Este protocolo descreve um método passo a passo para dissecar, perfundir, colorir, imaginar e quantificar lesões ateroscleróticas em aortas de camundongos usando coloração Oil Red O.
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Artigo de método
Este protocolo descreve um método passo a passo para dissecar, perfundir, colorir, imaginar e quantificar lesões ateroscleróticas em aortas de camundongos usando coloração Oil Red O.
Os modelos de camundongos têm sido ferramentas fundamentais no estudo da aterosclerose, fornecendo informações críticas sobre os mecanismos moleculares e celulares subjacentes à formação de placas, metabolismo lipídico e inflamação cardiovascular. Além dos camundongos Apoe-/- ou Ldlr-/-, a injeção de AAV8-PCSK9D377Y em camundongos C57BL/6J normais com alimentação concomitante do tipo ocidental surge como um modelo comumente usado para pesquisa translacional em aterosclerose. A coloração Oil Red O é uma técnica fundamental para visualizar o acúmulo de lipídios neutros nos tecidos vasculares. Sua simplicidade, custo-efetividade e alta sensibilidade para detectar lesões carregadas de lipídios o tornam o padrão-ouro para avaliar a carga de placa aterosclerótica em estudos pré-clínicos. Neste estudo, fornecemos um protocolo detalhado e reprodutível para dissecção, perfusão, abertura longitudinal, coloração Oil Red O, imagem e quantificação semiautomatizada da carga aterosclerótica na aorta em face, sem a necessidade de pinos ou etapas complexas de montagem. Nossos resultados demonstram que a combinação de injeção de AAV8-PCSK9D377Y e alimentação com dieta do tipo ocidental induz efetivamente a formação significativa de lesões ateroscleróticas em camundongos, e que a coloração com óleo vermelho O é uma técnica confiável e eficiente para avaliar a deposição de lipídios e a carga de placa. Além disso, embora este protocolo seja otimizado para o modelo induzido por AAV8-PCSK9 em camundongos C57BL / 6J, ele pode ser prontamente adaptado para uso em outros modelos e espécies, como camundongos Apoe / -, camundongos Ldlr / - e hamsters sírios dourados Ldlr / -.
A aterosclerose, marcada pela deposição de lipídios e inflamação na íntima arterial, representa a base patológica da doença arterial coronariana e de uma ampla gama de doenças cardiovasculares (DCV), incluindo infarto do miocárdio e acidente vascular cerebral 1,2,3,4. As DCV continuam sendo a principal causa de morbidade e mortalidade em todo o mundo, representando um fardo econômico e de saúde global significativo 3,5. Como a principal base patológi....
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Todos os procedimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes descritas no NIH e foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal da Universidade de Ciência e Tecnologia da China (Aprovação Ética No. USTCACUC27120124102).
NOTA: Todos os procedimentos envolvendo AAV8-PCSK9 devem ser conduzidos em um gabinete de segurança biológica certificado Classe II sob condições de Nível de Biossegurança 2 (BSL-2). O pessoal deve usar equipamento de proteção individual (EPI) adequado, incluindo jaleco, luvas descartáveis e óculos de segurança.
1. Indução de aterosclerose em c....
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Para avaliar a extensão da deposição de lipídios na parede da aorta, a coloração com óleo vermelho O foi realizada em aortas isoladas de camundongos machos C57BL / 6J injetados com AAV8-PCSK9D377Y e alimentados com uma dieta ocidental por 12 semanas, juntamente com camundongos controle pareados por idade. Após perfusão sistêmica com PBS e dissecção cuidadosa, todas as aortas foram cuidadosamente dissecadas longitudinalmente e coradas com Oil Red O para visualizar lesões ateroscleróticas carregadas de lipídios........
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O método de coloração com óleo vermelho O em face descrito neste estudo oferece uma abordagem robusta, reprodutível e eficiente em termos de tempo para avaliar a carga de lesão aterosclerótica em toda a aorta. Neste estudo, selecionamos especificamente o arco aórtico e a aorta torácica como as regiões de interesse para a análise da placa, em vez de toda a aorta. Esta decisão foi guiada pela natureza do modelo AAV8-PCSK9D377Y 20, que normalmente produz f.......
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Os autores não têm nada a divulgar.
Este estudo foi apoiado por doações da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (Grant Nos. 82370444).
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| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Camundongos C57BL/6J | GemPharmatech | Nº N000013 | |
| 4% de paraformaldeído | Beyotime | P0099 | Para fixar tecidos |
| AAV8-PCSK9D377Y partículas virais | Wzbio | pAV208001 | Para induzir aterosclerose |
| Pinça Fina | Ferramentas de Ciências Finas | No. 11254-20 | Para dissecção da aorta |
| ImageJ | NIH | 1.47 | |
| Isopropanol | Sangon biotech | A600918 | Para limpar o excesso de óleo vermelho |
| Óleo Vermelho O 0,5% Solução em isopropanol | Poly Scientific R& D Corp | S1849-32OZ | Para coloração O vermelho óleo |
| Solução salina tamponada com fosfato | Servicebio | G4202 | Para perfusão e limpeza de aortas Tesoura de |
| mola | Ferramentas de ciência fina | No. 15003-08 | Para dissecção de aorta |
| Microscópio estereoscópico | Mshot | MZ62 | Para dissecção de aorta e imagem |
| Dieta ocidental | Pesquisa | Dieta D12108C | Para induzir aterosclerose |
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