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Artigo de investigação

Efeito e mecanismo do ácido taurosodesoxicólico na bile da raposa-azul na lesão hepática aguda associada ao álcool em camundongos

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DOI:

10.3791/68763

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17 de outubro de 2025

 ,  , 
1School of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine

Neste artigo

Resumo

Este estudo avaliou os efeitos hepatoprotetores da bile da raposa azul na lesão hepática induzida por álcool em camundongos. A bile da raposa azul, contendo TUDCA, UDCA, bilirrubina e TCDCA, reduziu os marcadores de danos hepáticos e agiu pela via AGE-RAGE, AKT1 e PPARG, demonstrando propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes.

Resumo

A bile animal, como a bile de urso, tem sido usada há muito tempo na medicina tradicional por seus benefícios terapêuticos. Acredita-se que a bile de raposa azul, semelhante à bile de urso, em certas práticas tradicionais possua propriedades hepatoprotetoras. Este estudo examinou os componentes e efeitos da bile da raposa azul na lesão hepática associada ao álcool em camundongos. A bile foi coletada de 30 raposas azuis e processada em pó seco. A composição química da bile da raposa-azul foi analisada por cromatografia líquida de alta eficiência e cromatografia líquida de ultra-eficiência acoplada à espectrometria de massa por tempo de voo quadrupolo. A farmacologia de rede foi empregada para identificar potenciais compostos bioativos, alvos e vias associados à lesão hepática associada ao álcool. Um modelo de camundongo de lesão hepática associada ao álcool foi estabelecido usando camundongos Kunming, que receberam pó de bile de raposa azul em doses baixas e altas. Os níveis séricos de alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase e colesterol total foram medidos. Os tecidos hepáticos foram avaliados pela coloração de hematoxilina e eosina e ensaio de malondialdeído. O docking molecular foi realizado para prever a afinidade de ligação entre compostos ativos e alvos centrais. Descobriu-se que a bile da raposa-azul contém ácido taurodesoxicólico (TUDCA), ácido ursodesoxicólico, bilirrubina e ácido tauroquenodesoxicólico. A análise histopatológica não revelou anormalidades significativas ou efeitos tóxicos nos principais órgãos após a administração oral de pó de bile de raposa azul. Os principais alvos da bile da raposa-azul incluíam a proteína AKT1, PPARG, IGF1, MMP9 e CASP3. O tratamento com bile de raposa azul diminuiu os níveis séricos de ALT, AST, colesterol e MDA em modelos de camundongos de lesão hepática relacionada ao álcool. A farmacologia da rede e o docking molecular sugerem que os efeitos hepatoprotetores da bile da raposa-azul podem estar relacionados ao receptor do produto final de glicação avançada para a via de sinalização do produto final de glicação avançada. No geral, a bile de raposa azul, com seu conteúdo de TUDCA semelhante ao da bile de urso, tem como alvo proteínas como AKT1 e PPARG, demonstrando potenciais efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes no tratamento da lesão hepática associada ao álcool.

Introdução

A hepatopatia alcoólica (hepatopatia alcoólica) engloba um espectro de lesões hepáticas que variam de anormalidades laboratoriais assintomáticas a doença hepática avançada com cirrose e, em sua forma mais grave, doença hepática terminal com risco de vida acompanhada de falência de múltiplos órgãos1. A prevalência de hepatopatia alcoólica, incluindo doença hepática gordurosa associada ao álcool, representa uma forma relativamente leve e potencialmente reversível de hepatopatia alcoólica1. A hepatite associada ao álcool é caracterizada por inflamação, com apresentações clínicas que variam de esteato-hepatite assintomática a hepatite alcoólica aguda, que se apresenta com icterícia aguda e pode evoluir para insuficiência hepática com alta mortalidade em curto prazo1. O álcool e seus metabólitos alteram o metabolismo lipídico e promovem o acúmulo de lipídios (esteatose) por meio de vários mecanismos, incluindo a inibição da β-oxidação de ácidos graxos mitocondriais e a estimulação da lipogênese2. O etanol regula positivamente a expressão do receptor de transferrina 1, aumentando assim a captação hepática de ferro2. Tanto o álcool quanto o acetaldeído podem ferir diretamente os hepatócitos, levando ao aumento do estresse oxidativo, inibição da regeneração da s-adenosilmetionina, liberação de padrões moleculares associados a danos (DAMPS), exposição a endotoxinas bacterianas na circulação portal e formação de adutos proteicos2. O manejo da hepatopatia alcoólica continua sendo desafiador devido às inúmeras vias patogênicas envolvidas3. As estratégias futuras sob investigação incluem probióticos empíricos, fatores de crescimento, antioxidantes, anticorpos monoclonais direcionados a fatores relacionados à inflamação e intervenções comportamentais aprimoradas por tecnologia. No entanto, estratégias terapêuticas abrangentes adicionais ainda precisam ser exploradas.

Evidências emergentes sugerem que a bile animal pode ter potencial terapêutico no tratamento da doença hepática associada ao álcool (ALD) devido às suas propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes 4,5. A bile animal é um componente importante da medicina tradicional chinesa (MTC)6. Na MTC, a bile animal é usada para fortalecer a função do fígado e da vesícula biliar e aliviar a dor, febre, tosse e inflamação. Tem sido empregado no tratamento de doenças hepáticas, incluindo cirrose6. A bile animal possui propriedades anti-inflamatórias e antioxidantes6, e a inflamação e o estresse oxidativo desempenham papéis centrais na patogênese da ALD7. A suplementação de ácidos biliares também foi relatada para melhorar a esteatose hepática8. Atualmente, a bile de urso é o medicamento derivado da bile mais utilizado, tendo comoprincipais componentes ativos o ácido ursodesoxicólico (UDCA) e o ácido taurocólico (TUDCA) 6,9. Notavelmente, o TUDCA está ausente da bile de outros animais, como ovelhas, vacas, galinhas e cobras6. O TUDCA demonstrou potencial terapêutico no tratamento da lesão hepática aguda10. Atualmente, o TUDCA é obtido por meio da drenagem da bile de urso (o que levanta preocupações com o bem-estar animal), síntese química (que é cara) ou biotransformação do pó de galha de frango em um equivalente de bile de urso (que permanece não equivalente à autêntica bile de urso)11,12. A raposa azul (Alopex lagopus), também conhecida como raposa do Ártico, é criada em cativeiro principalmente por sua pele. A China é um dos três maiores exportadores de roupas de pele do mundo, e os órgãos internos das raposas azuis colhidas são normalmente descartados13. Isso representa uma oportunidade de valorizar a vesícula biliar como um recurso médico em potencial. Raposas azuis e ursos são carnívoros, compartilhando semelhanças na fisiologia digestiva, metabolismo e dieta, sugerindo que sua composição biliar e efeitos também podem ser semelhantes. No entanto, essa possibilidade ainda não foi explorada.

Portanto, este estudo teve como objetivo examinar as ações farmacológicas e os mecanismos subjacentes da bile da raposa-azul em modelos de ALD. As descobertas podem fornecer novos caminhos de pesquisa para o desenvolvimento de substitutos da bile de urso, estabelecer uma base científica para a utilização da vesícula biliar da raposa azul como recurso médico, transformar resíduos industriais em produtos valiosos e informar o desenvolvimento terapêutico futuro.

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Protocolo

O protocolo do estudo foi revisado e aprovado pelo Comitê de Ética para Experimentos em Animais da Universidade de Medicina Chinesa de Heilongjiang (aprovação #2023021101). Todos os experimentos com animais foram conduzidos de acordo com as diretrizes ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments) e diretrizes nacionais e institucionais relevantes para o cuidado e uso de animais de laboratório. Como este estudo envolveu experimentos com animais, o consentimento informado não foi aplicável. Todos os procedimentos de criação de animais e colheita de peles seguiram rigorosamente os Regulamentos Técnicos Chineses para o Gerenciamento da Criação de Animais Selvagens. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para Experimentos com Animais da Universidade de Medicina Chinesa de Heilongjiang, China (aprovação # 2023021101).

Preparação de amostra de bile de raposa azul
O recurso da bile de raposa azul é fornecido na Tabela de Materiais. Um total de 30 raposas-azuis (Vulpes lagopus) foram sacrificadas por choque elétrico, seguido de colheita de pelos e coleta de vesícula biliar. A vesícula biliar da raposa azul é de forma oval, com uma seção superior estreita e uma seção inferior inchada. Sua superfície externa é marrom escura com dobras visíveis e a membrana da cápsula é fina. A bile foi imediatamente aspirada com uma seringa descartável estéril de 1 mL e apareceu na cor preta escura ou verde escura. As vesículas biliares foram então secas a 37 ° C por 48 h para obter pó de bile de raposa azul seco (Figura 1). O pó biliar resultante exibiu uma tonalidade marrom-amarelada com uma textura brilhante e friável. O rendimento médio de pó de bile seco por vesícula biliar foi de aproximadamente 0,82 ± 0,30 g. Para a preparação da amostra, 250 mg de pó de bile seco de raposa azul (conforme descrito acima) ou urso (ver Tabela de Materiais) foram dissolvidos em 1 mL de metanol de grau cromatográfico a 70%. A solução foi sonicada por ultrassom (40 kHz, 300 W), filtrada através de uma membrana de 0,22 μm, diluída até um volume final de 50 mL (ou seja, a 5 mg/mL) e posteriormente diluída até uma concentração de trabalho de 0,5 mg/mL para análise subsequente. O fluxo de trabalho experimental geral está resumido na Figura Suplementar 1.

Neste estudo, a faixa de dosagem do pó de bile de raposa azul usado para experimentos com animais foi de 5-10 g / kg com base em avaliações anteriores de toxicidade e estudos farmacológicos, sem efeitos adversos significativos observados nessas concentrações14,15. Durante a preparação do pó biliar, as vesículas biliares foram secas a 37 °C por 48 h; No entanto, o tempo de secagem pode variar dependendo da umidade local e do volume da amostra, portanto, o teor de umidade deve ser verificado para garantir a desidratação completa. Para a dissolução, uma concentração de 5 mg/mL em metanol de grau cromatógráfico foi ideal para análises de HPLC e UPLC-Q-TOF-MS; A dissolução incompleta ou o resíduo de partículas podem afetar a precisão analítica, exigindo sonicação ou filtração adicionais. Uma limitação conhecida é a variabilidade na composição biliar devido a diferenças fisiológicas sazonais, dietéticas e individuais entre as raposas azuis, o que pode afetar a abundância relativa de compostos ativos como TUDCA e UDCA16. Portanto, a validação em lote por perfil cromatográfico é recomendada antes do uso farmacológico para garantir perfis de componentes consistentes.

Análise farmacológica de rede
A composição química da bile da raposa-azul foi analisada usando cromatografia líquida de alta eficiência (ver Tabela de Materiais) e cromatografia líquida de ultra-alta eficiência acoplada à espectrometria de massa de tempo de voo quadrupolo (UPLC-Q-TOF-MS). A HPLC foi realizada usando uma coluna SB-C18 (4,6 mm x 150 mm, 5 μm) com uma fase móvel consistindo de di-hidrogenofosfato de sódio 0,03 M (pH ajustado para 4,4 usando ácido fosfórico) como fase A e metanol (ver Tabela de Materiais) como fase B (Tabela 1). O comprimento de onda de detecção foi fixado em 210 nm, com vazão de fase móvel de 1,0 mL/min, e a temperatura da coluna foi de 40 °C. O volume de injeção foi de 10 μL. A análise UPLC-Q-TOF/MS foi realizada usando uma coluna UPLCTM HSS T3 (ver Tabela de Materiais). A fase móvel consistiu em solução aquosa de ácido fórmico de acetonitrila (A)-0,1% (B; ver Tabela de Materiais). O programa de eluição gradiente foi o seguinte: 0-25,0 min, 98%-2% A e 25,0-28,0 min, 2%-2% A a uma taxa de fluxo de 4 mL/min. A temperatura da coluna foi mantida a 35 °C. A espectrometria de massas foi realizada usando uma fonte de ionização por eletrospray (ESI) com os seguintes parâmetros: vazão de gás solvente de 650 L/h, temperatura de gás solvente de 350 °C, vazão de gás cônico de 50 L/h, temperatura da fonte de íons de 120 °C, tensão capilar de 2,8 kV (modo de íons positivos) e 2,0 kV (modo de íons negativos), tensão do cone de 25 V e energia de colisão de 6 eV. Os espectros foram coletados a cada 0,2 s com intervalo de 0,02 s. Leucina-encefalina (ver Tabela de Materiais; [M+H]+=556,2771) foi utilizada como solução de calibração de referência na concentração de 40 fmol/μL e vazão de 15 μL/min17.

Análise de composição química e previsão de alvos
Os componentes ativos da bile da raposa-azul foram identificados usando HPLC e UPLC-Q-TOF/MS, com ácido aurocólico e taurododooxicolato de sódio (ver Tabela de Materiais) como padrões internos18. As fórmulas estruturais dos compostos identificados foram recuperadas do banco de dados PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). Para explorar potenciais alvos bioativos, os componentes ativos da bile da raposa azul foram consultados no banco de dados PharmMapper (http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/) para identificar alvos genéticos associados.

Usando lesão hepática alcoólica e lesão hepática induzida por álcool como palavras-chave, genes relacionados à doença foram obtidos dos bancos de dados GeneCards (https://www.genecards.org/) e OMIM (https://omim.org/). No banco de dados GeneCards, os alvos foram rastreados de acordo com o escore de relevância, com um limite fixado em ≥ 20. Esse corte empírico comumente usado garante um equilíbrio entre sensibilidade e especificidade, retendo a maioria dos genes potencialmente relevantes (alta memória) enquanto filtra genes fracamente relacionados ou ruidosos (alta precisão). Em contraste, nenhuma filtragem adicional foi aplicada no banco de dados OMIM, pois captura alvos com fortes evidências genéticas, complementando assim as pontuações de relevância computacional dos GeneCards. Os dados de destino obtidos foram mesclados e duplicados para identificar alvos relacionados à ALD. Os alvos do ingrediente ativo e os alvos da doença foram comparados usando Venny 2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html) para visualização. As interseções foram identificadas como alvos potenciais da bile da raposa-azul contra a hepatopatia alcoólica e foram importadas para o banco de dados STRING (http://version10.string-db.org/). No banco de dados STRING, a rede de interação foi construída com os parâmetros padrão (escore médio de confiança ≥ 0,4) e os nós livres foram ocultados para melhorar a clareza da visualização. Os nós livres foram ocultados para gerar o diagrama de rede de interação proteína-proteína (PPI), que foi visualizado usando o software Cytoscape (versão 3.9.1). A análise topológica foi realizada para calcular os valores de grau, e os seis alvos com os maiores valores de grau foram identificados usando o Banco de Dados para Anotação, Visualização e Descoberta Integrada (DAVID, https://david.ncifcrf.gov/) com um limite de significância de p < 0,05. O banco de dados da Enciclopédia de Genes e Genomas de Kyoto (KEGG) foi usado para análise de enriquecimento de vias.

Acoplamento molecular
O docking molecular foi realizado para avaliar as interações entre as principais proteínas-alvo e os componentes bioativos da bile da raposa-azul. As estruturas tridimensionais das principais proteínas-alvo foram recuperadas do Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB) Protein Data Bank (https://www.rcsb.org/), e as estruturas dos componentes biliares foram obtidas do banco de dados PubChem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/). As simulações de docking foram realizadas usando o software Molecular Operating Environment (MOE) (versão 2022.02). Para AKT1, a estrutura cristalina (PDB ID: 4EKL) foi baixada, e o pré-processamento em MOE incluiu remoção de moléculas de água e ligantes originais, adição de hidrogênio com protonação em pH fisiológico (7,0) e minimização de energia. As estruturas ligantes (TUDCA, UDCA, TCDCA, TCA e bilirrubina) foram recuperadas do PubChem e a energia minimizada antes do encaixe. Durante o processo de encaixe, várias conformações de ligantes foram geradas e cada conformação foi colocada na bolsa de ligação do receptor em várias orientações espaciais. O encaixe foi realizado usando o protocolo Induced Fit, com London dG para colocação inicial e Affinity dG como função de pontuação. Trinta conformações foram geradas para cada ligante, e as poses finais foram refinadas pela otimização do campo de força. Todos os outros parâmetros foram definidos como padrões MOE sem ajustes mais finos. A afinidade entre cada conformação de ligante e o receptor foi avaliada usando a função de pontuação do software. Os resultados do acoplamento foram avaliados pela energia livre de ligação, com a conformação de energia mais negativa no maior cluster escolhido como o modo de ligação representativo. O modo de ligação com a afinidade mais forte e a conformação ideal foi selecionado para visualização. Valores de afinidade abaixo de -4,25 kcal / mol indicam ligação ligante-alvo, valores abaixo de -5,0 kcal / mol indicam ligação moderada e valores abaixo de -7,0 kcal / mol indicam forte afinidade de ligação 19.

Modelos de camundongos de ALD
Para este estudo, 30 camundongos Kunming livres de patógenos específicos (FPS) (18-22 g, 6-8 semanas de idade, 15 machos, 15 fêmeas) foram comprados. Os animais foram alojados em condições controladas a 25 ± 2 °C com umidade relativa de 60% ± 10%, com acesso ad libitum a comida e água. Antes do experimento, os camundongos foram aclimatados por 1 semana.

O modelo ALD foi estabelecido da seguinte forma. Uma solução de etanol a 70% v/v foi preparada medindo 70,21 mL de etanol anidro em um balão volumétrico e adicionando água ultrapura a um volume final de 100 mL. A solução foi agitada com um agitador magnético por 1 min e deixada em repouso por 5 min até que nenhuma separação de fases fosse observada. A dose de gavagem foi de 2 mL/kg de peso corporal, administrada uma vez ao dia por 7 dias consecutivos. Na manhã do dia 7, 4 h após a gavagem final, amostras de sangue e tecidos hepáticos foram coletados para análise posterior. O estabelecimento do modelo foi confirmado pela avaliação de indicadores típicos de lesão hepática. Os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), colesterol total (T-CHO) e malondialdeído (MDA) foram medidos. Além disso, os tecidos hepáticos foram submetidos a exame histopatológico usando coloração de hematoxilina e eosina (H&E) para avaliar a morfologia dos hepatócitos, vacuolização citoplasmática, necrose e infiltração de células inflamatórias. Os camundongos foram divididos aleatoriamente em cinco grupos (n = 6 por grupo): O grupo controle em branco recebeu 2 mL / kg de água destilada; o grupo modelo recebeu 2 mL/kg de etanol a 70% sem tratamento; o grupo de controle positivo recebeu comprimidos hepatoprotetores a 0,4 g / kg (ver Tabela de Materiais); O grupo de alta dose de Blue Fox Bile Powder recebeu 10 g / kg de Blue Fox Bile Powder; O grupo de pó de bile de raposa azul de baixa dose recebeu 5 g / kg de pó de bile de raposa azul. Todos os grupos, exceto o controle em branco, receberam etanol a 70% (2 mL/kg) por via oral uma vez ao dia por 7 dias consecutivos para induzir lesão hepática alcoólica. No dia 7, 4 h após a administração do etanol, os respectivos tratamentos (comprimidos hepatoprotetores ou pó biliar de raposa azul) foram administrados e experimentos subsequentes foram realizados. O grupo controle em branco recebeu água destilada durante todo o experimento.

Medição de transaminases séricas (ALT e AST) e kit de colesterol total (T-CHO)
As amostras de sangue foram centrifugadas a 1.000 x g por 15 min a 4 °C para obtenção de soro. As amostras foram armazenadas a -20 °C até a análise. Kits comerciais foram usados para medir os níveis de ALT, AST e T-CHO (ver Tabela de Materiais) de acordo com as instruções do fabricante.

Monitoramento do peso corporal
Após 7 dias consecutivos de administração de etanol, os tratamentos foram administrados no dia 7 e os experimentos foram realizados 4 horas após a administração matinal. O peso corporal foi registrado 2x ao dia durante o período de observação. O peso corporal sem jejum foi medido usando uma balança analítica eletrônica nos dias 1, 2, 3, 5, 7, 10 e 14 após a administração.

Processamento de amostras de tecido
No dia 14 após a administração, o peso corporal e a ingestão de alimentos restantes foram registrados. Os animais foram então colocados em jejum à tarde com livre acesso à água. No dia seguinte (após um período de jejum de 12-16 h), o peso corporal em jejum foi medido antes da eutanásia por luxação cervical. Exames patológicos macroscópicos foram realizados para avaliar alterações morfológicas nos principais órgãos, incluindo, entre outros, coração, fígado, baço, pulmões, rins, glândulas supra-renais, cérebro, estômago, intestinos, testículos, próstata, ovários e útero. Amostras de tecido do coração, fígado, baço, pulmões, rins, estômago e intestinos foram coletadas aleatoriamente do grupo controle em branco (NC) e do grupo bile de raposa azul (LH) em baixa dose, fixadas em paraformaldeído a 4%, incluídas em parafina, seccionadas e coradas com hematoxilina e eosina (H&E) para avaliação histopatológica. As seções de tecido foram examinadas e visualizadas ao microscópio.

Coloração H&E
As amostras hepáticas foram fixadas com paraformaldeído a 4% em solução salina tamponada com fosfato (PBS), incluídas em parafina e seccionadas. Os cortes foram desparafinizados em xileno I e II, reidratados em concentrações decrescentes de etanol (100%, 95%, 85% e 75%) e lavados com água, diferenciados, lavados novamente e azulados com solução azulada. Após o enxágue, os cortes foram desidratados em etanol a 85% e 95% por 5 min cada, corados com eosina por 5 min e desidratados em etanol anidro I, II e III (5 min cada). Por fim, os cortes foram limpos em xileno I e II (5 min cada) e montados com goma neutra. As imagens foram adquiridas usando um microscópio de luz (100x).

Determinação do malondialdeído (MDA) nos tecidos hepáticos
As amostras de fígado foram homogeneizadas em 9 volumes de solução salina fisiológica usando um moedor de tecido. O homogeneizado foi centrifugado a 700 x g por 10 min a 4 °C. O ensaio MDA foi realizado no sobrenadante usando um kit comercial (ver Tabela de Materiais) de acordo com as instruções do fabricante.

Análise estatística
Os dados são apresentados como médias ± desvios-padrão (DPs). As comparações entre os grupos foram realizadas por meio da análise de variância (ANOVA) seguida do teste post hoc de diferença mínima significativa (LSD). Valores de p bilaterais <0,05 foram considerados estatisticamente significativos.

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Resultados

Identificação dos compostos ativos na bile da raposa-azul
Raposas azuis e ursos são carnívoros, compartilhando fisiologia digestiva e metabolismo semelhantes20. Portanto, sua bile pode ter composições comparáveis. Usando as condições cromatográficas descritas acima, cada composto foi bem separado (Figura 2). Neste experimento, o tempo de retenção do padrão TUDCA21 foi usado para identificar o TUDCA na bile da raposa-azul (

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Discussão

De acordo com o Relatório de Status Global sobre Álcool e Saúde da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2018, o consumo per capita de álcool na China aumentou de 4,1 L em 2005 para 7,2 L em 2016, representando um aumento de 76%. A hepatopatia alcoólica causada pelo consumo crônico de álcool continua sendo uma das principais etiologias da morbidade e mortalidade relacionadas ao fígado22. Bo et al. estabeleceram um modelo de lesão hepática induzida por tetracloreto...

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Divulgações

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da Fundação de Ciências da Juventude da China (NO.82204562).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
0,03 M de di-hidrogenofosfato de sódioN/AN/AHPLC móvel fase A
0,1% de ácido fórmico em águaFisher Scientific, EUAN/AFase móvel para UPLC
0,22 μ Filtro de membrana MN/AN/AFiltragem de amostras
4% de paraformaldeídoN/AN/AFixação tecidual
Acetonitrila, grau de cromatografiaFisher Scientific, EUAN/AFase móvel para UPLC
Kits ALT, AST, T-CHOXangai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChinaN/AAnálise bioquímica sérica
Balança analíticaN/AN/AMedição do peso do animal
Ácido aurócólicoInstituto de Controle de Alimentos e Medicamentos da ChinaN/APadrão interno para HPLC/MS
Pó de bile de ursoInstituto Chinês de Controle de Alimentos e Medicamentos, PequimN/AMaterial de referência
BilirrubinaNão especificadoN/AComposto ativo identificado na bile
Raposa azulFazenda Suihua Fox, Heilongjiang, ChinaN/AFonte de bile
Pó de bile de raposa azulPreparação internaN/AAmostra para análise de componentes
Coluna para HPLC C18Agilent Technologies, EUAZORBAX SB-C18 (4.6&vezes; 150 mm, 5 μ m)Separação por HPLC
Cytoscapehttps://cytoscape.org/Versão 3.9.1Visualização de rede e análise topológica
DAVINIHhttps://david.ncifcrf.gov/Análise de enriquecimento GO/KEGG
Cartões GeneCardsInstituto Weizmannhttps://www.genecards.org/Recuperação de genes relacionados à doença
Hematoxilina e Eosina (H& E)N/AN/AColoração histológica
Sistema de HPLCAgilent Technologies, EUA1200 InfinitoAnálise da composição da bile
Camundongos Kunming (SPF, 18– 22g)Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd.SCXK (Liao) 2020-0010Modelo de lesão hepática alcoólica
Leucina-encefalinaSigma, EUAN/APadrão de calibração MS (40 fmol/μ L)
Kit de detecção de MDAXangai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., ChinaN/AMedição do estresse oxidativo hepático
Metanol, grau de cromatografiaFisher Scientific, EUAN/ASolvente para preparação de amostras
MOEGrupo de Computação QuímicaMOE 2022.02Análise de docking molecular
OMIMNIHhttps://omim.org/Recuperação de genes relacionados à doença
Microscópio ópticoN/AN/AObservação histológica
PharmMapperECUSThttp://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/Previsão de alvos compostos ativos
Ácido fosfóricoN/AN/AAjuste de pH da fase móvel
PubChemNCBIhttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/Recuperação de estrutura composta
Banco de Dados de Proteínas RCSBhttps://www.pdbus.org/N/AFonte de estrutura 3D de proteína
Centrífuga refrigeradaN/AN/ASeparação de soro e tecido
Taurodocolato de sódio (TUDCA)Instituto de Controle de Alimentos e Medicamentos da ChinaN/APadrão interno para HPLC/MS
CORDAEMBLhttp://version10.string-db.org/Análise de interação proteína-proteína
UniProtEMBL-EBIhttps://www.uniprot.org/Padronização de metas
Sistema UPLC-Q-TOF-MSWaters, EUAUPLC HSS T3 (100 vezes; 2,1 mm, 1,8 μ m)Identificação de componentes
VennyCSIChttps://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.htmlVisualização de interseção de destino

Referências

  1. Thursz, M., et al. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of alcohol-related liver disease. J Hepatol. 69 (1), 154-181 (2018).
  2. Sugimoto, K., Takei, Y. Pathogenesis of alcoholic liver disease. Hepatol Res. 47 (1), 70-79 (2017).
  3. Adekunle, A. D., Adejumo, A., Singal, A. K. Therapeutic targets in alcohol-associated liver disease: progress and challenges. Therap Adv Gastroenterol. 16, 17562848231170946(2023).
  4. Wang, Y., et al. bile powder prevents drunkenness and alcohol-induced liver injury in mice via the gut microbiota and metabolic modulation. Chin Med. 19 (1), 39(2024).
  5. Li, L., Liu, C., Mao, W., Tumen, B., Li, P. Taurochenodeoxycholic Acid Inhibited AP-1 Activation via Stimulating Glucocorticoid Receptor. Molecules. 24 (24), 4513(2019).
  6. Wang, D. Q., Carey, M. C. Therapeutic uses of animal biles in traditional Chinese medicine: an ethnopharmacological, biophysical chemical and medicinal review. World J Gastroenterol. 20 (29), 9952-9975 (2014).
  7. Yang, Y. M., Cho, Y. E., Hwang, S. Crosstalk between Oxidative Stress and Inflammatory Liver Injury in the Pathogenesis of Alcoholic Liver Disease. Int J Mol Sci. 23 (2), 774(2022).
  8. Quintero, P., et al. Bile acid supplementation improves established liver steatosis in obese mice independently of glucagon-like peptide-1 secretion. J Physiol Biochem. 70 (3), 667-674 (2014).
  9. Feng, Y., et al. Bear bile: dilemma of traditional medicinal use and animal protection. J Ethnobiol Ethnomed. 5, 2(2009).
  10. Song, G., et al. Potential therapeutic action of tauroursodeoxycholic acid against cholestatic liver injury via hepatic Fxr/Nrf2 and CHOP-DR5-caspase-8 pathway. Clin Sci (Lond). 137 (7), 561-577 (2023).
  11. Li, J., et al. Pharmacological studies on the comparison between the drainage and certified Fel Ursi. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 16 (12), 749-763 (1991).
  12. Allegri, F. Respect, Inherent Value, Subjects-of-a-Life Some. Reflections on the Key Concepts of Tom Regan's Animal Ethics. Relations Beyond Anthropocentrism. 7, 1-2 (2020).
  13. Underwood, L. S., Reynolds, P. Photoperiod and fur lengths in the arctic fox (Alopex lagopus L). Int J Biometeorol. 24 (1), 39-48 (1980).
  14. Wu, L., et al. Toxicological evaluation of porcine bile powder in Kunming mice and Sprague-Dawley rats. Front Pharmacol. 15, 1424940(2024).
  15. Chen, D. X., et al. Therapeutic Effects of Different Animal Bile Powders on Lipid Metabolism Disorders and Their Composition Analysis. Chin J Integr Med. 28 (10), 918-923 (2022).
  16. Liu, J., et al. Effect of Dietary Supplementation with Calcium, Phosphorus and Vitamin D(3) on Growth Performance, Nutrient Digestibility, and Serum Biochemical Parameters of Growing Blue Foxes. Animals (Basel). 12 (14), 1814(2022).
  17. Desiderio, D. M., Dass, C. The Measurement of Leucine Enkephalin at the Femtomole Level by Fast Atom Bombardment Mass Spectrometry/Mass Spectrometry Methods. Anal Lett. 19 (19-20), 1963-1971 (1986).
  18. Li, S., et al. Substitutes for Bear Bile for the Treatment of Liver Diseases: Research Progress and Future Perspective. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 4305074(2016).
  19. Ji, L., et al. Identification of bioactive compounds and potential mechanisms of Scutellariae Radix-Coptidis Rhizoma in the treatment of atherosclerosis by integrating network pharmacology and experimental validation. Biomed Pharmacother. 165, 115210(2023).
  20. Shi, J., Zhou, B., Ding, C. Study on the Chemical Components of Blue Fox Gall Powder. J Trad Chinese Med Herald. 31 (03), 83-88 (2025).
  21. Gómez, C., Stücheli, S., Kratschmar, D. V., Bouitbir, J., Odermatt, A. Development and Validation of a Highly Sensitive LC-MS/MS Method for the Analysis of Bile Acids in Serum, Plasma, and Liver Tissue. Metabolites. 10 (7), 282(2020).
  22. Wu, M., et al. Estimated projection of incidence and mortality of alcohol-related liver disease in China from 2022 to 2040: a modeling study. BMC Med. 21 (1), 277(2023).
  23. Bo, Z., Rui, W., Jingbo, J. Arctic fox bile can alleviate carbon tetrachloride-induced acute liver injury. Intl J Clin Exp Med. 9 (2), 5050-5055 (2016).
  24. Zhou, C. F., Gao, G. J., Liu, Y. Advances in studies on bear bile powder. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 40 (7), 1252-1258 (2015).
  25. Zhou, C. S., Yin, Z. Y., Zhao, W. X. Bear bile affects immunologic feature of hepatic stellate cells. J Hepatol Surg. 20 (3), 204-208 (2012).
  26. Wang, N., et al. A comparative study on the hepatoprotective action of bear bile and Coptidis Rhizoma aqueous extract on experimental liver fibrosis in rats. BMC Complement Altern Med. 12, 239(2012).
  27. Ratziu, V., et al. A randomized controlled trial of high-dose ursodesoxycholic acid for nonalcoholic steatohepatitis. J Hepatol. 54 (5), 1011-1019 (2011).
  28. Moorhouse, T. P., et al. Substitutes for wildlife-origin materials as described in China's "TCM" research literature. Global Ecol Conservation. 34 (April), e02042(2022).
  29. Steyn, W. J., Wand, S. J., Jacobs, G., Rosecrance, R. C., Roberts, S. C. Evidence for a photoprotective function of low-temperature-induced anthocyanin accumulation in apple and pear peel. Physiol Plant. 136 (4), 461-472 (2009).
  30. Intagliata, S., et al. Discovery of a Highly Selective Sigma-2 Receptor Ligand, 1-(4-(6,7-Dimethoxy-3,4-dihydroisoquinolin-2(1H)-yl)butyl)-3-methyl-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-one (CM398), with Drug-Like Properties and Antinociceptive Effects In Vivo. AAPS J. 22 (5), 94(2020).
  31. Contreras-Zentella, M. L., Villalobos-Garcia, D., Hernandez-Munoz, R. Ethanol Metabolism in the Liver, the Induction of Oxidant Stress, and the Antioxidant Defense System. Antioxidants (Basel). 11 (7), 1258(2022).
  32. Lala, V., Zubair, M., Minter, D. A. Liver Function Tests. , StatPearls Publishing. Treasure Island, FL. (2023).
  33. Seo, E., Kang, H., Choi, H., Choi, W., Jun, H. S. Reactive oxygen species-induced changes in glucose and lipid metabolism contribute to the accumulation of cholesterol in the liver during aging. Aging Cell. 18 (2), e12895(2019).
  34. Freitas, I. N., et al. Insights by which TUDCA is a potential therapy against adiposity. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1090039(2023).
  35. Lu, W., Xi, R., Huaiwu, H. Ursodeoxycholic acid (UDCA) reduces hepatocyte apoptosis by inhibiting farnesoid X receptor (FXR) in hemorrhagic shock (HS). Curr Mol Med. 23 (6), 550-558 (2022).
  36. Reyes-Gordillo, K., et al. Akt1 and Akt2 Isoforms Play Distinct Roles in Regulating the Development of Inflammation and Fibrosis Associated with Alcoholic Liver Disease. Cells. 8 (11), 1337(2019).
  37. Li, J., Guo, C., Wu, J. The Agonists of Peroxisome Proliferator-Activated Receptor-gamma for Liver Fibrosis. Drug Des Devel Ther. 15, 2619-2628 (2021).
  38. Dichtel, L. E., Cordoba-Chacon, J., Kineman, R. D. Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor 1 Regulation of Nonalcoholic Fatty Liver Disease. J Clin Endocrinol Metab. 107 (7), 1812-1824 (2022).
  39. Takahashi, Y. The Role of Growth Hormone and Insulin-Like Growth Factor-I in the Liver. Int J Mol Sci. 18 (7), 1447(2017).
  40. Feng, M., et al. Kupffer-derived matrix metalloproteinase-9 contributes to liver fibrosis resolution. Int J Biol Sci. 14 (9), 1033-1040 (2018).
  41. Ma, X. Y., et al. Ursolic acid reduces hepatocellular apoptosis and alleviates alcohol-induced liver injury via irreversible inhibition of CASP3 in vivo. Acta Pharmacol. 42 (7), 1101-1110 (2021).
  42. Taguchi, K., Fukami, K. RAGE signaling regulates the progression of diabetic complications. Front Pharmacol. 14, 1128872(2023).
  43. Lino Rodrigues, K., et al. Aerobic Exercise Training Improves Microvascular Function and Oxidative Stress Parameters in Diet-Induced Type 2 Diabetic Mice. Diabetes Metab Syndr Obes. 15, 2991-3005 (2022).
  44. Wilkening, S., Stahl, F., Bader, A. Comparison of primary human hepatocytes and hepatoma cell line Hepg2 with regard to their biotransformation properties. Drug Metab Dispos. 31 (8), 1035-1042 (2003).
  45. Takebe, T., et al. Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature. 499 (7459), 481-484 (2013).
  46. Goessling, W., Sadler, K. C. Zebrafish: an important tool for liver disease research. Gastroenterology. 149 (6), 1361-1377 (2015).

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