Mecanismo da Decocção Jianpi Shengxue no alívio da mielosupressão induzida por ciclofosfamida em camundongos

Summary

Este protocolo elucida sistematicamente como a decocção Jianpi Shengxue mitiga a mielosupressão induzida por ciclofosfamida por meio de uma abordagem integrada de farmacologia em rede e experimentos em animais, revelando seus mecanismos multi-alvo e potencial como terapia adjuvante.

Abstract

O artigo tem como objetivo investigar como a Decocção Jianpi Shengxue (JPSXD) alivia a mielossupressão induzida pela quimioterapia por meio de farmacologia em rede e experimentos com animais. Para isso, componentes-chave e alvos foram analisados, e a Rede de Interação Proteína-Proteína (PPI) e redes erva-componente-alvo foram construídas. A Gene Ontology (GO) e o enriquecimento da Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) identificaram as principais vias. Um modelo de miossupressão induzido por ciclofosfamida (CTX) foi estabelecido em 60 camundongos C57/BL6. O JPSXD foi administrado em doses diferentes por 7 dias. Foram avaliados hemogramas periféricos, citocinas (trombopoietina [TPO], eritropoietina [EPO], fator estimulante de colônias de granulócitos e macrófagos [GM-CSF]), índice do timo, morfologia da medula óssea, células CD34+ e expressão de AKT1, JAK2 e EGFR. A análise de rede identificou 172 compostos e 454 alvos, destacando as vias PI3K-Akt e JAK-STAT. In vivo, CTX reduziu os níveis de leucócitos e proteínas sinalizadoras, enquanto o JPSXD restaurou as contagens, aumentou o AKT1, JAK2 e EGFR, e melhorou o índice do timo (p < 0,05). JPSXD em doses médias e altas aumentaram TPO, EPO, GM-CSF, CD34⁺ e melhoraram a estrutura da medula óssea, sendo a dose alta o que mostrou o efeito mais forte. De forma conclusiva, o JPSXD alivia a mielosupressão por meio da regulação multi-alvo e múltiplas vias, apoiando seu potencial como terapia auxiliar para leucopenia induzida pela quimioterapia.

Introduction

A quimioterapia é uma pedra angular no tratamento de várias malignidades, principalmente inibindo a proliferação e a sobrevivência das células^{cancerígenas 1,2}, ampliando assim a sobrevivência do paciente. No entanto, devido à falta de seletividade no direcionamento dos tecidos normais, os medicamentos quimioterápicos frequentemente causam danos graves a células e tecidos saudáveis, levando a uma série de efeitos^{adversos 3}. Um dos efeitos colaterais mais comuns e graves da quimioterapia é a mielosupressão, caracterizada pela redução da produção de glóbul....

Protocol

Todos os experimentos com animais foram realizados em estrita conformidade com o Regulamento de Administração de Animais de Laboratório e as diretrizes éticas do Centro de Animais Experimentais do Hospital de Câncer de Hunan. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética Animal do Hospital de Câncer de Hunan (Nº de Aprovação: KNZY-202416). Ao longo do estudo, os pesquisadores fizeram todo o possível para minimizar o número de animais usados e aliviar seu sofrimento.

Preparação animal
Um total de 60 camundongos machos C57/BL6 de 10 semanas foi obtido da Hunan Slack Jingda Labora....

Results

Análise de farmacologia de redes
Identificação de compostos e alvos ativos
Primeiro identificamos os compostos marcadores principais de cada erva no JPSXD com base na literatura paragarantir uma seleção abrangente³⁴. Especificamente, consultando as entradas farmacopeicais das ervas relevantes (por exemplo, Panax ginseng, Astragalus membranaceus, Angelica sinensis), compilamos uma lista do.......

Discussion

Em meio ao aumento da incidência global de câncer, a comunidade médica enfrenta dois desafios: não apenas o tratamento do câncer em si, mas também o manejo dos efeitos colaterais associados, entre os quais a mielosupressão é uma reação adversa particularmente comum^{e grave 43}. Este estudo investigou sistematicamente o papel e os potenciais mecanismos do JPSXD no alívio da mielosupressão induzida por CTX em camundongos, empregando uma combinação de farmacologia em r.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% Paraformaldeído (PFA)	Sigma-Aldrich	P6148
AKT (panela) Coelho mAb	Tecnologia de Sinalização Celular	#4691
Lavadora Automática de Microplacas	BioTek (Agilent)	ELx405
Analisador Autohematológico BC-2800vet	Mindray	BC-2800vet
Microtomo de crióstato	Thermo Fisher Scientific	CryoStar NX50
Injeção de ciclofosfamida	Baxter Oncology GmbH	N/A (Lote: HJ20160467)
Microscópio E100	Nikon	E100
Anticorpo EGFR (A-10)	Santa Cruz Biotecnologia	SC-373746
Máquina de Embedding	Leica	EG1150
EPO (Mouse) ELISA Kit	R& Sistemas D	MEP00B
Anticorpo Policlonal GAPDH Rabbit	Proteintech	10494-1-AP
GM-CSF (Mouse) ELISA Kit	R& Sistemas D	MMC00B
Cabra Anti-Coelho IgG HRP-conjugado	Jackson ImmunoResearch	111-035-003
H& Kit de Coloração E	Sigma-Aldrich	HT10
Centrífuga Refrigerada de Alta Velocidade	Thermo Fisher Scientific	Sorvall ST 16R
Moedora de tecidos de alta capacidade	Servicebio	KZ-II
Caneta de Imunohistoquímica	Laboratórios Vector	H-4000
JAK2 Rabbit mAb	Abcam	ab108596
Decocção Jianpi Shengxue (JPSXD)	Farmácia do Hospital de Câncer de Hunan	Formulação personalizada
Leitor de Microplacas	BioTek (Agilent)	Sinergia H1
Soro fisiológico normal	Baxter	2B1324X
Microtomo Rotativo	Leica	RM2016
Processador de tecidos	Leica	ASP300S
TPO (Mouse) ELISA Kit	R& Sistemas D	MTP00B
Misturador de vórtices	Servicebio	MX-F