guangzhou National Laboratory

Neste artigo

Resumo

Um método de imagem foi desenvolvido para avaliar a ativação de fibroblastos em fatias pulmonares humanas cortadas com precisão com base na proteína de ativação de fibroblastos (FAP). Esta metodologia estabelece uma plataforma robusta e reprodutível para estadiar a progressão fibrótica, avançando modelos translacionais in vitro para o desenvolvimento terapêutico, mantendo a fidelidade do microambiente do tecido humano.

Resumo

A fibrose pulmonar é caracterizada por destruição irreversível da estrutura alveolar e deposição excessiva de matriz extracelular. Embora os modelos animais tenham sido amplamente utilizados na pesquisa da fibrose pulmonar, nenhum dos modelos atualmente disponíveis recapitula totalmente a natureza progressiva da FPI ou sua característica histológica definidora, como focos fibroblásticos. Modelos in vitro avançados, incluindo fatias pulmonares de corte preciso (PCLS), são frequentemente considerados o sistema de teste pulmonar fisiologicamente mais relevante e têm sido empregados com sucesso para triagem de drogas. No entanto, a incapacidade de diferenciar o grau de fibrose no pulmão da FPI resultou em cegamento e incerteza no PCLS obtido. Pesquisas anteriores demonstraram que a proteína de ativação de fibroblastos (PAF) pode avaliar a atividade pró-fibrótica da DPI, contribuindo potencialmente para o diagnóstico precoce e a seleção de janelas terapêuticas apropriadas. Neste estudo, 600 μm de PCLS serão obtidos de doadores saudáveis e pacientes com FPI usando um cortador de choque e avaliados usando sondas moleculares direcionadas à PAF para determinar o grau de atividade dos fibroblastos com base na intensidade do sinal fluorescente. Essa abordagem fornece um modelo avançado in vitro e uma técnica de avaliação para pesquisa de fibrose pulmonar, aumentando a capacidade de estudar os mecanismos da doença e avaliar intervenções terapêuticas.

Introdução

A fibrose pulmonar (FP) é uma forma comum de etiologia desconhecida e prognóstico particularmente ruim, com sobrevida mediana em cinco anos de apenas 25%¹. O modelo de administração intratraqueal de bleomicina é atualmente o modelo animal mais utilizado para estudos pré-clínicos². No entanto, a fibrose induzida pela bleomicina é transitória e se resolve com o tempo, o que contrasta fortemente com a natureza irreversível da FPI³. Além disso, o modelo de bleomicina intratraqueal apresenta desafios significativos devido à gravidade heterogênea da fibrose resultante d....