Um procedimento de cirurgia Craniotomia para Brain Imaging crônica

Resumo

Este vídeo e protocolo de demonstrar como a implantação de um vidro coberto janela craniana em roedores. Estas preparações podem ser usados ​​para doenças crônicas in vivo de dois fótons de imagens do neocórtex em escalas de tempo de meses. Também pode ser utilizado para outros tipos de imagem, incluindo imagens sinal óptico intrínseco.

Resumo

Técnicas de imagem estão se tornando cada vez mais importante na função cerebral estudo. Entre eles, dois fótons microscopia de varredura a laser tem emergido como um método extremamente útil, pois permite o estudo do cérebro vivo intacta. Com preparações adequadas, esta técnica permite a observação da mesma área cortical cronicamente, de minutos a meses. Neste vídeo, mostramos uma preparação para a crônica in vivo de imagens do cérebro usando dois fótons de microscopia. Esta técnica foi desenvolvida pioneiramente pelo Dr. Karel Svoboda, que agora é um Howard Hughes Medical Institute na Janelia Farm. Preparações como a mostrada aqui pode ser usado para geração de imagens da estrutura neocortical (por exemplo, a dinâmica dendríticas e axonal), para gravar a atividade neuronal de cálcio utilizando-sensíveis corantes, a imagem dinâmica do fluxo sanguíneo cortical, ou para estudos de imagem óptico intrínseco. Imagem profunda do neocórtex é possível com ótima janela cirurgias cranianas. Funcionar nas condições mais estéril possível, para evitar infecções, juntamente com o uso extremo cuidado para não danificar a dura-máter durante a cirurgia, irá resultar em sucesso e de longa duração coberto de vidro janelas do crânio.

Protocolo

1. Anestesiar ratos com isoflurano (4% para a indução, 1,5-2% para a cirurgia), utilizando IACUC procedimentos aprovados. É importante que a cauda e / ou pitadas toe são usados ​​para garantir que o animal está completamente sedado.
2. Usando um cortador de roedores, raspar o cabelo na parte de trás do pescoço até os olhos.
3. Posicione o mouse em uma moldura estereotáxica, sobre um cobertor cirurgia de água re-circulação. Fixe de forma segura a cabeça com barras de ouvido.
4. Aplicar pomada, para evitar que o olho do animal de secar.
5. Administrar, por via subcutânea, dexametasona (0,2 mg / Kg) e carprofeno (5 mg / Kg) para evitar o inchaço do cérebro e / ....

Discussão

Como temos mostrado no vídeo e nas figuras complementares, a preparação janela cranial, combinado com o uso de dois fótons de microscopia, é uma ferramenta muito poderosa para estudar in vivo a estrutura e função do neocórtex. A técnica requer um rigoroso treinamento para se familiarizar com a anatomia relevante e os procedimentos cirúrgicos fina e habilidades que esta preparação exige. Apenas cirurgias pristine pode ser usado para geração de imagens crônica. Se a duração é manipulado excessivamente ou perfurado, a preparação não deve ser u.......

Materiais

Barras de titânio são feitos sob medida