Técnicas eficientes para amostragem abrangente de tecidos acessíveis em Xenopus adultos

Summary

Esta é a primeira parte de um protocolo abrangente de amostragem de Xenopus . Os tecidos amostrados são o ventrículo cardíaco, tronco arterial, lobo esquerdo do fígado, vesícula biliar, pulmão, pâncreas, baço, laringe, esôfago, estômago, intestinos, testículos, corpos adiposos, oviduto, rins pareados, plexo ciático, pele, timo e olho inteiro.

Abstract

Xenopus tem sido um organismo modelo fundamental para investigar o desenvolvimento e doenças de vertebrados, oferecendo insights profundos sobre processos celulares e função gênica. Apesar da riqueza de informações sobre o Xenopus embrionário, ainda há uma lacuna significativa nos métodos padronizados para amostragem de tecidos adultos, especialmente para abordagens modernas como a proteômica quantitativa. Este estudo apresenta um protocolo abrangente para amostragem rápida, precisa e eficiente de múltiplos tecidos em Xenopus adulto. O protocolo aborda os desafios associados às sutis diferenças anatômicas em comparação com outros anuros, garantindo a reprodutibilidade mesmo para aqueles com experiência limitada em dissecação de rãs. Este protocolo é otimizado para análises bioquímicas de alta qualidade, priorizando o frescor da amostra. Estamos facilitando a coleta rápida de até 18 tecidos em uma hora. Além disso, os métodos se aplicam a condições perfundidas e não perfundidas, proporcionando flexibilidade para uma variedade de necessidades experimentais. Este trabalho não apenas preenche uma lacuna metodológica crítica para Xenopus laevis e tropicalis , mas também serve como um recurso valioso para pesquisadores que adaptam técnicas a modelos de anfíbios semelhantes, aumentando assim o escopo e a confiabilidade de estudos biológicos e evolutivos comparativos.

Introduction

Xenopus oferece vantagens únicas sobre camundongos, peixes-zebra e outros organismos modelo para estudar doenças humanas, particularmente em contextos de desenvolvimento e evolução. Seu desenvolvimento embrionário externo e embriões grandes e facilmente manipuláveis permitem observação em tempo real e intervenções experimentais (por exemplo, enxerto de tecido, edição de genes) que são desafiadoras em camundongos, que se desenvolvem internamente e requerem procedimentos invasivos. Além disso, o coração de três câmaras e os membros tetrápodes de Xeopus fornecem uma ponte evolutiva mais direta para estudar defeitos cong....

Protocol

Todos os experimentos foram aprovados e realizados de acordo com as regras e regulamentos da Harvard Medical School IACUC (Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais IS 00001365_3). Se o protocolo de perfusão¹³ for seguido antes da amostragem, pule para a etapa 2.3.

1. Preparação (sem perfusão)

1. Certifique-se de que a instituição de pesquisa aprovou a técnica de eutanásia descrita neste protocolo.
2. Preparar uma solução de 5 g/L de MS-222 (metanossulfonato de tricaína) e 5 g/L de bicarbonato de sódio (ver Tabela de Materiais). Verifique o pH....

Results

Seguindo todas as etapas deste protocolo, o ventrículo cardíaco, o tronco arterial, o lobo do fígado esquerdo, a vesícula biliar, o pulmão, o pâncreas, o baço, a laringe, o esôfago, o estômago, os intestinos, os testículos, os corpos adiposos, o oviduto, os rins pareados, o plexo ciático, a pele, o timo e todo o olho foram excisados de forma limpa dentro de uma hora após a eutanásia (ver Figura 1, Figura 2, Figura 3.......

Discussion

O protocolo aqui apresentado foi projetado para fornecer flexibilidade para usuários em vários níveis de experiência, garantindo a coleta de tecidos essenciais de maneira oportuna e eficiente. Novos usuários são aconselhados a seguir cada etapa do protocolo, conforme descrito, para garantir a coleta sistemática de tecidos. Usuários mais experientes, no entanto, podem optar por pular certas etapas e coletar amostras apenas dos tecidos de que precisam. Por exemplo, o acesso ao baço, locali.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x PBS	Corning	21-040-CV
5x Lupa com Luz LED e Suporte	amazon.com	B08QJ6J8P1	luz não deve produzir calor
Pipetas de Transferência Descartáveis	VWR	414004-036
Pinça de Dissecação de Ponta Fina	Fisher Scientific	08-875
Tesoura de dissecação pione afiado, reto 6.5"	VWR	76457-374
Bandeja de Dissecção	Fisher Scientific	14-370-284	folhas de isopor são uma alternativa aceitável
Recipiente de eutanásia	US Plastic	Item  2860	recipientes opacos alternativos aceitáveis
Tampa de recipiente de eutanásia	US Plastic	Item  Tesoura de Iridectomia 3047
6"	VWR	470018-938	tesouras de íris são uma alternativa aceitável
MS-222: Síncaína (anteriormente tricaine)	Pentair AES	TRS1
5.5 in., Aço Inoxidável	Fisher Scientific	S08100
Bicarbonato de Sódio, Pó, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Pinça de amostra, Pinos em T serrilhados	VWR	82027-442
para dissecar	Fisher Scinetific	S99385