Identificação de inibidores de PD-1/PD-L1 com tecnologia de ressonância plasmônica de superfície

Huifang Li; Tess Puopolo; Justin Gutkowski; Navindra P. Seeram; Chang Liu

doi:10.3791/67859

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Artigo de método

Identificação de inibidores de PD-1/PD-L1 com tecnologia de ressonância plasmônica de superfície

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DOI:

10.3791/67859

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2 de maio de 2025

Huifang Li¹ , Tess Puopolo¹ , Justin Gutkowski¹ , Navindra P. Seeram¹ , Chang Liu¹

¹Department of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy, University of Rhode Island

Neste artigo

Resumo

Este protocolo descreve um ensaio de bloqueio para inibidores de PD-1/PD-L1 usando tecnologia de ressonância plasmônica de superfície. Ele emprega uma estratégia de imobilização em duas etapas e um sistema tampão personalizado para medir com precisão as unidades de resposta, facilitando a avaliação das taxas de bloqueio de compostos ou produtos biológicos. Além disso, suporta a identificação de alto rendimento de inibidores de PD-1/PD-L1.

Resumo

A interrupção da interação PD-1/PD-L1 é uma estratégia promissora para a imunoterapia contra o câncer. Plataformas de triagem confiáveis são essenciais para avaliar a eficácia dos inibidores de PD-1/PD-L1. Um ensaio de bloqueio de PD-1/PD-L1 humano previamente estabelecido utilizando a tecnologia de Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR) (plataforma de triagem SPR inibidora de PD-1/PD-L1 de primeira geração) demonstrou resultados comparáveis aos obtidos por meio de Fluorescência Homogênea Resolvida no Tempo (HTRF) e ensaios baseados em células, com potencial para triagem em larga escala. Aqui, uma versão otimizada deste ensaio (plataforma de triagem SPR inibidora de PD-1 / PD-L1 de segunda geração) é apresentada, apresentando um processo de acoplamento de duas etapas que combina acoplamento de amina e bioestreptavidina para melhorar o controle de orientação de PD-1 no chip e reduzir o consumo de proteína PD-1. A plataforma atualizada foi validada com sucesso usando o inibidor de PD-1/PD-L1 BMS-1166, mostrando efeitos de bloqueio comparáveis ao método anterior baseado em SPR e outras técnicas estabelecidas, como ELISA. Esses resultados confirmam a confiabilidade da abordagem. Esta plataforma de triagem SPR otimizada oferece uma ferramenta confiável e de alto rendimento para identificar novos inibidores de PD-1/PD-L1, avançar na pesquisa de imunoterapia contra o câncer e destacar o potencial da SPR na triagem de inibidores de checkpoint imunológico.

Introdução

As terapias de bloqueio de checkpoint imunológico, particularmente aquelas direcionadas à Morte Celular Programada-1 (PD-1) e ao Ligante de Morte Celular Programada 1 (PD-L1), estão na vanguarda das estratégias de imunoterapia contra o câncer. As terapias anti-PD-1/PD-L1 receberam aprovação para uso em vários tipos de câncer, como câncer hematológico, cutâneo, pulmonar, hepático, de bexiga urinária e renal¹. PD-1 é uma glicoproteína transmembrana pertencente à superfamília das imunoglobulinas, caracterizada por um único domínio semelhante a uma variável de imunoglobulina (IgV) no N-terminal, um pedúnculo de apr....