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Artigo de método

Preparação de tecidos neovasculares de tecidos de glioma humanos para análise proteômica quantitativa da angiogênese tumoral

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DOI:

10.3791/69547

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20 de março de 2026

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1Shandong Provincial Key Laboratory of Precision Oncology, Shandong Cancer Hospital and Institute, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 2Shandong Provincial Key Medical and Health Laboratory of Ovarian Cancer Multiomics, & Jinan Key Laboratory of Cancer Multiomics, Shandong First Medical University & Shandong Academy of Medical Science, 3School of Medicine, Wayne State University, 4Department of Pathology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 5Hunan Clinical Medical Research Center for Cancer Pathogenic Genes Testing and Diagnosis,, 6Department of The 1st General Surgery, The Third Xiangya Hospital, Central South University

Neste artigo

Resumo

Esse protocolo preparou com sucesso tecido neovascular de alta qualidade suficiente a partir de amostras de glioma usando microdissecação por captura a laser para análise proteômica quantitativa da angiogênese tumoral, superando as limitações de estudos que tradicionalmente focam principalmente em fatores angiogênicos e fornecendo um perfil proteômico em larga escala da angiogênese do glioma.

Resumo

O glioma representa tumores malignos primários do sistema nervoso central com incidência e mortalidade significativas. A angiogênese tumoral é a marca registrada da fisiopatologia do glioma e é um evento importante no ambiente tumoral. A estrutura aberrante da neovascularização tumoral desempenha funções duplas: fonte de suprimento de nutrientes e portal metastático que permite a invasão celular tumoral na corrente sanguínea. A terapia antiangiogênese é um tema quente no campo do câncer. A maioria dos estudos anteriores foca nos fatores ativadores e inibitórios da angiogênese tumoral; No entanto, isso só esclarece a angiogênese tumoral em uma faixa muito limitada. A expressão anormal de proteínas ou modificações pós-traducionais contribuem para a morfologia anormal dos vasos sanguíneos no glioma. Esse protocolo utilizou microdissecação por captura a laser (LCM) para isolar e purificar uma quantidade adequada de tecidos neovasculares de tecidos gliomacos, sendo usada para análise quantitativa de proteômica marcada com isótopos para identificar proteínas diferencialmente expressas em tecidos neovasculares de glioma em comparação com os controles. Esses dados fornecem uma base científica crucial para elucidar os mecanismos patológicos da angiogênese tumoral, descobrir alvos terapêuticos anti-angiogênicos e construir biomarcadores baseados em angiogênese tumoral.

Introdução

Gliomas são tumores altamente heterogêneos do sistema nervoso central (SNC) originados de células gliais que fornecem suporte estrutural e metabólico aosneurônios 1, e são histologicamente classificados em subtipos: astrocitomas, oligodendrogliomas e ependimomas2. De acordo com o sistema de classificação da OMS, gliomas de grau I e II são os gliomas de baixo grau (LGG), tipicamente caracterizados por taxas de crescimento lentas e potencial estabilidade a longo prazo, frequentemente passíveis de resseção cirúrgica com base na localização anatômica. Em contraste, os graus III e IV são os gliomas de alto grau (HGG), predominantemente indiferenciados e malignos, com comportamento altamente invasivo e prognósticoruim 3. Os tratamentos atuais continuam limitados e em grande parte ineficazes; Embora a resseção máxima segura combinada com radioterapia/quimioterapia pós-operatória melhore moderadamente o prognóstico, limitações e toxicidades significativas persistem devido ao crescimento infiltrativo difuso dos tumores e aos limites indistintos que impedem ressecção radical 4,5. Gliomas humanos, especialmente os de alto grau de glioma, são tumores malignos altamente vasculares cujo crescimento, proliferação e invasão dependem fortemente de sua neovascularização anormal, que é uma característica crítica da malignidadedo glioma 6,7. O estudo de angiogênese tumoral direcionada possui méritos científicos significativos para avanços terapêuticos.

A angiogênese envolve fundamentalmente a proliferação, migração e diferenciação das células endoteliais sob estímulos específicos, com pesquisas focadas em reguladores: (i) indutores, incluindo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF)8, vasorina (VASN)9, fator indutor de hipóxia 1 (HIF1)10, fator de crescimento transformante β (TGF-β)11, endocan12, fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF)13 e fator de crescimento epidérmico (EGF)14; e (ii) inibidores, incluindo angiostatina15,endostatina 16, receptor do fator ativador de plaquetas-1 (TSP-1)17 e inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMPs)18. Em ensaios clínicos de fase I/II/III sobre tumores cerebrais, a maioria dos medicamentos antiangiogênicos direciona a sinalização do VEGF devido ao seu papel central na angiogênese, exemplificado pelo bevacizumabe, um anticorpo monoclonal que inibe a neovascularização através do bloqueioVEGF 19,20,21. No entanto, ensaios recentes de fase II/III não mostraram benefício significativo em sobrevivência geral para pacientes com glioblastoma avançado que receberam bevacizumabe mais lomustina versus lomustinasozinha 19,20,21,22. De forma crítica, a terapia anti-VEGF melhora as anormalidades vasculares, mas suprime apenas a angiogênese sem citotoxicidade tumoral direta e pode induzir resistência ao tratamento. Consequentemente, mirar um ou alguns reguladores angiogênicos não alcança uma cura radical; Estratégias eficazes exigem supressão simultânea da angiogênese e bloqueio da invasão tumoral e metástase por meio de vias vasculares. O valor diagnóstico e prognóstico das proteínas em gliomas está bem estabelecido, embora o tratamento do glioma maligno tenha apresentado progresso limitado ao longo das décadas.

A proteômica pode analisar globalmente todas as proteínas em amostras biológicas, incluindo perfis de expressão, modificações pós-traducionais (PTMs) e interações, com técnicas baseadas em espectrometria de massa (EM), incluindo abordagens top-down (TDP) e bottom-up (BUP). A EM de alto rendimento permite a identificação de dezenas de milhares de proteínas por prova, tornando-a essencial para estudar mecanismos tumorais e identificar alvos terapêuticos. A abundância de proteínas e seus PTMs podem ser identificados em tecidos de glioma e biópsias líquidas, como sangue e seusderivados 23,24,25, líquido cefalorraquidiano26 eurina 27. Para a vasculatura tumoral, expressões anormais de proteínas e PTMs impulsionam alterações vasculares patológicas. As alterações proteicas na neovascularização do glioma podem ser identificadas com a proteômica, que impulsiona o desenvolvimento de protocolos para um perfil proteômico confiável da neovascularização do glioma.

No entanto, os tecidos neovasculares são apenas um dos componentes em todo o tecido glioma. O isolamento e a purificação dos tecidos neovasculares de todo o tecido glioma é o passo fundamental para uma análise precisa da proteômica quantitativa da angiogênese do glioma. A microdissecação por captura a laser (LCM)28,29,30,31 é uma abordagem eficaz para isolar e purificar tecidos neovasculares de tecidos inteiros de glioma. É muito difícil obter uma quantidade suficiente de proteínas do tecido neovascular para proteômica quantitativa. Em 2007, uma equipe de pesquisa tentou usar a LCM para separar tecidos neovasculares do glioma grau IV para análise proteômica, que identificou apenas quatro proteínas comEM 32. Posteriormente, em 2012, eles usaram continuamente LCM para enriquecer tecidos neovasculares de gliomas grau IV para análise proteômica quantitativa, que identificou apenas 29 proteínas comEM 33. Esses dois estudos de proteômica de angiogênese do glioma mostram um fluxo proteômico muito baixo na angiogênese do glioma, que não pode representar a paisagem proteômica complexa da angiogênese do glioma.

Esse protocolo desenvolveu um procedimento que permite a aquisição de quantidades suficientes de proteínas neovasculares para análise proteômica quantitativa da angiogênese do glioma, construindo assim uma paisagem proteômica em grande escala da angiogênese tumoral. Isso tem mérito científico significativo para a descoberta de biomarcadores eficazes baseados em angiogênese e alvos/fármacos terapêuticos anti-angiogênese.

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Protocolo

Esse protocolo envolvendo amostras de tecido humano foi aprovado pelo Comitê de Revisão de Ética Médica da Primeira Universidade Médica de Shandong (aprovação nº R202211090133), e o consentimento informado foi obtido dos pacientes e da família dos pacientes. As amostras de glioma usadas neste estudo foram todas obtidas de amostras ressecadas neurocirúrgicas do departamento de neurocirurgia do Hospital Xiangya da Central South University, incluindo 7 casos de tecidos de astrocitoma grau III. Os vasos controle normais (n = 3) foram retirados de microvasos dentro do tecido cerebral danificado removido devido a um trauma cerebral. Todos os pacientes eram pacientes de primeira viagem sem radioterapia ou quimioterapia prévia antes da cirurgia, e todos foram diagnosticados pelo departamento de patologia do Hospital Xiangya, Universidade Central Sul. Três tecidos vasculares normais de controle são obtidos a partir da resseção neurocirúrgica de vasos sanguíneos muito pequenos de danos cerebrais normais causados por força externa (sem glioma) no Hospital Xiangya. Os reagentes e os equipamentos utilizados estão listados na Tabela de Materiais.

1. Uso de LCM para isolar tecidos neovasculares de tecidos gliomas humanos

  1. Prepare lâmina LCM: Revestir manualmente a membrana de polietileno naftalato (PEN) em lâminas metálicas reutilizáveis e armazenar lâminas revestidas a -80 °C.
    NOTA: Slides metálicos pré-revestidos serão usados para aderir diretamente as seções de tecido congelado.
  2. Prepare solução de coloração com azul de toluidina (0,5%): Dissolve 0,25 g de azul de toluidina em 40 mL ddH₂O. Adicione um comprimido inibidor de protease e misture até dissolver totalmente. Ajuste o volume para 50 mL com ddH₂O, filtre e armazene no gelo.
  3. Tecido de processo: Mantenha o crióstato na temperatura de operação (câmara de -25 °C/cabeça da amostra). Retirar tecido de glioma do armazenamento a -80 °C, transferir no gelo, remover o sangue com papel filtrante e selecionar blocos de tecido apropriados para incorporação.
  4. Protocolo de embedde tissue: Disco pré-resfriado da amostra. Aplique o meio de embedding e emprise rapidamente o bloco de tecido. Congele o bloco inteiro a -25 °C por 10 minutos para endurecer.
  5. Tecido de seção e vasos de trila: tecidos de seção com espessura de 8 μm. Monte seções de tecido em lâminas padrão, tinga tecido com solução de coloração azul de toluidina e cribide vasos neovasculares sob microscopia óptica.
    NOTA: Se não forem detectados vasos, descarte de 3 a 5 seções de tecido e repita o ciclo de coloração até que apareçam regiões vasculares neovasculares.
  6. Monte a seção de tecido vaso-positivo na lâmina LCM preparada: Transfira seções vaso-positivas para lâminas LCM revestidas com PEN, vede, rotule e armazene a -80 °C.
  7. Fixar seções de tecido montadas em lâmina de LCM em etanol pré-resfriado a 70% (4 °C, 1–2 min); drenar e tingir em 0,5% de azul de toluidina (4 °C, 30 s); Enxágue o dreno, enxágue duas vezes em ddH₂O (4 °C; dois banhos de lavagem separados), escorra, incube em solução inibidora de protease (30 s) e armazene a -80 °C.
  8. Inicie o instrumento LCM com antecedência, pré-aqueça por 30 minutos, use um laser infravermelho de estado sólido para pré-aquecer por mais 30 minutos e então instale um dispositivo de coleta de tubo de microcentrífuga de 500 μL.
  9. Carregue as fatias de LCM montadas na amostra de tecido (armazenadas a -80 °C) no instrumento LCM preparado e ajuste o foco nos vasos neovasculares nos tecidos gliomas com a ajuda do software compatível.
  10. Delinee com precisão a linha de marcação a laser ao longo da borda externa do vaso neovascular (evite a parede vascular), use o laser para queimar e separar os vasos neovasculares, e então colete-os na tampa do tubo EP.
    NOTA: Use a segunda queimadura a laser para garantir que os vasos neovasculares tenham se desprendido completamente.
  11. Inverta e sele o tubo coletado de vasos neovasculares coletado e armazene-o em um freezer a -80 °C.

2. Extração de proteínas de tecidos neovasculares de glioma isolados por LCM e quantificação do conteúdo proteico

  1. Prepare um tampão de extração proteica contendo 4% de dodecilsulfato de sódio (SDS), 1 mM de ditiotreitol (DTT) e 150 mM de Tris-HCl (pH 8,0).
    NOTA: SDS é uma poeira perigosa que irrita severamente olhos, pele e o trato respiratório, sendo que deve ser pesada em uma exausteira de fumaça; e o DTT é um irritante, que deve ser pesado em uma exaustão.
  2. Resuspenda tecidos de glioma neovascular coletados pelo LCM no tampão de extração. Sonice em banho de água gelada por 1 minuto para lisis completa.
  3. Centrifuge a 16.000 x g por 10 minutos e transfira o sobrenadante para novos tubos de microcentrífuga.
  4. Sobrenadante mínimo aliquota para quantificação de proteínas. Adicione DTT ao sobrenadante restante (concentração final: 1 mM de DTT), misture suavemente pipetando para evitar bolhas. Aliquota e armazene a -80 °C.
  5. Realize o ensaio proteico do ácido bicinconínico (BCA) seguindo os passos abaixo:
    1. Prepare a solução de trabalho (Reagente A:B = 50:1).
    2. Prepare a albúmina sérica bovina (BSA) padrão (0,5 mg/mL).
    3. Adicione as soluções correspondentes de acordo com a Tabela 1.
    4. Misture amostras/padrões com a solução de trabalho e transfira para uma placa de 96 poços.
    5. Incube a 37 °C por 30 minutos.
    6. Meça a absorção a 562 nm.
    7. Calcule as concentrações em relação à curva padrão.

3. Uso da proteômica quantitativa para analisar as proteínas neovasculares preparadas

  1. Prepare amostras de peptídeos trípticos das proteínas neovasculares extraídas.
    1. Adicione acetona gelada a cada amostra de proteína extraída (tumor; controle) (amostra: acetona = 1:5, v/v), misture bem e incube a -20 °C por 1 hora. Centrifuge a 12.000 x g (4 °C) por 15 minutos. Descarte o sobrenadante para remover reagentes de extração proteica (SDS, DTT e Tris-HCL) e ressuspenda o pellet em tampão de dissolução de 20 μL com 1 μL 1% de SDS.
      NOTA: Use acetona com ventilação adequada enquanto usa óculos de segurança, mantenha-se longe de fontes de ignição e descarte resíduos em um recipiente dedicado à prova de faíscas.
    2. Adicione 2 μL de reagente redutor (DTT) a cada amostra, misture bem e incube a 60 °C por 1 hora. Adicione 1 μL de reagente bloqueador de cisteína (iodoacetamida) e depois incube em temperatura ambiente por 10 minutos.
    3. Adicione tripsina (proteína: tripsina = 20:1, v/v) a cada amostra. Misturar vórtices e incubar a 37 °C durante a noite.
  2. Use targs isobáricos para reagentes de quantificação relativa e absoluta (iTRAQ) para marcar os peptídeos trípticos preparados.
    NOTA: Neste protocolo, reagentes iTRAQ de seis plex (tags plex 113, 114, 115, 116, 117 e 118) são usados para marcar amostras de peptídeos trípticos (tumor; controle), cada tipo de amostra é marcado três vezes (Tabela 2).
    1. Reconstitua cada tubo do reagente iTRAQ com isopropanol de 50 μL.
    2. Adicione amostras de peptídeos trippticos aos tubos de reagente correspondentes, incube em temperatura ambiente por 1 hora.
    3. Termine as reações adicionando 3× volume de água ultrapura e depois incube por 30 minutos em temperatura ambiente.
    4. Igualmente reúna as seis amostras rotuladas, misture cuidadosamente e liofilize.
  3. Use troca cátiônica forte (SCX) para fracionar a amostra de peptídeo tríptico marcada com iTRAQ.
    1. Reconstituir peptídeos liofilizados em 2 mL da Solução A (10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2,7). Carregue sobre uma coluna de troca catiônica funcionalizada por sulfoetil (4,6 × 100 mm, 5 μm, 200 Å).
    2. Eluto com vazão constante de 1 mL/min usando a solução B (500 mM KCl, 10 mM KH₂PO₄, 25% ACN, pH 2,7): 0 %→10% (2 min) → 10 %→20 % (25 min) → 20 %→45 % (5 min) → 50 %→100 % (5 min). Monitore a 214 nm durante todo o processo, colete cada minuto por tubo, totalizando 30 frações.
    3. Concentre cada fração por centrifugação a vácuo e depois reconstitua com 40 μL de ácido trifluoroacético (TFA) de 0,1% (v/v). Todas as 30 frações são armazenadas em um freezer a -80 °C.
      NOTA: A TFA é altamente corrosiva e tóxica, causa danos severos à pele e aos olhos, e irrita o sistema respiratório; deve ser manuseada em uma exaustão com EPI apropriado, incluindo luvas resistentes a ácido, óculos de proteção e jaleco, e os resíduos devem ser coletados como resíduos ácidos.
  4. Use LC-MS/MS para analisar cada amostra de peptídeo fracionado.
    1. Use um cartucho de extração de fase sólida C18 em fase reversa (densidade padrão, iD de cama 7 mm, volume 3 mL) para dessalinizar.
    2. Use uma coluna de cromatografia líquida (LC) de fase reversa C18 (10 cm de comprimento, 75 μm de i.d., resina de 3 μm) para eluir 10 μL de cada fração com a solução C (0,1% ácido fórmico) e um gradiente da solução D (80% acetonitrila e 0,1% ácido fórmico) a uma taxa de 250 nL/min por 140 min.
    3. Online, insira os peptídeos separados por LC em um espectrômetro de massa de alta resolução para análise MS/MS.
    4. Converta arquivos raw spectrum (.raw) gerados pelo Q Exactive para o formato .mgf com o Proteome Discoverer 1.4, e então envie esses arquivos .mgf para o servidor MASCOT 2.2, o módulo embutido do software para busca em banco de dados.
      NOTA: O banco de dados humano Uniprot (146.704 sequências no total; baixado em 20 de julho de 2025, de http://www.uniprot.org) é utilizado com parâmetros detalhados de busca (Tabela 3).
    5. Recupere os arquivos de busca resultantes (.dat) do servidor MASCOT de volta para o Proteome Discoverer 1.4. Dados para filtração com um limiar de taxa de falsa descoberta (FDR) de <0,01 para obter identificações de alta confiança.
    6. Identifique a sequência de aminoácidos da proteína com dados de EM/MS, quantifique a abundância de proteínas com intensidades de íons repórteres iTRAQ.
    7. Calcule a reprodutibilidade experimental para determinar o valor de corte das proteínas diferencialmente expressas (DEPs) mais uma significância p<0,05.
      NOTA: Neste estudo, o valor de corte é determinado como fold-change (FC) > 1,4, o que pode eliminar efetivamente os erros sistemáticos.
  5. Analise as características funcionais dos DEPs neovasculares de glioma.
    1. Acesse a página inicial do DAVID (Banco de Dados para Anotação, Visualização e Descoberta Integrada, versão 6.7; https://david.ncifcrf.gov/) e selecione Iniciar Análise na barra de menu para iniciar a análise.
    2. Selecione o painel esquerdo que serve como interface de upload; insira IDs de proteínas ou genes na caixa de entrada do Passo 1 conforme solicitado (utilizando a funcionalidade de copiar e colar).
    3. Para a Etapa 2, selecione o tipo de identificador correspondente às proteínas enviadas; este estudo utilizou o UniProt Accession.
    4. Para a Etapa 3, selecione a lista de genes ou configurações de fundo: A análise de enriquecimento gênico requer a escolha de um conjunto de genes de fundo. O sistema utiliza por padrão o genoma completo da espécie, ou os usuários podem enviar uma lista personalizada de proteínas/genes como contexto.
    5. Clique em Enviar Lista para enviar as inscrições e iniciar a análise.
      NOTA: Os resultados da análise são exibidos no lado direito do painel "Resultados do Resumo de Anotação". Os usuários podem selecionar resultados conforme as necessidades analíticas; este estudo utilizou especificamente a lista de GOTERM_BP_FAT para analisar processos biológicos envolvendo DEPs.
    6. Obtenha processos biológicos (BPs), componentes celulares (CCs), funções moleculares (MFs) e vias KEGG para DEPs neovasculares de glioma.

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Resultados

Uma quantidade suficiente de amostras de proteína isoladas em LCM foi obtida para proteômica quantitativa

Para obter perfis proteômicos confiáveis de proteínas diferencialmente expressas em tecidos neovasculares de glioma, este estudo selecionou o subtipo de glioma mais prevalente, astrocitoma Grau III, e tecidos neovasculares isolados usando LCM devido à disponibilidade de vasos neovasculares enriquecidos. Além disso, a proteômica quantitativ...

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Discussão

A LCM combinada com proteômica quantitativa de marcação isotópica identificou o primeiro perfil proteômico em larga escala da angiogênese do glioma

A angiogênese tumoral é uma característica patológica crítica dos gliomas, estando intimamente associada à sua alta invasividade e resistência terapêutica 6,7. Terapias antiangiogênicas tradicionais (como os inibidores do VEGF) apresentam e...

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Divulgações

Os autores declaram não haver interesses concorrentes.

Agradecimentos

Esse trabalho foi apoiado pelos Fundos Nacionais de Ciência da Natureza da China (81272798 a X.Z. e 82203592 a N.L.), pela Fundação Provincial de Ciências Naturais de Shandong (ZR2022QH112 a N.L.), pelos Fundos Especiais do Projeto de Engenharia para Bolsistas Provinciais de Taishan de Shandong (NO.tstp20221143 a X.Z.), pelo Programa Nacional de Talentos Estrangeiros de Alto Nível da China (H20240743; Especialista Estrangeiro: X.Z.), e Projeto de Cultivo de Pesquisa Científica da Primeira Universidade Médica de Shandong em Campos Estratégicos Emergentes (202403).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Placa de 96 PoçosThermo Fisher Scientific (EUA)468667Consumíveis
AcetonaReagente de NanJing (China)C0720114023Reagente
AcetonitrilaMerck (China)CN34892Reagente
Kit de Ensaio de Proteína BCAAbcam (Reino Unido)ab102536Reagente
Padrão de albumina sérica bovina (BSA)Solarbio (China)PC0001-1Reagente
tubo de centrífuga (50ML)Kirgen (China)KG2811Consumíveis
Microtomo de crióstatoLeica (Alemanha)C1900Equipamento
CisteínaAladdin (China)C108238Reagente
DL-Ditiotreitol (DTT)Amresco (EUA)D8220Reagente
Coluna HPLC de fase reversa EASY-Spray C18Thermo Scientific (EUA)ES800AConsumíveis
Balanço EletrônicoSartorius (EUA)BSA224SEquipamento
Meio de incorporaçãoLeica (Alemanha)39475237Consumíveis
Cartuchos Empore SPE C18Sigma-Aldrich (EUA)66872-UConsumíveis
Tubo EppendorfKirgen (China)KG2211Consumíveis
Papel de FiltroCytiva (EUA)Grade 42Consumíveis
Ácido fórmicoAladdin (China)F112032Reagente
Béquer de VidroSHUBO (China)1015479Consumíveis
Cilindro graduado de vidroSHUBO (China)1601Consumíveis
‌ Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa de Alta ResoluçãoThermo Scientific (EUA)Q-ExativoEquipamento
Contêiner IsoladoFhefon (China)LCZYX-12Consumíveis
Microscópio Invertido Leica (Alemanha)XDS-1Equipamento
IodoacetamidaSolarbio (China)I8010Reagente
IsopropanolAladdin (China)I112018Reagente
Reagentes iTRAQSigma-Aldrich (EUA)4381663Reagente
KClBeyotime (China)ST1596Reagente
KH2PO4ShangHai YuanYe (China)S24278Reagente
Microdissecação por captura a laserLeica (Alemanha)LMD 6000Equipamento
Slide de microdissecação por captura a laserLeica (Alemanha)3800040Consumíveis
Lâminas descartáveis de alto perfil LeicaLeica (Alemanha)14035838926Consumíveis
Recipiente de Nitrogênio LíquidoKEYICRYO (China)YDS-3Equipamento
Agitador de placa elétrica magnéticaShanghaiSILE (China)LAB-0002-0068-SHSLEquipamento
Leitor de MicroplacasTECAN (Suíça)INFNITE F200Equipamento
PEN  MembranaLeica (Alemanha)11505189Consumíveis
Medidor de pHSartorius (EUA)PB-10Equipamento
PipetaEppendorf (Alemanha)3123000268Equipamento
PipetaEppendorf (Alemanha)3123000241Equipamento
PipetaEppendorf (Alemanha)3123000225Equipamento
PolySULFOETYL APolyLC Inc (EUA)104SE0303Consumíveis
Inibidor de proteaseRoche (Suíça)05892791001Reagente
Centrífuga refrigeradaBeckman (EUA)AllegraTM X-22REquipamento
GeladeiraMEILING (China)BCD-180KCTEquipamento
Dodecilsulfato de sódio (SDS)Amresco (EUA)1027P033Reagente
Frasco de ManchaBeyotime (China)FG005Consumíveis
Scoop de aço inoxidávelMuzixing (China)XYS-101Consumíveis
DicasKirgen (China)KG1313Consumíveis
Solução de coloração com azul toluidinaSigma-Aldrich (EUA)198161-5G/198161-25GReagente
Ácido trifluoroacéticoAladdin (China)T103293Reagente
Tris-HClAmresco (EUA)T8230Reagente
Solução de tripsina-EDTASolarbio (China)T1300Reagente
Freezer de Ultrabaixa TemperaturaSanyo (Japão)MDF-382EEquipamento
Purificador de Água Ultra-PuraELGA (Reino Unido)PureLAB flexEquipamento
Disruptor de Células UltrassônicasQSONICA (EUA)Q500Equipamento
Liofilizador a vácuoTermodinâmica (EUA)SNL 315SVEquipamento
Misturador de vórticeTecnologia de Cristais & Indústrias (EUA)HYQ-3110Equipamento
Incubadora de banho-mariaInstrumento Tecnológico Yiheng de Xangai (China)HWS-26Equipamento
Papel de PesagemCole-parmer (EUA)133802Consumíveis

Referências

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