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Administração de Δ 9-tetrahidrocanabinol (THC) em camundongos adolescentes e adultos

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DOI:

10.3791/68358

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1 de agosto de 2025

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1Department of Anatomy and Neurobiology, University of California, Irvine, 2Department of Biological Chemistry, University of California, Irvine, 3Department of Pharmaceutical Sciences, University of California, Irvine

Neste artigo

Resumo

Δ 9-tetrahidrocanabinol (THC) é o constituinte intoxicante da cannabis e uma substância controlada nos Estados Unidos. Este artigo descreve os procedimentos padrão para obter, armazenar e administrar THC a camundongos em conformidade com os regulamentos legais atuais e apresenta brevemente um método para avaliar os efeitos farmacodinâmicos básicos do THC em roedores.

Resumo

O Δ 9-tetrahidrocanabinol (THC) é responsável pelos efeitos intoxicantes (psicotrópicos) da cannabis e dos produtos derivados da cannabis atualmente disponíveis nos mercados legal e ilegal. Os efeitos psicotrópicos do THC são produzidos através da ativação dos receptores canabinóides CB1 no cérebro, que normalmente são ativados por substâncias canabinóides endógenas (endocanabinóides). Fora do cérebro, o THC contribui para a regulação de uma ampla gama de processos fisiológicos, ativando os receptores CB1 e CB2. As funções fisiológicas desempenhadas pelas substâncias endocanabinóides e pelos receptores canabinóides - conhecidos coletivamente como sistema endocanabinóide - mudam consideravelmente ao longo da vida, sendo a adolescência um período de maior sensibilidade às contribuições desse complexo de sinalização. Este artigo descreve um protocolo para preparar o THC para administração parenteral e avaliar seus efeitos farmacodinâmicos agudos em camundongos de ambos os sexos em dois estágios de desenvolvimento: adolescência e idade adulta jovem. Concentrando-se em três doses amplamente utilizadas na literatura (1, 5 e 10 mg/kg) e na via intraperitoneal, são ilustrados os efeitos bem conhecidos do THC-indução de catalepsia, inibição da atividade locomotora e supressão da nocicepção. Além disso, dado o status do THC como substância controlada nos Estados Unidos, os procedimentos para obtê-lo e armazená-lo em conformidade com a legislação atual são brevemente delineados.

Introdução

A prevalência do uso de cannabis na população adulta dos Estados Unidos aumentou continuamente nas últimas décadas e permaneceu alta em 2023. Entre os adultos de 19 a 30 anos, aproximadamente 42% relataram usar cannabis no último ano, 29% no último mês e 10% relataram uso diário ou quase diário (20 ou mais vezes nos últimos 30 dias)1. Para adultos de 35 a 50 anos, os números são de 29%, 19% e 8%, respectivamente. Embora essas estimativas não sejam estatisticamente diferentes das obtidas em 2022, elas indicam aumentos nos últimos 5 e 10 anos para ambos os grupos demográficos1. É importante ressaltar que as evidências atuais sugerem que aproximadamente 9% das pessoas que usam cannabis desenvolvem tolerância e dependência da droga - uma condição conhecida como transtorno por uso de cannabis (SUD)2 e um potencial problema de saúde3.

Tal como acontece com outras drogas psicoativas, o uso de cannabis geralmente começa no início da adolescência e aumenta progressivamente ao longo da adolescência. Em 2023, 8% dos alunos da8ª série nos Estados Unidos, 18% dos alunos da10ª série e 29% dos alunos da12ª série relataram ter usado a droga pelo menos uma vez4. Embora relativamente estáveis nos últimos anos, mesmo diante de uma diminuição da percepção de risco 5,6, esses números permanecem muito altos. Além de seu uso não médico generalizado, a cannabis mostrou potencial terapêutico em uma variedade de condições médicas 7,8. Uma forma sintética de seu constituinte intoxicante (psicotrópico), o Δ 9-tetrahidrocanabinol (THC) (Figura 1), tem sido usada há mais de 40 anos como medicamento prescrito para tratar náuseas e perda de apetite em pacientes com HIV e câncer submetidos à quimioterapia 9,10. Tanto o THC quanto seu análogo canabidiol (CBD) (Figura 1), que não é psicotrópico, têm sido implicados no tratamento da dor, inflamação e vários distúrbios neurológicos11,12. Portanto, a rápida disseminação de produtos derivados da cannabis medicinal - por exemplo, na epilepsia infantil e no autismo - também está introduzindo novos grupos de jovens à droga. Esses desenvolvimentos são especialmente preocupantes em um contexto social em que as mudanças legislativas e a ampliação da aceitação alimentam interesses financeiros que podem se sobrepor às preocupações de saúde e segurança pública13.

A cannabis contendo THC ('maconha') é consumida em várias formas, incluindo fumar, vaporizar, comestíveis, tinturas e óleos. Uma vez ingerido, o THC se distribui por todo o corpo e entra no cérebro, onde produz euforia, relaxamento, percepção sensorial alterada e aumento do apetite, embora também possa causar ansiedade e paranóia em alguns indivíduos14,15. O THC interage com o sistema endocanabinoide (ECB) ativando dois tipos de receptores canabinoides (CB) localizados dentro e fora do cérebro15,16. No cérebro, onde os receptores CB1 são mais abundantes, sua ativação afeta o humor, a percepção da dor, o apetite e a cognição, entre outras funções. O THC também ativa os receptores CB1 e CB2 em órgãos periféricos, influenciando o metabolismo energético sistêmico - incluindo ingestão, absorção e armazenamento de nutrientes - bem como o início da dor, inflamação e imunidade17,18.

O THC exerce efeitos agudos e persistentes, e pesquisas pré-clínicas e clínicas adicionais sobre as consequências a longo prazo do uso de cannabis ainda são necessárias. Ênfase especial deve ser dada às potenciais reações adversas a altas doses de THC, considerando que a concentração média de THC na cannabis vendida nos Estados Unidos aumentou nas últimas décadas de 8,9% em 2008 para 17,1% em 201719 e ainda maior nos últimos anos. 'Produtos de cannabis de alta potência' (produtos contendo altas concentrações de THC) são comuns em muitos mercados legais nos Estados Unidos, onde o teor médio de THC na flor de cannabis é de 20-35%, com alguns produtos extrativos atingindo até 90% de THC. Nessas altas dosagens, o THC pode ter efeitos qualitativamente diferentes daqueles produzidos pela tradicional "cannabis de baixa potência" usada nas décadas de 1970 e 1980, que continha 6% de THC ou menos20. Assim, entender a farmacologia dos produtos de cannabis de alta potência é fundamental para informar estratégias preventivas e orientar a política regulatória e fiscal. Além disso, entender como fatores como idade, genética e condições pré-existentes influenciam as respostas individuais ao THC pode ajudar a adaptar a prevenção e o tratamento a populações específicas. Em particular, as consequências do consumo de cannabis por adolescentes e mulheres grávidas ou lactantes devem ser investigadas mais aprofundadamente, uma vez que a exposição aos canabinóides durante os períodos pré-natal/perinatal e adolescente, em que o sistema BCE desempenha um papel fundamental no desenvolvimento neurológico, pode conduzir a consequências negativas persistentes21. Além disso, mais pesquisas são necessárias para entender como o THC interage com outros medicamentos ou substâncias. Dados abrangentes sobre a segurança e eficácia do THC podem informar decisões regulatórias e políticas de saúde pública, garantindo o uso seguro em contextos médicos e não médicos.

Aqui, descrevemos os procedimentos padrão para obter, armazenar e administrar THC em um ambiente de laboratório de acordo com a legislação atual dos Estados Unidos (a Lei de Substâncias Controladas de 1971). Com foco em três doses de THC amplamente utilizadas na literatura científica (1, 5 e 10 mg/kg)22 e na via de administração intraperitoneal (i.p.), três efeitos clássicos sobre o THC foram ilustrados: indução de catalepsia, inibição da atividade locomotora e antinocicepção. Este protocolo também pode ser usado após várias injeções de THC para estudar as consequências do uso crônico de THC, o que leva à tolerância e a uma série de consequências para a saúde mental que normalmente não são observadas com a administração aguda em humanos.

Protocolo

Todos os procedimentos foram aprovados pela IACUC da Universidade da Califórnia, Irvine, e foram realizados em estrita conformidade com as diretrizes do National Institutes of Health (NIH) para o cuidado e uso de animais experimentais.

1. Procedimentos para obtenção e armazenamento de THC

NOTA: Nos Estados Unidos, o uso de THC em um ambiente de pesquisa acadêmica requer o cumprimento de várias etapas exigidas pelo status legal da cannabis. Tanto a cannabis quanto o THC derivado da cannabis são classificados como substâncias controladas da Tabela I. Por esse motivo, antes que a cannabis ou o THC possam ser comprados, os pesquisadores devem obter uma licença da Drug Enforcement Administration (DEA). Uma visão geral desse processo, que pode levar até 6 meses ou mais, é fornecida abaixo.

  1. Determinando o escopo da pesquisa: Defina o propósito e os objetivos do processo de pesquisa e especifique por que o THC é necessário. Desenvolva um protocolo de pesquisa detalhando as quantidades de THC necessárias, sua fonte comercial e como será manuseado e armazenado. Inclua o máximo de detalhes relevantes possível.
  2. Recebendo Aprovação Regulatória Institucional: Envie a proposta de pesquisa ao Comitê de Cuidados e Uso de Animais (IACUC) da instituição local (para trabalho pré-clínico) ou ao Conselho de Revisão Institucional (IRB) (para trabalho clínico). Esta etapa de revisão protege os direitos dos sujeitos da pesquisa e garante que o estudo esteja em conformidade com os padrões éticos.
  3. Conformidade com os regulamentos estaduais: Esteja atento a quaisquer regulamentos específicos do estado sobre a pesquisa de cannabis, pois eles podem variar significativamente. Por exemplo, na Califórnia, obtenha a aprovação do Painel Consultivo de Pesquisa da Califórnia (RAPC)23.
  4. Obtenção de THC: Compre cannabis e THC de cultivadores ou fabricantes licenciados para esse fim.
    NOTA: Uma lista de cultivadores aprovados está disponível no site da DEA. O Instituto Nacional de Abuso de Drogas (NIDA) fornece THC por meio do Programa de Fornecimento de Drogas do NIDA24. Para se candidatar a este programa, devem ser fornecidas informações sobre uma instituição, um protocolo de pesquisa detalhado e documentação de regulamentos institucionais, como cartas de aprovação IACUC ou IRB. O preenchimento do Formulário 222 da DEA, que é o formulário de página única especificamente designado para cada número de registro da DEA, é necessário para a compra ou transferência de substâncias controladas da Tabela 1.
  5. Recebendo e armazenando THC
    1. Armazene o THC em um cofre ou cofre trancado com segurança que siga um projeto aprovado pela DEA. O acesso à área de pesquisa deve ser controlado (por exemplo, as portas do prédio e/ou laboratório devem estar trancadas). Somente pessoal autorizado deve ter acesso ao THC.
    2. Prepare e defina uma lista de indivíduos que têm permissão para acessá-lo e mantenha a lista atualizada. Rotule claramente os recipientes de THC com nome, concentração, data de recebimento e avisos de perigo.
    3. Siga os procedimentos de descarte estabelecidos, que exigem documentação específica e adesão aos regulamentos federais e estaduais. Mantenha o THC a -20 °C ou menos.
  6. Gerenciamento de estoque:
    1. Implemente um sistema de inventário robusto para rastrear a quantidade, o uso e a localização do THC. Preparar um Fichário de Substâncias Controladas, que inclui uma licença do Anexo 1, informações de pessoal autorizado, registros de todos os recebimentos, descartes e qualquer uso de substância (Figura 2).
    2. Realize auditorias regulares das práticas de inventário e armazenamento, preenchendo o registro de inventário semestral para garantir a conformidade com os requisitos regulamentares. Verifique os registros de acesso e os registros de inventário periodicamente.
  7. Treinamento e protocolos: O treinamento deve ser fornecido para todo o pessoal que lida com THC. Protocolos claros devem ser estabelecidos para armazenamento, manuseio e descarte do medicamento.
    NOTA: Ao implementar essas práticas, os laboratórios acadêmicos podem garantir que cumpram os requisitos legais e mantenham um ambiente de pesquisa seguro.

2. Procedimentos para administrar THC a camundongos por injeção ip

NOTA: Ao manusear o THC, é essencial controlar a temperatura e proteger o composto da luz para preservar sua estabilidade. O THC é sensível ao calor e deve ser armazenado a -20 °C ou abaixo para armazenamento a longo prazo. Para armazenamento de curto prazo, o THC pode ser mantido em temperatura ambiente ou refrigerado a 4 °C por várias horas. O THC também é sensível à luz ultravioleta (UV) e visível, que pode causar degradação por oxidação. Para evitar isso, o THC deve ser armazenado em recipientes de vidro âmbar herméticos ou recipientes transparentes embrulhados em papel alumínio e armazenados no escuro. Recomenda-se rotular todas as amostras com datas e condições de armazenamento para garantir o rastreamento e a estabilidade adequados.

  1. Materiais
    1. Prepare todas as soluções usando água ultrapura e reagentes de grau analítico. Obtenha THC da Cayman Chemical (Ann Arbor, MI) ou RTI International (Research Triangle Park, NC) ou através do Programa de Fornecimento de Medicamentos do NIDA24.
  2. Equipamentos e suprimentos
    1. Certifique-se de que os itens listados na Tabela de Materiais estejam prontos antes de iniciar o procedimento.
      NOTA: É essencial usar frascos de vidro (8 mL ou similar) e recipientes ao trabalhar com THC. Os plásticos podem reagir ou absorver moléculas hidrofóbicas, como o THC, o que pode levar à perda de amostras ou concentrações inconsistentes. O vidro é quimicamente estável e não reativo, o que ajuda a evitar interações indesejadas com moléculas hidrofóbicas.
  3. Procedimentos para administração de THC em camundongos
    1. Remova o recipiente de THC do armário de segurança no freezer.
    2. Mantendo o recipiente no gelo, retire um volume apropriado de THC usando uma pipeta e adicione-o cuidadosamente ao fundo de um frasco de vidro de 8 mL. Calcular o volume com base na dose (mg/kg) e no peso corporal dos ratinhos (g).
    3. Mova o frasco para uma capela de exaustão química e evapore suavemente o solvente até a secura com um fluxo suave de gás nitrogênio. Tome cuidado para não espirrar a solução contendo THC nas laterais do frasco, pois isso resultará em perdas graves. Este processo leva aproximadamente 5-10 min.
    4. Registre no Uso de Substância Controlada I Registre no Aglutinante de Substâncias Controladas quanto THC foi retirado do frasco que está sendo usado no momento.
    5. Quando o solvente estiver completamente seco, adicione um volume apropriado de Tween-80. Este é o volume de Tween-80 necessário para obter uma concentração final de 5% de Tween-80 em solução salina, conforme mostrado na etapa 2.3.8.
    6. Aqueça o frasco para injetáveis num copo contendo água quente a uma temperatura igual ou inferior a 60 °C. Vortex o frasco para dissolver completamente o THC e repita conforme necessário.
    7. Adicione gradualmente solução salina estéril em pequenos incrementos: por exemplo, 200 μL, 300 μL, 500 μL e 1 mL. Vórtice e aqueça.
    8. Repita as etapas 2.3.6 e 2.3.7 até que o volume total de solução salina necessário tenha sido adicionado para fazer uma solução final de THC em solução salina Tween-80 a 5% e 95% e a solução esteja totalmente dissolvida.
    9. (OPCIONAL) Sonicar o frasco para injetáveis num banho-maria ultrassónico regulado para aproximadamente 100% da potência a 40 kHz e 37 °C durante 5 min. Verificar se a solução está límpida e isenta de qualquer substância não dissolvida. A cor do líquido pode variar dependendo do veículo utilizado.
    10. Pese o mouse e determine a quantidade apropriada para injetar. O volume de injeção deve ser de 10 ml/kg por ratinho.
    11. Prossiga com as injeções intraperitoneais (i.p.). Certifique-se de que as soluções de THC sejam preparadas na hora no dia do uso.

3. Procedimentos para avaliar os efeitos farmacológicos do THC

  1. Animais
    1. Use camundongos de ambos os sexos para este estudo.
      NOTA: Neste estudo, foram utilizados camundongos C57BL/6J adolescentes (dia pós-natal, PND, 30-35) e adultos (PND 70-75) de ambos os sexos do Jackson Laboratories (Farmington, CT).
      O procedimento é aplicável a outras linhagens de camundongos.
    2. Alojar os ratos em gaiolas ventiladas (4-5 por gaiola) com comida e água disponíveis ad libitum. Atribua aleatoriamente animais pareados por idade e peso aos grupos de tratamento e permita que eles se aclimatem por pelo menos 1 semana antes dos experimentos.
    3. Mantenha os quartos de alojamento em um ciclo de 12 horas de luz / 12 horas de escuridão (luzes acesas às 6h30) com temperatura constante (20 ± 2 ° C) e umidade relativa (55% -60%).
  2. Grupos experimentais
    1. Divida cada grupo de idade e sexo em quatro grupos de tratamento: um grupo de controle de veículo e três grupos de tratamento de THC para doses de 1, 5 e 10 mg/kg.
  3. Administração de medicamentos
    1. Prepare o THC na hora, conforme descrito acima, em um veículo de 95% de solução salina com 5% de Tween-80 e administrado por injeção ip.
  4. Teste comportamental
    NOTA: Neste exemplo, cada animal foi submetido aos testes descritos abaixo para rastrear os efeitos do THC22. Os três testes comportamentais foram realizados sucessivamente na mesma coorte de animais. A ordem dos procedimentos foi: locomoção (30 min pós-THC), catalepsia (45 min pós-THC) e imersão na cauda (60, 180 e 300 min pós-THC) (Figura 3). Para os experimentos com mulheres adolescentes, reutilizamos o mesmo grupo tratado com veículo e, em seguida, administramos 1 mg / kg ou 10 mg / kg de THC à mesma coorte para realizar os testes de catalepsia e imersão na cauda. Essa abordagem permitiu alcançar poder estatístico suficiente, minimizando o número de animais utilizados, de acordo com as diretrizes éticas. O comportamento foi gravado usando uma filmadora e os arquivos de filme foram analisados usando um software de rastreamento comportamental.
    1. Teste de catalepsia
      NOTA: A catalepsia em camundongos é um estado (pato)fisiológico caracterizado por falta de movimento voluntário, rigidez da postura e resistência a mudanças induzidas externamente na posição do corpo. É considerado um dos quatro efeitos padrão do THC, juntamente com a inibição locomotora, antinocicepção e diminuição da temperatura corporal. Neste exemplo, o comportamento cataléptico foi avaliado com base nos procedimentos estabelecidos22, conforme detalhado a seguir:
      1. Configuração: Prepare uma barra horizontal (7 cm de comprimento) elevada 4 cm acima da superfície de uma bancada de laboratório limpa com iluminação ambiente normal (160 lux). Coloque um cronômetro eletrônico próximo que esteja pronto para uso.
      2. Transfira o mouse das instalações de alojamento para o laboratório de testes e aclimate-o dentro da gaiola por 60 minutos antes do teste. Use um jaleco limpo e sem perfume.
      3. Usando luvas de látex limpas, remova suavemente o mouse de sua gaiola, administre com segurança uma quantidade adequada de THC ou veículo e coloque-o de volta na gaiola.
      4. Em um momento apropriado após a injeção de THC (45 min neste caso), remova o mouse da gaiola e coloque suavemente as patas dianteiras na barra horizontal.
      5. Registre o tempo de imobilidade usando o temporizador eletrônico.
        NOTA: O tempo de imobilidade é definido como o tempo decorrido desde o momento em que o mouse é colocado na barra até o momento em que ele remove uma ou ambas as patas.
      6. Pare o cronômetro quando o mouse remover uma ou ambas as patas da barra ou quando o tempo limite de 10 s for atingido.
      7. Repita o teste duas vezes para cada camundongo, com um intervalo de descanso de 2 minutos entre as tentativas.
      8. Use a média dos dois tempos de imobilidade para a análise final dos dados.
      9. Medida de resultado: Use o tempo de imobilidade (em segundos) como um indicador de catalepsia.
    2. Teste de campo aberto (atividade locomotora em um novo ambiente)
      NOTA: A hipolocomoção induzida por THC é avaliada usando o teste de campo aberto e seguindo um protocolo estabelecido25.
      1. Configuração: Use uma arena de campo aberto equipada com equipamento de rastreamento de vídeo para este teste. Certifique-se de que a arena de campo aberto esteja limpa e livre de sinais de odor de experimentos anteriores.
        NOTA: A limpeza eficaz pode ser feita usando produtos disponíveis comercialmente descritos na Tabela de Materiais.
      2. Transfira o mouse das instalações de alojamento para o laboratório de testes e aclimate-o dentro de sua gaiola por 60 minutos antes do teste. Certifique-se de que a sala de testes tenha iluminação de baixa intensidade (10 lux)25. Use um jaleco limpo e não use perfume.
      3. Usando luvas limpas, remova suavemente o mouse de sua gaiola, administre com segurança uma quantidade adequada de THC ou veículo e coloque o mouse de volta na gaiola.
      4. Em um momento apropriado após a injeção de THC (30 min neste caso), coloque o mouse suavemente no centro da arena, tomando cuidado para minimizar o estresse de manuseio.
      5. Grave sessões de 10 minutos usando uma filmadora e um software de rastreamento comportamental.
      6. Após o teste, retorne o mouse à sua gaiola inicial e limpe bem a arena com a solução de limpeza descrita acima.
      7. Medida de resultado: Calcule a distância total percorrida, medida em metros, como parâmetro primário para quantificar a atividade locomotora.
    3. Teste de imersão da cauda (limiares nociceptivos, também conhecido como teste de retirada da cauda da água quente)
      NOTA: A nocicepção é avaliada pelo teste de imersão da cauda, conforme descrito anteriormente26. Este teste é usado para avaliar a eficácia de analgésicos potenciais e para avaliar a tolerância aos seus efeitos. Durante o teste, o calor é aplicado à cauda de um camundongo como um estímulo doloroso e o tempo para retirar a cauda da fonte de calor é medido.
      1. Configuração: Prepare um banho-maria mantido a 54 °C sob iluminação ambiente normal (160 lux). Coloque um cronômetro eletrônico próximo que esteja pronto para uso.
      2. Prenda suavemente o mouse usando um bolso de tecido macio feito com almofadas de treinamento para animais de estimação (Glad), garantindo que a cauda permaneça acessível.
      3. Mergulhe o terço distal da cauda no banho-maria e inicie o cronômetro simultaneamente.
      4. Registre a latência para a retirada da cauda (em segundos), definida como o movimento reflexivo da cauda.
      5. Defina um tempo limite máximo de 10 s para evitar danos e desconforto nos tecidos.
      6. Repita a medição duas vezes para cada camundongo em cada ponto de tempo (neste caso, 60, 180 e 300 minutos após a injeção de THC), com um intervalo de 5 minutos entre as tentativas.
      7. Calcule a média das duas medidas de latência para análise de dados.
      8. Medida de resultado: Calcule a latência para a retirada da cauda, medida em segundos, como a variável de resultado primário para avaliar os efeitos antinociceptivos.
  5. Análises estatísticas
    1. Expresse os resultados como meios ± SEM. Determine a significância usando análise de variância (ANOVA) de duas vias seguida pelo teste de comparações múltiplas de Šídák ou ANOVA de três vias seguida pelo teste de comparações múltiplas de Tukey. Considere as diferenças significativas se P < 0,05.
      NOTA: O GraphPad Prism versão 10.4 foi usado para realizar a análise.

Resultados

Para ilustrar o protocolo descrito acima, apresentamos resultados sobre os efeitos farmacológicos agudos do THC. Quatro grupos de camundongos (8 por grupo), adolescente macho, macho adulto, fêmea adolescente e fêmea adulta, receberam três doses de THC - 1, 5 e 10 mg / kg - junto com o veículo como controle. Em seguida, foram avaliadas a catalepsia, a atividade locomotora e a nocicepção, com foco na dose-dependência dos efeitos e diferenças entre os sexos e as idades.

Primeiro, para os efeitos catalépticos agudos, o THC produziu catalepsia dose-dependente em camundongos machos adolescentes e adultos (Figura 4A e Tabela 1). A duração da resposta foi dose-dependente (P<0,0001, ANOVA de duas vias), com 5 e 10 mg/kg produzindo efeitos estatisticamente significativos em ambas as faixas etárias, em comparação com os controles veiculares em cada grupo (P < 0,0001 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák). Na dose de 10 mg/kg, o THC produziu catalepsia tanto em camundongos fêmeas adolescentes quanto em fêmeas adultas (Figura 4B e Tabela 2), com fêmeas adultas mostrando uma resposta menos acentuada em comparação com fêmeas adolescentes (P < 0,0001 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák). Os conjuntos de dados foram analisados para determinar se o sexo afetava a catalepsia induzida por THC. Uma resposta dimórfica sexual modesta, mas significativa, foi observada em adolescentes do sexo feminino em comparação com o sexo masculino (P = 0,0204) (Figura 4C e Tabela 3). Um efeito consideravelmente mais forte do sexo foi encontrado em adultos do sexo feminino, que eram significativamente menos sensíveis aos efeitos catalépticos do THC em comparação com camundongos adultos machos (P < 0,0001) (Figura 4D e Tabela 4).

Em segundo lugar, para os efeitos locomotores agudos, o THC reduziu a atividade locomotora em camundongos machos (Figura 5A e Tabela 5). Esse efeito foi dependente da dose de THC e da idade do animal (P < 0,0001 e P = 0,0042, respectivamente), com camundongos adolescentes sendo mais sensíveis ao efeito do THC em comparação com camundongos adultos. Testes de comparação múltipla post-hoc indicaram que, com uma dose de 5 mg / kg de THC, os camundongos adolescentes se moveram significativamente menos do que os camundongos adultos (P < 0,0001). O THC reduziu a atividade locomotora também em camundongos fêmeas (Figura 5B e Tabela 6). A ANOVA de duas vias mostrou efeitos significativos da dose e da idade também em camundongos fêmeas (P < 0,0001 e P = 0,0103, respectivamente) (Figura 5B e Tabela 6). No entanto, os testes de comparação múltipla post-hoc não revelaram diferenças estatisticamente significativas entre camundongos fêmeas adolescentes e adultas em doses de 0 ou 10 mg / kg de THC (Figura 5B). Esses conjuntos de dados foram analisados posteriormente para determinar se o sexo afetava a hipolocomoção induzida pelo THC. Não foi observado dimorfismo sexual em camundongos adolescentes (Figura 5C e Tabela 7); no entanto, camundongos adultos exibiram dimorfismo sexual estatisticamente significativo (P = 0,0046), com fêmeas adultas apresentando movimento significativamente maior em comparação com machos adultos. No entanto, os testes de comparação múltipla post-hoc não revelaram diferenças estatisticamente significativas entre os sexos em doses de 0 ou 10 mg / kg de THC (Figura 5D e Tabela 8).

Em terceiro lugar, para os efeitos antinociceptivos agudos, o THC reduziu a nocicepção de imersão da cauda em camundongos machos (adolescentes, Figura 6A e Tabela 9; adultos, Figura 6C e Tabela 11). Em adolescentes do sexo masculino, o THC produziu efeitos antinociceptivos significativos a 5 e 10 mg / kg, testados aos 60, 180 e 360 minutos após a administração (P < 0,0001 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák, em relação à latência do movimento da cauda de camundongos de controle de veículos) (Figura 6A e Tabela 9). A ANOVA bidirecional confirmou os fortes efeitos da dose de THC na latência do movimento da cauda (P < 0,0001) e mostrou uma diminuição dependente do tempo nos efeitos antinociceptivos, especialmente na dose mais alta (P = 0,0133) (Figura 6A e Tabela 9). Um efeito dependente da dose de THC semelhante, mas não o efeito do tempo, foi observado em camundongos adolescentes fêmeas (P < 0,0001 e P = 0,9923, respectivamente) (Figura 6B e Tabela 10). Em homens adultos, o THC produziu efeitos antinociceptivos significativos apenas na dose mais alta (10 mg / kg) e no primeiro ponto de tempo (60 min após a administração) (P < 0,0001 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák, em comparação com os controles do veículo) (Figura 6C e Tabela 11). A ANOVA de duas vias mostrou um efeito significativo da dose e do tempo (dose, P < 0,0001; tempo, P = 0,0007) (Tabela 11). Em mulheres adultas, um efeito antinociceptivo significativo foi observado apenas na dose mais alta (10 mg / kg) e no primeiro momento (60 min após a administração) (P < 0,0012 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák, em relação aos controles do veículo) (Figura 6D e Tabela 12). Em relação aos efeitos do sexo e da idade na antinocicepção induzida por THC, a ANOVA bidirecional revelou que os efeitos do THC na latência do movimento da cauda foram afetados pela idade e pelo sexo (Figura 6E, F, Tabela 13 e Tabela14). O efeito mais forte foi observado em adolescentes do sexo masculino 60 minutos após a administração de THC, embora todos os quatro grupos de camundongos tenham apresentado antinocicepção induzida por THC significativa quando comparados aos controles de veículos apropriados neste momento (Figura 6E). Curiosamente, um efeito significativo do sexo foi observado em camundongos adolescentes, mas não adultos, no ponto de tempo 60 min pós-THC (adolescentes, P = 0,0083; adultos, P = 0,9919 pelo teste de comparações múltiplas de Šídák) (Figura 6E e Tabela 13). No ponto de tempo pós-THC de 300 minutos, efeitos antinociceptivos significativos foram encontrados apenas em camundongos adolescentes, machos e fêmeas, mas não em camundongos adultos (Figura 6F e Tabela 14). A ANOVA de três fatores testou as três variáveis, dose, idade e sexo, simultaneamente e revelou efeitos significativos tanto do tempo quanto da dose (P = 0,0007 e P < 0,0001, respectivamente) e da interação significativa entre tempo e dose (P = 0,0022) (Tabela 15).

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Figura 1: Estruturas químicas de fitocanabinóides, THC e CBD, e endocanabinóides, anandamida e 2-AG. O delta-9-tetrahidrocanabinol (THC) é produzido na inflorescência da planta feminina de cannabis e é responsável por seus efeitos psicotrópicos; O THC atua ligando-se aos receptores CB1 e CB2 acoplados à proteína G no cérebro e em outros tecidos do corpo. O canabidiol (CBD) é um canabinóide não psicotrópico com propriedades antiepilépticas e possivelmente antipsicóticas e anti-inflamatórias. Dois principais ativadores endógenos dos receptores CB, anandamida e 2-araquidonoil-sn-glicerol (2-AG), são mensageiros derivados de lipídios no cérebro e nos tecidos periféricos, produzidos sob demanda, e estão envolvidos em vários processos de sinalização de curto alcance, como o ajuste fino da plasticidade sináptica no SNC. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 2: Exemplo de um registro de uso de substância controlada I. Qualquer uso de THC deve ser registrado em um Registro de Uso de Substância Controlada I ad-hoc, que é mantido no Aglutinante de Substâncias Controladas armazenado em um armário trancado ou em um espaço de escritório seguro. Este formulário deve incluir o nome e a afiliação do Investigador Principal que deve estar registrado para uma licença do Anexo 1, informações sobre o medicamento programado e o lote exato, número do protocolo, pessoa autorizada que está usando o medicamento com a quantidade e o saldo para cada uso. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 3: Esquema mostrando a ordem dos experimentos de teste comportamental. A ordem dos procedimentos foi: locomoção (30 min pós-THC), catalepsia (45 min pós-THC) e imersão na cauda (60, 180 e 300 min pós-THC). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 4: Catalepsia aguda induzida por THC em camundongos. O THC produz catalepsia em camundongos adolescentes e adultos (A) machos e (B) fêmeas. A resposta foi avaliada usando o teste da barra após injeção i.p. de THC na dose indicada. O mesmo conjunto de dados foi analisado para os efeitos do sexo na catalepsia induzida por THC em (C) camundongos adolescentes e (D) machos e fêmeas adultos. Os resultados são expressos como médias ± EPM. A significância foi determinada por meio de ANOVA de duas vias seguida pelo teste de comparações múltiplas de Šídák. As diferenças foram consideradas significativas se o P < 0,05. P < 0,0001 em comparação com o controle do veículo, ##P < 0,01 e ####P < 0,0001 em comparação com o grupo adolescente de 10 mg/kg no painel B ou grupo masculino de 10 mg/kg nos painéis C e D. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 5: Hipolocomoção aguda induzida por THC em camundongos. O THC reduz a atividade locomotora espontânea em camundongos adolescentes e adultos (A) machos e (B) fêmeas. A resposta foi avaliada usando o teste de campo aberto após injeção i.p. de THC na dose indicada. O mesmo conjunto de dados foi analisado para os efeitos do sexo na hipolocomoção induzida por THC em (C) camundongos adolescentes e (D) adultos machos e fêmeas. Os resultados são expressos como médias ± EPM. A significância foi determinada por meio de ANOVA de duas vias seguida pelo teste de comparações múltiplas de Šídák. As diferenças foram consideradas significativas se o P < 0,05. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 e ****P < 0,0001 em comparação com o controle do veículo, e ####P < 0,0001 em comparação com o grupo adolescente de 5 mg/kg no painel A. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Figura 6: Analgesia aguda induzida por THC em camundongos. Os efeitos antinociceptivos agudos do THC foram medidos usando o teste de imersão da cauda em (A) camundongos adolescentes do sexo masculino, (B) adolescentes do sexo feminino, (C) adultos do sexo masculino e (D) fêmeas adultas após 60, 180 ou 300 minutos da injeção i.p. de THC na dose indicada. O mesmo conjunto de dados foi analisado para os efeitos da idade e sexo na antinocicepção induzida por THC após (E) 60 min ou (F) 300 min da administração de THC. Os resultados são expressos como médias ± EPM. A significância foi determinada por meio de ANOVA de duas vias seguida pelo teste de comparações múltiplas de Šídák. As diferenças foram consideradas significativas se o P < 0,05. *P < 0,05, ***P < 0,001 e ****P < 0,0001 em comparação com o controle do veículo, e ##P < 0,01 entre o grupo de 10 mg/kg de adolescente masculino e adolescente feminino, e @P < 0,05 e @@P < 0,01 em comparação com o grupo de 10 mg/kg de homem adulto e mulher adulta, respectivamente. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Tabela 1: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na produção de catalepsia em camundongos machos adolescentes e adultos (relacionado à Figura 4A) (n = 7-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 2: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na produção de catalepsia em camundongos fêmeas adolescentes e adultas (relacionado à Figura 4B) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 3: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na produção de catalepsia em camundongos adolescentes machos e fêmeas (relacionado à Figura 4C) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 4: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na produção de catalepsia em camundongos machos e fêmeas adultos (relacionado à Figura 4D) (n = 7-10 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 5: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na locomoção em camundongos machos adolescentes e adultos (relacionado à Figura 5A) (n = 7-9 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 6: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na locomoção em camundongos fêmeas adolescentes e adultas (relacionado à Figura 5B) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 7: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na locomoção em camundongos adolescentes machos e fêmeas (relacionado à Figura 5C) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 8: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos agudos do THC na locomoção em camundongos machos e fêmeas adultos (relacionado à Figura 5D) (n = 7-9 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 9: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos machos adolescentes (relacionado à Figura 6A) (n = 7-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 10: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos adolescentes (relacionado à Figura 6B) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 11: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos machos adultos (relacionado à Figura 6C) (n = 6-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 12: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos fêmeas adultas (relacionado à Figura 6D) (n = 7-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 13: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos adolescentes e adultos, machos e fêmeas, testados após 60 min da injeção de 10 mg / kg de THC (relacionado à Figura 6E) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 14: Análise ANOVA bidirecional sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos adolescentes e adultos, machos e fêmeas, testados após 300 min da injeção de 10 mg / kg de THC (relacionado à Figura 6F) (n = 5-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Tabela 15: Análise ANOVA de três vias sobre os efeitos analgésicos agudos do THC em camundongos adolescentes e adultos, machos e fêmeas, testados após 60, 180 e 300 min da injeção de 10 mg/kg de THC (relacionado às Figuras 6E e 6F) (n = 7-8 por grupo). Clique aqui para baixar esta tabela.

Discussão

Este artigo fornece uma visão geral dos procedimentos para obter e armazenar THC de acordo com os regulamentos atuais dos EUA e descreve um protocolo para preparar o THC para injeção intraperitoneal e administrá-lo a camundongos adolescentes (PND 30-35) e adultos jovens (PND 70-75). É fundamental obter THC de uma fonte legítima e cumprir todos os regulamentos aplicáveis. Nos Estados Unidos, os pesquisadores devem satisfazer os requisitos regulatórios federais e estaduais, mesmo em estados onde a cannabis é legal para uso médico e não médico. O uso de uma fonte certificada garante o acesso ao THC de grau de pesquisa, que é fabricado sob controle rigoroso, garantindo potência e pureza consistentes. Em contraste, o uso de uma fonte não regulamentada ou não autorizada compromete a integridade científica, apresenta risco de desvio e expõe os pesquisadores a consequências legais.

Examinamos três respostas farmacológicas padrão ao THC - catalepsia, locomoção reduzida e analgesia. Reproduzimos extensos dados da literatura (ver, por exemplo, referências 27,28,29) mostrando que o THC afeta essas respostas de maneira dose-dependente. Esses testes são usados em pesquisas pré-clínicas para avaliar as propriedades farmacológicas dos agonistas dos receptores canabinóides, embora sua relevância para a experiência humana possa variar. Catalepsia refere-se a um estado em que o sujeito experimenta uma capacidade reduzida de se mover ou se envolver em funções motoras normais. Isso se manifesta como uma imobilização física ou rigidez, com o sujeito mantendo posturas incomuns. A locomoção reduzida (ou hipolocomoção) refere-se a uma diminuição no nível geral de atividade motora horizontal, que se manifesta como movimento lento ou menos frequente. Isso pode ser devido à sedação, deficiência motora ou simplesmente falta de motivação para se mover. Em estudos com animais, isso é frequentemente observado como uma redução no comportamento exploratório ou nos níveis gerais de atividade em um novo ambiente. O terceiro teste, antinocicepção, refere-se à capacidade do THC de aumentar a latência de retirada da cauda em um teste de imersão da cauda. Em modelos animais - onde a avaliação do componente subjetivo da analgesia requer testes especializados - a antinocicepção de imersão fornece uma visão útil, embora limitada, de como os medicamentos afetam a função nociceptiva.

Os resultados aqui apresentados mostram que o THC induz catalepsia de forma dose-dependente, independentemente do sexo e da idade, em particular nas doses de 5 mg/kg e 10 mg/kg. Um efeito específico de idade e sexo foi observado em camundongos fêmeas adultas, que exibiram produção significativamente embotada de catalepsia em comparação com camundongos machos ou fêmeas adolescentes. A hipolocomoção induzida por THC em um novo ambiente foi mais forte em camundongos adolescentes em comparação com camundongos adultos, independentemente do sexo. Essa diferença relacionada à idade foi distinguível dos efeitos hipolocomotores seletivos do THC em adultos em sua gaiola doméstica, um ambiente familiar30. Em relação às ações antinociceptivas agudas do THC, foram encontrados efeitos estatisticamente significativos nas doses de 5 mg/kg e 10 mg/kg em camundongos machos adolescentes, mas em camundongos machos adultos, apenas a dose de 10 mg/kg foi eficaz. Entre os três pontos de tempo testados aqui, os efeitos antinociceptivos do THC foram mais altos em 60 minutos pós-THC e decaíram depois. Os adolescentes do sexo masculino foram os mais sensíveis aos efeitos antinociceptivos do THC entre os quatro grupos de idade-sexo, e uma diferença significativa entre os sexos foi observada nos grupos de camundongos adolescentes após 60 min da injeção de 10 mg/kg de THC. Após 300 min de administração de THC, foi encontrado um claro efeito da idade em que foram observados efeitos antinociceptivos significativos em adolescentes, mas não em camundongos adultos, independentemente do sexo. Em geral, camundongos adolescentes exibiram maior sensibilidade ao THC em comparação com adultos, particularmente em medidas de locomoção e nocicepção. Em suma, esses resultados indicam que a adolescência é um período sensível aos efeitos farmacológicos agudos do THC, embora isso possa ser dependente do teste30. Os resultados aqui também identificam o impacto da idade e do sexo nos efeitos do THC, sugerindo que as mulheres adultas são as menos sensíveis ao THC.

A exposição ao THC durante a adolescência - especialmente quando frequente e em altas doses - pode interromper a função do sistema endocanabinóide em todo o corpo, incluindo o cérebro31. Essa interrupção pode levar a efeitos duradouros na saúde mental e física 32,33,34. Estudos epidemiológicos nas últimas três décadas mostraram consistentemente associações entre o uso de cannabis na adolescência e prejuízos de longo prazo na cognição, humor e funcionamento psicossocial, com esses efeitos potencialmente se estendendo até a idade adulta, mesmo após a cessação do uso 32,33,34,35,36. Além disso, foram relatadas alterações de longo prazo no peso corporal, metabolismo e função imunológica. Embora essas associações estejam bem documentadas, é fundamental estabelecer uma relação causal entre o uso de cannabis e seus potenciais impactos na saúde. Vários métodos, incluindo análise de gêmeos discordantes, randomização mendeliana e intervenções quase experimentais, podem ser usados para avaliar a causalidade em populações humanas. No entanto, experimentos com animais de laboratório também desempenham um papel vital na elucidação da causalidade37. Os resultados do nosso laboratório, financiado pelo Instituto Nacional de Abuso de Drogas, usando um modelo de roedor de exposição moderada, mas frequente, ao THC durante a adolescência, apóiam a hipótese de que a adolescência é um período vulnerável à exposição ao THC 17,18,25,38,39,40. Mesmo doses moderadas da droga durante essa janela crítica de desenvolvimento podem ter efeitos duradouros em vários componentes do sistema endocanabinóide adulto. Esses efeitos estão ligados a alterações neurocomportamentais, bem como prejuízos nas respostas imunes e na capacidade de lidar com o estresse psicossocial. Nossa pesquisa anterior também descobriu alterações inesperadas na função do tecido adiposo, fornecendo uma potencial explicação molecular para as alterações metabólicas de longo prazo observadas em usuários regulares de cannabis18. Ao ativar inadequadamente os receptores CB1 no cérebro durante períodos importantes do neurodesenvolvimento, como a adolescência, o THC pode perturbar o equilíbrio necessário para a maturação cerebral, levando a mudanças estruturais e funcionais que podem persistir na idade adulta.

Em humanos, fumar e vaporizar são os métodos mais comuns de consumo de cannabis em todas as faixas etárias. Nosso protocolo atual descreve a administração de THC por via intraperitoneal (i.p.), que é prática, reprodutível e produz respostas farmacocinéticas e farmacodinâmicas em roedores que, em vários aspectos, se assemelham às observadas em usuários humanos de cannabis. Por exemplo, uma dose ip de 5 mg / kg de THC em camundongos machos adolescentes e adultos demonstrou produzir concentrações sanguíneas máximas comparáveis às relatadas em usuários humanos adultos. A entrega de THC em aerossol (coloquialmente chamada de 'vapor') está sendo explorada como um complemento à injeção intravenosa. Essa abordagem é baseada na premissa de que a inalação passiva de THC aerossolizado, como fumar ou vaping, leva à absorção pulmonar, resultando em um início mais rápido dos efeitos, metabolismo hepático de primeira passagem reduzido e resultados psicoativos potencialmente distintos em comparação com a administração parenteral. Notavelmente, estudos anteriores demonstraram que ratos auto-administram extratos de cannabis aerossolizados ou misturas de THC / canabidiol em paradigmas comportamentais operantes, destacando o potencial desse método para estudar as propriedades de reforço do THC.

Em conclusão, este protocolo baseia-se em métodos estabelecidos para avaliar os comportamentos de tétrade induzidos por canabinóides41,42, que dependem da ativação dos receptores neuronais CB1 43, oferecendo várias atualizações e refinamentos importantes. Primeiro, descrevemos procedimentos que se alinham com os regulamentos atuais da DEA e institucionais para obter, manusear e administrar considerações críticas de THC para qualquer pessoa sem experiência prática. Em segundo lugar, aplicamos o paradigma da tétrade a camundongos adolescentes (PND 30-35) e adultos jovens (PND 70-75), dois estágios de desenvolvimento que são altamente relevantes para a exposição à cannabis no início da vida e em adultos emergentes, mas permanecem sub-representados na pesquisa pré-clínica. Os resultados deste estudo recapitulam os efeitos conhecidos dependentes da dose do THC na catalepsia, locomoção e analgesia, ao mesmo tempo em que revelam maior sensibilidade ao THC em camundongos adolescentes, particularmente nos domínios nociceptivo e locomotor. Essa visão específica da idade e o alinhamento regulatório tornam este protocolo especialmente valioso para os recém-chegados à pesquisa de canabinóides e para pesquisadores que investigam o impacto dos canabinóides no desenvolvimento.

Divulgações

Os autores não relatam interesses financeiros biomédicos ou potenciais conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pelos Institutos Nacionais de Abuso de Drogas (Grant No. 2P50DA044118 [para DP]).

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Seringas de 1 mL TBBD309659200/caixa; Estéril, Uso Único.
Frascos de vidro de 8 mLFisher Scientific W224584144/Case, usado para preparar a solução de injeção de THC.
Software de labirinto ANYQUALQUER-labirinto6000Utilizado para gravar vídeos de testes comportamentais e quantificar elementos dos testes para análise de dados.
Ratos C57BL/6JLaboratórios Jackson#000664Camundongos do tipo selvagem usados para todos os experimentos; Pode especificar a idade exata e o sexo desejados.
Escala Compass CXOhausCR221Usado para pesar ratos para determinar a quantidade de THC a ser injetada; 220 g no máximo, d = 0,1 g.
Placa Quente Corning PyroceramFisher Científico11500151Usado para aquecer banho-maria para o teste Tail Flick.
Delta-9-tetrahidrocanabinolCayman Chemical 12068Armazenado no cofre trancado com segurança para medicamentos da Tabela 1 em um -30 º C congelador.
Luvas de nitrilo FisherbrandFisher Científico19-181-610100/pacote; Luvas de uso único, sem látex, usadas para equipamentos de proteção individual adequados.
GraphPad Prism v10.4GraphPadn/aSoftware de análise estatística utilizado para analisar dados experimentais e executar testes estatísticos.
Copo PesadoFisher CientíficoS81280Usado para reter água quente para o teste Tail Flick.
Gás nitrogênio de alta purezaGás de arUN1066  Usado para evaporar o etanol da solução estoque de THC.
Logitech C920 WebcameraLogitech960-001055Usado para registrar testes comportamentais em animais; Carl Zeiss 1080p/30 fps HD USB.
Caixa de campo abertoStoelting Co60101Caixa com lados opacos para realizar testes de campo aberto; Laterais facilmente removíveis para limpeza.
Almofadas de treinamento para animais de estimaçãoFelizB088G1N2H885/pacote; 22 pol. &agudo; 22 pol.; usado para embrulhar e segurar ratos para o teste Tail Flick.
Agulhas PrecisionGlideBD305109100/caixa; 0,4 mm e agudo; 13 mm; Estéril, Uso Único.
SalinoFisher Scientific (Cytiva)Z1377Garrafas de 1 L, grau estéril USP.
SCOE 1xBiofogR-SKSolução de limpeza usada para limpar materiais de teste comportamental.
Pré-adolescente-80Sigma AldrichP8074-500MLBioXtra, líquido viscoso; CAS # 9005-65-6.
Banho-maria ultrassônicoFisher Scientific (Branson)CPX2800Controle de temperatura; Limpador ultrassônico digital.
Misturador de vórticeFisher Científico2215365Usado para misturar o conteúdo da solução de injeção de THC enquanto ela está sendo preparada.

Referências

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