Elastômeros magneto-reológicos micropadronizados para impulsionar mudanças no alinhamento de cardiomiócitos

Resumo

Apresentamos uma plataforma de ensaio de rigidez dinâmica e reversível fabricada usando um elastômero de silicone ultramacio (polidimetilsiloxano, PDMS) com partículas de ferro incorporadas. Este novo ensaio é adequado para estudar mudanças físicas emergentes dependentes do tempo em fenótipos celulares, incluindo orientação de contato. Aqui, medimos o alinhamento de cardiomiócitos de ratos neonatais após o enrijecimento da matriz usando magnetismo.

Resumo

Pistas associadas ao substrato, como mecânicas e topográficas, influenciam profundamente a resposta celular. No entanto, grande parte da pesquisa fundamental emprega efeitos estáticos ou isolados. A direção e a escala de tempo desses efeitos mecânicos nas respostas celulares emergentes permanecem amplamente inexploradas. Ferramentas para examinar como os estímulos associados ao substrato que variam no tempo impulsionam os processos fisiológicos e patológicos podem desbloquear o próximo nível de percepção mecanobiológica. Aqui, usamos elastômeros magnetoreológicos micropadronizados (MREs) que podem endurecer e amolecer rapidamente em resposta a um campo magnético externo, permitindo uma investigação mais rigorosa dos efeitos da estimulação mecânica (rigidez) e guiada por contato (topográfica) na orientação e alinhamento de cardiomiócitos de ratos neonatais. Ao integrar o controle dinâmico da rigidez mecânica que pode ser ajustado e revertido temporalmente, podemos testar rigorosamente os efeitos da carga por (1) pré-condicionamento sob condições idênticas e (2) alteração aguda da biomecânica in vitro para imitar a fenomenologia clinicamente relevante, como o infarto do miocárdio adequadamente. Essa abordagem nos permite estudar o impacto da carga nas respostas celulares de maneira mais realista e controlada.

Introdução

A capacidade do coração de bombear sangue com eficiência depende da arquitetura e das propriedades mecânicas (rigidez) de seu miocárdio, onde a organização precisa das células e tecidos é essencial para a contração coordenada e a função geral. O miocárdio é composto principalmente por cardiomiócitos (MCs), que, em adultos, exibem uma morfologia alongada, quase em forma de bastonete, com sarcômeros (a unidade contrátil dos MCs) alinhados ao longo do comprimento da célula. Em contraste, os MCs derivados de células-tronco pluripotentes fetais ou induzidas (iPSC) diferem significativamente dos CMs adultos. Eles tendem a ter uma forma mais arredondada, um único núcleo, uma estrutura sarcomérica desorganizada ou desalinhada e uma frequência de batimento irregular. A semelhança estrutural da organização in vivo do miocárdio permite a sincronia da contração e da transmissão de força; Isso é crítico e essencial para recapitular o miocárdio natural por meio de um modelo in vitro. Para gerar CMs com características estruturais semelhantes ao miocárdio maduro, estudos anteriores demonstraram estratégias bem-sucedidas para melhorar a maturação, incluindo a manipulação da rigidez do substrato ^1,2, a aplicação de deformação mecânica³, a utilização de orientação de contato ^4,5 ou o emprego de estimulação elétrica ^6,7.

Há muito se entende que a rigidez do ambiente extracelular afeta as células. Existe uma vasta diversidade de rigidez em todo o corpo humano, variando de centenas de pascais (Pa) no cérebro e até dezenas de gigapascais (GPa) no osso ^8,9,10. Verificou-se que, durante o desenvolvimento, os tecidos mudam de rigidez, e essa alteração regula a diferenciação e maturação do nível celular nos fenótipos adultos necessários para a função normal 11,12,13,14. Alterações na rigidez também têm sido associadas a estados de doença e à progressão de patologias específicas 15,16,17,18. Especificamente, a rigidez do miocárdio muda com o desenvolvimento e progressão de doenças; por exemplo, um miocárdio saudável tem um módulo de elasticidade de ~ 10 kPa em contraste com um coração com falha, que tem um módulo de elasticidade de 35-70 kPa ou mais¹⁹. Além disso, numerosos estudos in vitro relataram que cardiomiócitos cultivados em um substrato semelhante à rigidez do miocárdio nativo tiveram melhor organização do sarcômero²⁰, geraram contração ideal ^1,19 e tiveram a maior duração do potencial de ação²¹.

Além disso, tornou-se mais reconhecido que as células in vivo são expostas a uma variedade complexa de pistas topográficas dentro de seu microambiente que impulsionam a forma e a função. Essas pistas topográficas vêm em vários tamanhos e geometrias, desde o arranjo aleatório de integrinas em nível molecular até o alinhamento em nível de mícron das células nos tecidos musculares^22,23. Semelhante a outros reguladores mecânicos, a topografia é importante para a morfologia celular, como espalhamento, alongamento, alinhamento, motilidade, diferenciação e apoptose 24,25,26. Com a introdução de substratos de cultura sintéticos, foram desenvolvidos métodos para criar topografia de superfície controlada para cultura de células e tecidos 27,28,29. Por exemplo, nano e micro-sulcos micropadronizados têm sido usados para fornecer orientação de contato para células de mamíferos, de modo que as células orientem e remodelem seu citoesqueleto para seguir as estruturas topográficas do substrato de cultura.

Aqui, apresentamos um método de cultura in vitro que integra orientação estrutural (sugestão de contato) e mecânica (rigidez) usando um substrato de elastômero magnetoreológico padronizado (MRE), um material ajustável que pode ser endurecido ou amolecido ajustando a força do campo magnético 17,30,31,32. Ao posicionar ímãs próximos ao substrato de cultura, a rigidez pode ser aumentada, com o grau de enrijecimento modificável variando a distância entre a amostra e o ímã. Por outro lado, a rigidez pode ser reduzida removendo completamente o ímã. Essa abordagem fornece um método robusto, dinâmico e controlável para replicar as condições mecânicas in vivo, enquanto a micropadronização de superfície introduz anisotropia, permitindo a criação de substratos de cultura de células 2D mais biomiméticos.

Protocolo

1. Preparação do carimbo PDMS padronizado

NOTA: Um carimbo PDMS é essencial para sua flexibilidade, permitindo fácil manipulação e contato preciso ao preparar a superfície MRE padronizada. A natureza flexível do carimbo também permite a remoção sem esforço da camada MRE PDMS sem danificar o padrão, garantindo a transferência precisa do padrão e a preservação da superfície MRE.

1. Prepare 10 g de 10:1 (base: agente de cura) 184 PDMS.
2. Despeje 5 g de 184 PDMS em uma placa de Petri de 35 mm e desgaseifique em um dessecador por ~ 5-10 min, até que todas as bolhas se dissipem.
3. Deixar catalisar 184 PDMS numa estufa a 60 °C durante 30 min.
4. Quando restarem 5 minutos para que os 184 PDMS curem parcialmente, adicione uma fina camada dos 184 PDMS extras à grade de difração e desgaseifique no dessecador por ~ 5 min.
5. Retire do forno o prato de 35 mm com os 184 PDMS parcialmente curados.
6. Vire a grade de difração com PDMS para o 184 PDMS parcialmente curado em um prato de 35 mm.
   NOTA: Certifique-se de que a grade de difração esteja voltada para baixo nos 184 PDMS parcialmente curados no prato de 35 mm.
7. Pressione levemente a grade de difração até que uma pequena quantidade de 184 PDMS envolva a grade.
8. Use os 184 PDMS não curados restantes para preencher o prato ao redor da grade para garantir que ele permaneça no lugar durante a cura.
9. Coloque o prato que contém a grelha de difração na estufa regulada a 60 °C durante 1,5 h.
10. Depois de o 184 PDMS estar totalmente curado, retire do forno o prato de 35 mm com a grelha de difração.
11. Marque ao redor da grade de difração com um bisturi.
12. Aplique uma pequena quantidade de álcool isopropílico (IPA) para penetrar por baixo da grade de difração.
13. Puxe a grade para fora do 184 PDMS na direção paralela aos padrões.
14. Remova o excesso de 184 PDMS, deixando apenas a seção padronizada.
15. Corte o carimbo de 184 PDMS no tamanho necessário.
    NOTA: Este estudo usa um carimbo de 1 cm × 1 cm para os dispositivos.

2. Revestimento de superfície do selo de PDMS

NOTA: Um tratamento de silano cria um revestimento de superfície que evita a adesão indesejada entre as camadas de PDMS durante a estampagem, garantindo uma separação suave e preservando a qualidade da transferência do padrão.

1. Tratamento com silano (método preferido)
   1. Coloque o carimbo 184 PDMS fabricado em um limpador de plasma O₂ com a superfície padronizada voltada para cima. Trate a superfície do PDMS com 45 W de plasma de O₂ por 30 s.
      NOTA: Uma vez removido do limpador de plasma, coloque uma tampa (ou tampa) sobre os selos imediatamente para garantir que nenhum detrito se deposite nos selos limpos.
   2. Coloque 184 carimbos PDMS em um dessecador em uma capela de exaustão.
   3. Rasgue a tampa de um tubo de microcentrífuga.
   4. Coloque a tampa do tubo da microcentrífuga ao lado dos selos 184 PDMS no dessecador.
   5. Adicione 20 μL de tricloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctil) silano à tampa do tubo da microcentrífuga.
      CUIDADO: Este produto químico é perigoso para a saúde e, portanto, só deve ser usado em uma capela de exaustão química.
   6. Feche o dessecador e puxe um aspirador.
   7. Deixe o silano revestir os selos de 1 h até durante a noite.

3. Preparação de elastômeros magnetoreológicos

NOTA: Para criar MREs sintonizáveis e reversíveis, uma proporção precisa de partículas de ferro carbonílico e elastômero, combinada com a aplicação de um campo magnético, permite o ajuste da rigidez em uma faixa de valores. Ao variar a fração de partículas, o módulo de elastômero de base e a intensidade do campo magnético, a rigidez do material pode ser ajustada com precisão para atender a requisitos específicos.

1. Preparação de MRE de faixa dinâmica mais suave (consulte a Tabela 1 para exemplos de pesos)
   1. Meça a quantidade desejada de diluente de silicone e elastômero Eco parte B e misture a 2500 rpm em um misturador de velocidade por 1 min.
   2. Adicione elastômero Eco parte A e partículas de ferro carbonílico à solução e misture a 2500 rpm em um misturador de velocidade por 1 min.
      NOTA: A ordem de mistura é crítica para garantir o tempo de polimerização desejado.
   3. Usando uma pipeta de transferência com a ponta cortada, adicione 5 g de MRE a uma nova placa de Petri de 35 mm e desgaseifique em um dessecador por ~ 5 min, depois deixe curar parcialmente no forno a 60 ° C por ~ 10 min.
      NOTA: Garantir que o forno e o dessecador estejam nivelados corretamente é essencial para obter uma amostra plana, o que é fundamental para a facilidade de geração de imagens.
   4. Quando restarem 5 minutos, use uma pipeta de transferência para adicionar MRE extra não curado para revestir apenas a superfície do carimbo 184 PDMS. Coloque o carimbo revestido no dessecador para desgaseificar por 5 min.
      NOTA: Tenha cuidado para não usar muito MRE, pois se cobrir as bordas do carimbo, será mais difícil removê-lo quando o MRE estiver totalmente curado. Além disso, certifique-se de indicar a direção do padrão em cada etapa para que, ao remover o carimbo do MRE, ele possa ser puxado na direção paralela aos padrões.
   5. Remova o MRE do forno e use uma pinça para mover cuidadosamente o carimbo revestido. Vire-o virado para baixo no MRE parcialmente curado e pressione levemente. Volte a colocar o MRE e o carimbo revestido no forno a 60 °C durante mais 25 min.
   6. Depois de totalmente curado, use um bisturi para marcar o MRE na parte inferior do selo, perpendicular aos padrões.
   7. Aplique uma pequena quantidade de IPA na área cortada ao redor do carimbo.
      NOTA: O IPA deve penetrar no corte e começar a se mover por baixo do carimbo.
   8. Usando uma pinça, puxe o carimbo do MRE na direção paralela aos padrões.
2. Preparação de MRE de faixa dinâmica mais rígida (consulte a tabela para obter pesos de exemplo)
   1. Prepare 30:1 184 PDMS.
      NOTA: Faça extra porque alguns ficarão presos ao recipiente de mistura.
   2. Adicione a quantidade desejada de 527 PDMS parte A e parte B, depois partículas de ferro carbonílico e 30:1 184 PDMS em proporções baseadas no exemplo da tabela.
   3. Misture a 2500 rpm em uma batedeira por 1 min.
   4. Usando uma pipeta de transferência com a ponta cortada, adicione 5 g de MRE a uma nova placa de Petri de 35 mm e desgaseifique em um dessecador por ~ 5 min, depois deixe curar parcialmente no forno a 60 ° C por ~ 40 min.
   5. Quando restarem 5 minutos, use uma pipeta de transferência para adicionar MRE extra não curado para revestir apenas a superfície do carimbo PDMS. Coloque o carimbo revestido no dessecador para desgaseificar por 5 min.
      NOTA: Tenha cuidado para não usar muito MRE, pois se cobrir as bordas do carimbo, será mais difícil removê-lo quando o MRE estiver totalmente curado. Além disso, certifique-se de indicar a direção do padrão em cada etapa para que, ao remover o carimbo do MRE, ele possa ser puxado na direção paralela aos padrões.
   6. Retire o MRE do forno.
   7. Use uma pinça para mover cuidadosamente o carimbo revestido, vire-o para baixo no MRE parcialmente curado e pressione levemente.
   8. Coloque o MRE com o selo revestido na prateleira superior no forno a 60 °C durante a noite.
   9. Depois de totalmente curado, use um bisturi para cortar o MRE na parte inferior do carimbo, perpendicular aos padrões.
   10. Aplique IPA na área cortada ao redor do carimbo.
       NOTA: O IPA deve penetrar no corte e começar a se mover por baixo do carimbo.
   11. Usando uma pinça, puxe o carimbo do MRE na direção paralela aos padrões.

	Faixa de rigidez	Materiais	Exemplo de peso
Suave	10–80 kPa	Eco (A+B)	11,25 g (A)	11,25 g (B)
		Diluente de silicone	22,5 gramas
		Partículas de ferro	45 gramas
Aguerrida	60–120 kPa	527 PDMS (A+B)	18,75 g (UMA)	18,75 g (B)
		Partículas de ferro	37,5 gramas
		184 PDMS (Base + Cura)	14,5 g (Base)	0,5 g (Cura)

Tabela 1: Exemplos de pesos de todos os materiais para a fabricação de MREs mais macios e mais rígidos. Os pesos na tabela são para fazer um total de 90 g de material MRE. Preparar menos pode ser feito misturando todos os constituintes nas mesmas proporções que os pesos de exemplo na tabela.

4. Preparação da cultura celular

NOTA: A preparação da cultura celular envolve a seleção da linhagem celular apropriada, a preparação do meio de cultura com os nutrientes e fatores de crescimento necessários e a garantia de condições estéreis para evitar a contaminação. As células são plaqueadas em vasos de cultura e incubadas em condições ideais (geralmente 37 ° C com CO₂ controlado). Monitoramento regular, alterações do meio e passagem são realizados para manter o crescimento celular saudável.

1. Esterilize a superfície do MRE lavando-o com etanol 70% 3 vezes e deixe a terceira lavagem descansar por 20 min.
2. Lave a superfície MRE 3 vezes com solução salina estéril tamponada com fosfato (PBS) adicionando volume suficiente para cobrir completamente o prato, seguido de aspiração de todo o líquido.
3. Revestir a superfície do ERM com fibronectina (10 μg/ml) em PBS durante 1 h a 37 °C para promover a adesão celular ao dispositivo.
4. Lave a superfície MRE 3 vezes com PBS, semelhante ao passo 4.1.2.
5. Semeie os cardiomiócitos de ratos neonatais a uma densidade de 20.000 células/cm².
6. Adicione ímãs aos dispositivos temporariamente para endurecer a matriz durante a cultura de células.
   NOTA: Tenha cuidado ao colocar dispositivos com ímãs na incubadora. Os dispositivos precisam ser colocados distantes para garantir que os ímãs não interajam. Este estudo recomenda o uso de incubadoras revestidas de aço inoxidável em vez de incubadoras revestidas de cobre, pois há menos interação.

5. Coloração e imagem

1. Imagem de células fixas
   NOTA: A imagem de células fixas envolve várias etapas importantes para visualizar componentes celulares específicos. Primeiro, as células são fixadas para preservar sua estrutura. Em seguida, a membrana celular é permeabilizada para permitir a penetração da mancha, seguida por uma etapa de bloqueio para evitar a ligação não específica de anticorpos ou manchas a locais não intencionais, como outras proteínas ou detritos celulares. As células são então coradas com corantes ou anticorpos direcionados a moléculas específicas, e qualquer excesso de mancha é removido por meio da lavagem. Finalmente, as células coradas são visualizadas usando microscopia de fluorescência para análise de estruturas celulares.
   1. Lave uma vez com 1x PBS adicionando volume suficiente para cobrir completamente o prato, seguido de aspiração de todo o líquido.
   2. Fixe as células usando paraformaldeído a 4% (v / v) por 10 min.
   3. Lave três vezes com 1x PBS (semelhante ao passo 5.1.1).
   4. Adicione 0,1% de Triton X (em 1x PBS) e incube por 5 min para permeabilizar.
   5. Lave três vezes com 1x PBS (semelhante ao passo 5.1.1).
   6. Adicione NH₄Cl (50 mM em 1x PBS) e incube por 15 min para extinguir.
   7. Lave três vezes com 1x PBS (semelhante ao passo 5.1.1).
   8. Adicione tampão de bloqueio (5% BSA em 1x PBS) e incube por 1 h em temperatura ambiente (RT).
   9. Combine o anticorpo primário anti-α-Actinina primário a 1:200 em 5% de BSA (em 1x PBS).
      NOTA: Misture bem o anticorpo.
   10. Adicione a solução de anticorpo primário à amostra.
       NOTA: Adicione o suficiente para cobrir toda a amostra.
   11. Incubar durante a noite a 4 °C.
       NOTA: Considere colocar a amostra no balancim em baixa velocidade para ajudar a misturar as soluções.
   12. Lave três vezes com 1x PBS (semelhante ao passo 5.1.1).
   13. Dilua o anticorpo secundário (555 Alexa Fluor goat anti-mouse) em 1x PBS (1:2000).
       NOTA: Os anticorpos secundários são sensíveis à luz (fluoróforos). Quando não estiverem em uso direto, certifique-se de que estejam cobertos e fora da luz.
   14. Adicionar a solução de anticorpos secundários à amostra.
   15. Incubar em RT por 2 h.
   16. Lave três vezes com 1x PBS (semelhante ao passo 5.1.1).
   17. Adicione DAPI (1 μg/mL em água desionizada esterilizada) e incube por 5-10 min no escuro.
   18. Visualize as células com um microscópio vertical com uma lente de imersão de 20x.
   19. Tire 50 imagens por dispositivo.
   20. Processe as imagens usando um plug-in ImageJ chamado Direcionalidade.
       NOTA: Opções de direcionalidade: Este estudo usou n = 45 caixas, variando de 0 ° a 176 ° para evitar um efeito de envolvimento. O método empregado foi a orientação do gradiente local, e a mesa de exibição foi selecionada. A saída de direção corresponde ao ângulo vetorial médio (indicando o ângulo de alinhamento), enquanto a saída de qualidade representa o comprimento médio do vetor (indicando o grau de alinhamento).
2. Imagem de células vivas
   NOTA: A imagem de células vivas permite o rastreamento de processos celulares dinâmicos em tempo real, mantendo as células em seu estado natural e vivo. Essa técnica envolve o uso de um microscópio de fluorescência equipado com uma câmara de incubação para capturar imagens ou vídeos de alta resolução de células à medida que crescem, se dividem ou respondem a estímulos. Permitindo o estudo do comportamento e das interações celulares ao longo do tempo e fornecendo informações valiosas sobre a função e a dinâmica celular.
   1. Incubar as células com a proporção SiR-actina 1:1000 com meios de cultura durante 1 h a 37 °C.
   2. Aspirar o meio e substituí-lo por 1:2000 (SiR-actin: Media).
      NOTA: Esta diluição é para reduzir a toxicidade celular para imagens ao vivo estendidas.
   3. Colete imagens de imunofluorescência a cada 15 minutos por 5 h em um microscópio vertical com uma câmara de incubação, platina automatizada e lente de imersão de 20x.
      NOTA: Para o experimento de imagem de células vivas, o ímã foi adicionado assim que o MRE foi colocado no sistema de imagem ao vivo.

Resultados

Os elastômeros magnetoreológicos (MREs) ultramacios à base de silicone têm módulos elásticos que podem ser ajustados com precisão aplicando um campo magnético. Isso permite ajustes rápidos e bidirecionais dentro de uma faixa fisiológica, com controle preciso sobre a taxa e a magnitude das mudanças (Figura 1). A mecânica do gel foi avaliada medindo o módulo de elasticidade conforme descrito anteriormente, e o módulo de elasticidade médio foi de 36,3 ± 5,2 kPa...

Discussão

Esta técnica foi rigorosamente testada, mas a atenção cuidadosa a várias etapas é essencial para um experimento bem-sucedido.

Neste protocolo, usamos uma grade de difração comercial como molde mestre para padronização. No entanto, moldes padronizados alternativos - como silicone ou moldes micromanufaturados SU8 - também podem ser empregados para criar uma ampla variedade de padrões em diferentes tamanhos^33,35

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
555 Alexa Fluor anti-camundongo anticorpo secundário de camundongos	ThermoFisher Scientific	A-21422	https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Mouse-IgG-H-L-Cross-Adsorbed-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-21422
Lente 20x mergulhada	Zeiss	421452-9800-000	https://www.micro-shop.zeiss.com/zh/us/shop/objectives/421452-9800-000/Objective-W-Plan-Apochromat-20x-1.0-DIC-M27-75mm
Antenas de 35 mm	ThermoFisher Scientific	130180	https://www.thermofisher.com/search/results?query=130180&focusarea=Search%20All
Anticorpo primário anti-alfa actinina	Abcam	EP2528Y	https://www.abcam.com/en-us/products/primary-antibodies/alpha-actinin-actn1-antibody-ep2528y-ab81265?srsltid=AfmBOoq4HwHixqCheQwwq VVbjJ3ogKUmZxa4GtG 3SyllFzWvb5XPnwgB
Microsferas em pó de ferro carbonilo	chemicalstore.com	CIPMS	https://ironpowders.com/types-of-iron-powder/cipms-carbonyl-iron-powder/
Coloração DAPI	ThermoFisher Scientific	D1306	https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/D1306
Dessecador	Fisher Scientific	08-642-7	https://www.fishersci.com/shop/products/nalgene-transparent-polycarbonate-classic-design-desiccator/086427#?keyword=
Grade de difração	Thor Labs	GR2550-45031	https://www.thorlabs.com/thorproduct.cfm?partnumber=GR2550-45031
Gel Ecoflex parte A & B	Smooth On	Ecoflex  GEL	https://www.smooth-on.com/products/ecoflex-gel/
Limpador de plasma expandido para mesa	Sigma Aldrich	Z561657-1EA	https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/z561657
Fibronectina do plasma bovino	Sigma Aldrich	F1141	https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/sigma/f1141
Flacktek DAC150 SpeedMixer	Flacktek	DAC150	https://flacktek.com/products/small-flacktek/
ImageJ Software	NIH		https://imagej.net/ij/download.html
Álcool isopropílico	Amazon		https://www.amazon.com/Isopropyl-Alcohol-Grade-Anhydrous-gallon/dp/B01M6YK5I4/ref=sr_1_1_sspa?dib=eyJ2IjoiMSJ9.xiBzaAiE5lSJqXz ZhS_JhDh8zEHgkMzrbsyosvyBpS Jjufk90Gt79vk1jOZxq_mG3GKeN8 KT1ulag3ZuMShbWoEOCQUy6txx uGz4709PyUY5YWyeR2GS0PBNx dbmEdWvgmCYiDBLf8E2prhImZW l98MoWlVDU4lg1BtcHTTSOwdg87 5l6Ia3YLPs_0alILBXFsizwwnJodR 8D60ZggK5AHBfCfPadXgfJ-9hUE7 uIto.V3Vf62Lnprtq2u5PRO SbUFHnPOj1FvD7np7uBge6NuU& dib_tag=se& hvadid=598724400239 & hvdev=c& hvlocphy=9007460& HVn ETW=G& hvqmt=e & ; hvrand=1609157 209668794739& hvtargid=kwd-3203 62094308& hydadcr=5273_13 227703& palavras-chave=isopropilo+álcool+ amazon& MCID=9F9D3252906531 3EA89AB7766D9C244C& qid=1740 675756& sr=8-1-spons&; sp_csd=d2l kZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY& psc=1
Ímã	Magnetismo CMS	ND05578-45N	https://www.magnet4sale.com/n45-neodymium-disc-magnet-1-1-2x1-4-35-lb-pull-strong-magnet/
Microscópio vertical Nikon Eclipse 80i	Nikon	Eclipse 80i
Forno	Fisher Scientific	15-103-0503	https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-scientific-isotemp-general-purpose-heating-drying-ovens/p-4935382
Diluente de silicone	Smooth On	Diluente de silicone	https://www.smooth-on.com/products/silicone-thinner/
Mancha de Actina SiR	Citoesqueleto	CY-SC001	https://www.cytoskeleton.com/sir-actin
Sylgard 184 PDMS (Base + agente de cura)	Adesivos Ellsworth	2065622	https://www.ellsworth.com/products/by-market/consumer-products/encapsulants/silicone/dow-sylgard-184-silicone-encapsulant-clear-3.9-kg-kit/
Sylgard 527 PDMS parte A & B	Adesivos Ellsworth	1696742	https://www.ellsworth.com/products/by-market/consumer-products/encapsulants/silicone/dow-sylgard-527-silicone-dielectric-gel-clear-0.9-kg-kit/
Pipetas de transferência	Fisher Scientific	13-711-5AMMD	https://www.fishersci.com/shop/products/transfer-pipette-32/137115AMMD?searchHijack=true&searchTerm=13 -711-5AMMD& searchType= RAPID& matchedCatNo=13 -711-5AMMD
Tricloro -(1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctil) silano	Sigma Aldrich	448931	https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/aldrich/448931