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Artigo de método

Método para Privação Seletiva de Sono REM usando o Movimento Setivo do Nariz para Esquecer o REM (SNiFFer)

219 vistas

DOI:

10.3791/69042

21 de abril de 2026

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Autores correspondentes: Masanori Sakaguchi <masakagu@med.kobe-u.ac.jp>

Neste artigo

Resumo

Apresentamos um protocolo inovador para a privação seletiva do sono Rapid Eye Movement (REM) em roedores.

Resumo

O sono é amplamente categorizado em estágios de Movimento Rápido Ocular (REM) e não-REM, e várias técnicas de privação de sono foram desenvolvidas para estudar suas funções. Métodos tradicionais — como estimulação mecânica ou deixar o animal cair durante o sono REM — frequentemente levam a uma rápida habituação e efeitos não intencionais do estresse, dificultando a interpretação. Aqui, apresentamos um método novo, leve e gentil para privação de sono REM em roedores: SNiFFer. Sabe-se que roedores são altamente sensíveis a estímulos nasais. Nesse método, um pincel macio acaricia suavemente o nariz do animal durante o sono REM, desencadeando a excitação de forma confiável. Para aplicar seletivamente essa técnica durante o sono REM, utilizamos um sistema de classificação de estágios do sono baseado em IA em tempo real por Eletroencefalografia (EEG). A intervenção foi acionada apenas durante episódios de REM, e um grupo controle com jugo foi incluído, recebendo o mesmo padrão de estimulação independentemente do estado de sono. Aplicamos ainda SNiFFer em um paradigma de Condicionamento de Medo Traçado para testar se a privação de sono REM dentro de 6 horas após o aprendizado interfere na consolidação da memória. Comparados aos controles com jugo, os animais tratados com SNiFFer apresentaram uma diminuição significativa no total de episódios de REM e na duração dos episódios de REM, indicando a especificidade e eficácia do método. Em conclusão, a técnica SNiFFer oferece uma abordagem tátil altamente seletiva e minimamente invasiva para privação de sono REM em camundongos. Ele permite o controle preciso das condições experimentais e abre novas possibilidades para investigar o papel do sono REM na memória e cognição — com um toque delicado.

Introdução

O sono com movimento rápido dos olhos (REM) desempenha um papel fundamental em processos cognitivos como a consolidação damemória 1,2. Para investigar a importância funcional do sono REM no cérebro, a privação de sono REM é comumente empregada como uma abordagem experimental. Atualmente, quatro métodos principais são amplamente usados para induzir privação de sono REM em roedores: o método do discogiratório 1, o método do vasode flores 3, o método do soprode ar 4 e as técnicas de estimulação

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Protocolo

Todos os experimentos com animais foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Tsukuba. Ratos machos e fêmeas C57BL/6J (11–13 semanas de idade, 20–35 g) foram usados neste estudo. A lista completa de materiais e instrumentos utilizados neste estudo está fornecida na Tabela de Materiais.

1. Implantação cirúrgica de eletrodos de EEG17

  1. Anestesia e preparação do animal
    1. Induza anestesia com 4% de isoflurano misturado com ar em 3 minutos. A anestesia adequada foi confirmada pela ausência do ....

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Resultados

Implantação cirúrgica de eletrodos de EEG
Os camundongos devem ser totalmente anestesiados durante a cirurgia. Se apresentarem sinais de falha da anestesia, como dificuldade, devem ser removidos do protocolo. Da mesma forma, se o sangramento durar mais de 10 segundos, pode causar danos graves ao cérebro do camundongo, e recomenda-se a remoção da experimentação. Após a cirurgia, a maioria dos camundongos normalmente acorda em até 1 hora. A marcha e o movimento ocular d.......

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Discussão

Esse protocolo permite privação seletiva de sono REM em camundongos com camundongos controle em jugo. Ao contrário de métodos tradicionais como o vaso de flores e as técnicas de disco rotativo, esse sistema permite a implementação de grupos de controle finamente alinhados, nos quais os animais recebem estimulação idêntica no mesmo momento circadiano. Além disso, essa abordagem minimiza a variabilidade na localização da estimulação, uma limitação comum dos métodos convencionais de manusei.......

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Divulgações

Os autores declaram não haver interesses concorrentes.

Agradecimentos

Agradecemos a Y. Nakata pela classificação do estágio do sono. Agradecemos a todos os membros do IIIS. Este trabalho é apoiado por bolsas de AMED JP21zf0127005, JP21km0908001, JP23wm0525003, Sociedade Japonesa para a Promoção da Ciência (JSPS) (26H02428, 24H00894, 23H02784, 22H00469, 16H06280 para M.S., 23K19393 e 24K18212 para I.K., 25KJ0664 para C.K., 24H00893 para T.N.), e Fundação Ciência Takeda.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
5% de glicoseOtsukba35061410
Cabeçalho de 6 pinosHirose172-0989
AdesivoKonishi16351
Máquina anestésicaShinano SeisakushoSN-487-0T
Revestimento de crimpaduraHirose688-9095
Soquete de crimpaduraHirose688-8982
Freezeflame4Associados de MedicinaRRID:SCR_014429Versão 4.104
GraphPad PrismaGraphPadRRID:SCR_002798Versão 10.5.0
IbuprofenoIndústria Química de TóquioI0415
IsofluranoViatris901036504
Loctite454HenkelUFI:  MAK2-7WRP-G202-F235
Rato (C57BL/6J)O Laboratório JacksonRRID: IMSR_JAX:00066411,0 - 13,0 semanas de idade na sessão de condicionamento do medo
PincelNamurataiseidou4943668000448SDflat nº 8, comprimento da ponta: 8,2 mm; Largura: 18,8 mm
Líquido ProviniceShofu21400BZZ00451000250 mL
Pó ProviniceShofu21400BZZ00451000250 g
SleepSignRecorderKISSEI COMTECRRID:SCR_018200Versão 1.2.10
Parafuso de aço inoxidávelYamazakiN/Aφ 1.0 e vezes; 2.0
Instrumentos Estereotaxicos PadrãoALA Scientific68038
Óleo de girassolSigma-AldrichS5007-250ML
Petrolato brancoTaiyo PharmaceuticalK09-TS

Referências

  1. Karni, A., Tanne, D., Rubenstein, B. S., Askenasy, J. J. M., Sagi, D. Dependence on REM Sleep of Overnight Improvement of a Perceptual Skill. Science. 265, 679-682 (1994).
  2. Stickgold, R., James, L., Hobson, J. A. Visual discrimination learning requires sleep after training. Nat Neuros....

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Reimpressões e permissões

Etiquetas

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