Aqui apresentamos um protocolo de transplante de tecido adiposo branco e marrom que oferece uma estratégia promissora para reverter a subfertilidade, obesidade e hiperglicemia, enquanto melhora a função renal em camundongos BTBR diabéticos e obesos.
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Artigo de método
Enxertos adiposos brancos e marrons: uma abordagem para corrigir déficits reprodutivos, metabólicos e renais em camundongos obesos com braquiúria preta e castanha (BTBR)
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
O transplante de tecido adiposo branco (TAB) e tecido adiposo marrom (BAT) tem surgido como uma estratégia terapêutica promissora para reverter distúrbios metabólicos sem a necessidade de administração sustentada de agentes exógenos. O WAT funciona como um órgão endócrino chave envolvido na homeostase energética, enquanto o BAT é um tecido termogênico crítico para a termorregulação. O modelo de camundongo obeso braquiúrico preto e castanho (BTBR) imita de perto as principais características da obesidade, diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e doença renal diabética (DRD), incluindo hiperglicemia, resistência à insulina, hipometabolismo e subfertilidade.
Usando o protocolo apresentado a seguir, o transplante combinado de WAT e BAT derivados de doadores do tipo selvagem e heterozigotos BTBR em receptores obesos BTBR resultou na reversão da subfertilidade, atenuação do ganho de peso, normalização do controle glicêmico e melhora dos parâmetros renais. Notavelmente, a hipertrofia renal e a apoptose foram reduzidas, enquanto o número de podócitos foi preservado. Esses achados sugerem que o transplante combinado de WAT e BAT pode representar uma estratégia terapêutica alternativa para o tratamento do DM2, com benefícios concomitantes na mitigação da DRD e da obesidade. Além disso, essa abordagem pode ajudar a aumentar o número de camundongos obesos BTBR viáveis dentro das colônias do viveiro. Uma investigação mais aprofundada sobre os mecanismos subjacentes pode facilitar a tradução clínica dessa intervenção.
Introdução
A doença renal diabética (DRD), o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e a obesidade representam condições multifatoriais inter-relacionadas que representam desafios significativos e crescentes para a saúde global. A DRD, definida como a coexistência de diabetes mellitus (DM) e doença renal crônica na ausência de outras causas identificáveis de lesão renal, afeta aproximadamente 20-40% dos indivíduos com DM 1,2. O DM2 é um distúrbio metabólico sistêmico caracterizado por hiperglicemia crônica e interrupções na homeostase da glicose, lipídios e insulina. Está entre as dez principais ....
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Protocolo
Todos os experimentos foram aprovados pelos Comitês Institucionais de Cuidado e Uso de Animais do Hospital Israelita Albert Einstein (HIAE) e registrados no Instituto Judaico de Pesquisa e Ensino, São Paulo, SP, Brasil (N°. 3309-18 e N°. 4900-21). Os detalhes dos reagentes e equipamentos usados estão listados na Tabela de Materiais.
NOTA: Camundongos obesos BTBR (nocaute do gene da leptina, homozigotos, ob / ob) foram usados como modelo para DM2, DKD e obesidade. Camundongos obesos BTBR fêmeas com idade entre 4 e 5 semanas serviram como receptores para transplante de tecido adiposo....
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Resultados
Quantidade de gordura transplantada e eficácia do protocolo
Após a padronização do protocolo, dois volumes de transplante de gordura (5-9,9% e 10-15% em relação ao peso corporal do doador) foram avaliados quanto à eficácia, definida como a obtenção de pelo menos uma gravidez resultando em descendentes viáveis. O grupo de 5-9,9% apresentou uma taxa de sucesso de 23,8%, enquanto o grupo de 10-15% alcançou 52,2%, correspondendo a um aumento de 2,2 vezes na eficácia do pr.......
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Discussão
Este estudo demonstra que o transplante combinado de WAT e BAT é uma abordagem terapêutica eficaz para controlar a hiperglicemia, prevenir o ganho de peso corporal e a hipertrofia das ilhotas, restaurar a subfertilidade feminina e melhorar a função renal, reduzindo a apoptose e preservando o número de podócitos em um modelo pré-clínico de DM2, DRD e obesidade.
Embora estudos anteriores tenham investigado o transplante de WAT e BAT como estratégias para regular.......
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Divulgações
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Agradecimentos
Agradecemos às equipes técnicas do Centro de Treinamento Experimental e Cirúrgico (CETEC) e do Instituto Judaico de Pesquisa e Educação (IIPE) por seu apoio. Este trabalho foi apoiado por uma bolsa de pesquisa de mestrado da CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) para S.B, uma bolsa de pesquisa de Doutorado Direto da CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior) para M.L.F, bolsa de mestrado da FAPESP (nº 2024/08173-6) para M.O.M., e bolsa de iniciação científica da FAPESP (Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo; nº 2019/12636-3) para M.T.A.B-R. Este trabalho também foi....
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Solução alcoólica de clorexidina digluconato a 0,5% | Rioquí Mica | SKU 1068253 | |
| Agulha calibre 16 | Becton Dickinson | SKU 305198 | |
| Solução de digluconato de clorexidina não alcoólica a 2,0% | Rioquí Mica | SKU 1113045 | |
| Seringa de 3 mL | Becton Dickinson | SKU 309657 | |
| Fitas Accu-Check e ndash; Performa | Roche | EAN 4015630981960 | |
| Alcian Blue PAS Kit | EasyPath | SKU EP-11-20019 | |
| Albumina Sérica Bovina (BSA) | Sigma-Aldrich | A4612 | |
| Software CellSens | Olympus | CELLSENS | |
| Citrato Buffer pH 6,0: Ácido cítrico monohidratado + Hidróxido de sódio | Sigma-Aldrich | C1909 + 28-3010 | |
| Anticorpo Caspase-3 Cortado | Tecnologia de Sinalização Celular | 9661 | |
| Analisador Cobas C 111 | Roche | 4528778001 | |
| Creatinina K | Teste de laboratório | 96-300 | |
| EnVision FLEX DAB+ Cromogênio | Agilent-Dako | K3468 | |
| Reagente de detecção EnVision FLEX / HRP | Agilent-Dako | SM802 | |
| Reagente Bloqueador de Peroxidase Envision FLEX | Agilent-Dako | SM801 | |
| EnVision FLEX Substrate Buffer | Agilent-Dako | SM803 | |
| O EnVision FLEX foi buffer 20x | Agilent-Dako | K800721-2 | |
| Eosina | Agilent-Dako | CS701 | |
| Leitor de Microplacas GloMax Discover | Promega | GM3000 | |
| Glicosímetro Accu-Check - Performa | Roche | EAN 4015630980512 | |
| Software GraphPad Prism 8 (software estatístico) | GraphPad por Dotmatics | - | |
| 100% v/v Isoforina (Isoflurane) | Cristá Lia | - | |
| Hematoxilina | Agilent-Dako | CS700 | |
| Microscópio óptico IX51 | Olympus | IX51 | |
| Gaiola Metabólica para camundongos individuais | Tecniplast | 3600M021 | |
| Meio de montagem - Entellan | Sigma-Aldrich | 100869 | |
| Mouse Albumin ELISA Kit | Abcam | Ab207620 | |
| Cepa do camundongo: BTBR. Cg-Lepob/WiscJ | Laboratórios JAX | 4824 | |
| Kit de Schiff Ácido Periódico (PAS) | EasyPath | EP-11-20014 | |
| RM255 Microtome | Leica Biosystems | 14050237960 | |
| Processador de tecido TP1020 | Leica Biosystems | TP-1020 | |
| Tramadol 50 mg/mL | Grü Nenthal | 4022444 | |
| Anticorpo WT-1 | Santa Cruz | SC-192 |
Referências
- Zhao, M., Cao, Y., Ma, L. New insights in the treatment of DKD: recent advances and future prospects. BMC Nephrol. 26 (1), 72(2025).
- van Raalte, D. H., et al. Combination therapy for kidney disease in people with diabetes mellitus. Nat Rev Nephrol
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Reimpressões e permissões
