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Artigo de método

Explorando o mecanismo da fórmula San Jie Tong Mai contra a aterosclerose via farmacologia de redes e proteômica

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DOI:

10.3791/70080

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17 de abril de 2026

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, the Third Affiliated Clinical Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Department of Respiratory, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 3The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine

Neste artigo

Resumo

Este estudo demonstra que a Fórmula San Jie Tong Mai atenua a aterosclerose em camundongos ApoE-/- ao regular o metabolismo dos glicocorticoides mediado por Hsd11b1, melhorando assim a dislipidemia e a inflamação vascular. Análises integradas de farmacologia em redes, proteômica e acoplamento molecular revelam um mecanismo sinérgico multicomponente e multi-alvo subjacente aos seus efeitos antiateroscleróticos.

Resumo

Este estudo teve como objetivo elucidar o mecanismo da Fórmula San Jie Tong Mai (SJTMF) contra a aterosclerose (EA), uma das principais causas de morbidade cardiovascular. Usando modelos de camundongos ApoE-/- demonstramos que o SJTMF inibe significativamente a progressão da placa de AS. Por meio de uma estratégia integrada de farmacologia em rede e proteômica, cinco componentes bioativos centrais foram identificados: beta-sitosterol, naringenina, luteolina, isorhamnetina e ácido 3beta-hidroxi-24-metileno-8-lanosteno-21-oico. Simultaneamente, a proteômica revelou 129 proteínas relacionadas ao AS que foram expressas diferencialmente. O acoplamento molecular confirmou interações de ligação de alta afinidade entre esses componentes e o alvo chave Hsd11b1, com suas energias de ligação todas abaixo de -5 kcal/mol. Investigações mecanicistas revelaram ainda que o SJTMF pode regular o metabolismo dos glicocorticoides mediado por Hsd11b1. Essa regulação contribui para uma melhora significativa tanto da dislipidemia quanto da inflamação vascular, suprimindo assim o desenvolvimento da SA. Coletivamente, este trabalho demonstra, pela primeira vez, o mecanismo inovador pelo qual uma fórmula da medicina tradicional chinesa exerce efeitos anti-AS por meio da regulação sinérgica multicomponente do alvo Hsd11b1 , oferecendo novos insights para intervenção terapêutica.

Introdução

A aterosclerose (SA), uma doença inflamatória crônica que afeta a vasculatura sistêmica, constitui a principal base patológica para eventos cardiovascularese cerebrovasculares. Sua patogênese envolve interações complexas entre fatores genéticos, ambientais, psicossociais e patológicos multifatoriais, exibindo características multiestágio e poligênicas. Embora as estratégias terapêuticas atuais — particularmente agentes que reduzem lipídios, como estatinas e inibidores da Proproteína Convertase Subtilisina/Kexin Tipo 9 (PCSK9) — reduzam efetivamente os níveis de colesterol de lipoproteína de baixa densidade (LDL-C), elas não abordam totalmente o risco inflamatório residual que provoca eventos cardiovascularesrecorrentes 2. Além disso, efeitos adversos associados à terapia (por exemplo, diabetes de início recente, miotoxicidade, insuficiência hepatorrenal) limitam o uso e a intensificação a longo prazo da terapia para reduzirlipídios 3,4. Essas limitações destacam a necessidade de abordagens complementares que visem diretamente a inflamação vascular, incluindo terapias anti-inflamatórias, para reduzir ainda mais o risco cardiovascular além da redução de lipídios.

Na medicina tradicional chinesa (MTC), a SA se enquadra nas categorias de "impedimento torácico" (Xiong Bi) e "acúmulo vascular" (Mai Ji), sendo reconhecida como sua patogênese central como "entrelaçamento de catarro-estase" (Tanyu Hujie). Guiados pelo princípio da "hidroterapia transformadora da estase" (Yuneng Huashui), nosso grupo de pesquisa desenvolveu a "Fórmula San Jie Tong Mai (SJTMF)" composta por 14 ervas, incluindo Salvia miltiorrhiza (Danshen) e Whitmania pigra Whitman (Shuizhi), para resolver sinergicamente a turbidez do catarro, dissipar a estase e promover a diurese. Estudos clínicos preliminares demonstraram a eficácia do SJTMF em melhorar significativamente os perfis lipídicos e estabilizar/reverter placas ateroscleróticas em pacientes idosos com AScarótida 5. Investigações experimentais revelaram ainda sua capacidade de inibir a progressão da AS modulando a polarização dos macrófagos e as vias deautofagia 6,7. No entanto, as características multicomponente, multi-alvo e multi-via das fórmulas da MTC apresentam desafios para elucidar sistematicamente seus mecanismos regulatórios integrados usando abordagens reducionistas convencionais.

Para explorar os mecanismos moleculares que mediam os efeitos antiateroscleróticos do SJTMF e enfrentar os desafios, este estudo utilizou uma estratégia multidisciplinar integrada. A farmacologia de rede, conceituada porHopkins 8,9, foi utilizada para construir uma rede multidimensional de "componente herbal-alvo-via doença". Essa abordagem facilitou a previsão dos principais compostos ativos do SJTMF e dos potenciais alvos terapêuticos para intervenção na EA, consistente com as características regulatórias holísticas da MTC. Complementando isso, a tecnologia proteômica, aproveitando análise proteica qualitativa e quantitativa de alta produtividade ealta precisão 10, monitorou dinamicamente mudanças no perfil de expressão proteica associada à AS após a intervenção SJTMF em modelos animais. Isso permitiu a identificação de moléculas efetoras-chave e eventos de sinalização, fornecendo assim evidências experimentais para a exploração mecanicista. Posteriormente, foram realizadas simulações de acoplamento molecular de alta precisão para avaliar os modos de ligação e as energias de ligação entre os alvos centrais previstos pela farmacologia de rede e os principais componentes bioativos, fornecendo uma base teórica para potenciais interaçõescomponente-alvo 11. Comparado a abordagens alternativas, como confiar exclusivamente em previsões de farmacologia de redes (propensas a altas taxas de falsos positivos e sem validação experimental)12 ou combinar apenas proteômica com acoplamento molecular (que pode falhar em capturar interações em nível de sistema previstas por análise de rede), essa estratégia integrada aborda sinergicamente essas limitaçõesinerentes 13.

Ao integrar técnicas multidimensionais, este estudo visa elucidar sistematicamente a base farmacodinâmica fundamental do material, a rede central de alvos e os mecanismos sinérgicos multi-vias do SJTMF. Assim, fornecendo suporte teórico orientado por mecanismos para avançar na modernização da MTC e no desenvolvimento de medicamentos inovadores.

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Protocolo

Todos os procedimentos com animais foram realizados com aprovação do Comitê de Animais Experimentais da Universidade de Medicina Chinesa de Changchun (Aprovação Ética nº 2023521). Ratos machos específicos livres de patógenos (SPF) C57BL/6J e ApoE⁻/⁻ (5 semanas, 18-22 g) foram incluídos no estudo (Licenças de Uso de Animais de Laboratório nºs SCXK (JI) 2023-002 e SCXK (SU) 2021-0013). Informações sobre reagentes e instrumentação são fornecidas na Tabela de Materiais.

1. Farmacologia de redes

  1. Previsão dos Componentes Ativos e Alvos do SJTMF
    1. Rastreie os componentes ativos da casca de Salvia miltiorrhiza, Panax notoginseng, Artemisia scoparia, Poria cocos, Alisma plantago-aquatica L, Amomum villosum, Santalum albumL, Citrus aurantium e casca de Citrus reticulata usando biodisponibilidade oral (OB) ≥ 30% e semelhança com o medicamento (DL) ≥ 0,18 como critério.
    2. Selecionar os componentes ativos de Whitmania pigra Whitman, Bombyx batryticatus, Periostracum cicadae, Caulis Bambusae em Taeniam e Ophicalcitum aplicando a Regra dos Cinco de Lipinski, com os seguintes parâmetros: miLogP ≤ 5, nOHNH ≤ 5 e nOH ≤ 10.
    3. Combine os compostos rastreados com seus códigos SMILES para prever alvos compostos.
      NOTA: Para detalhes sobre os dois bancos de dados mencionados acima, veja a Tabela de Materiais.
  2. Previsão de alvos relacionados ao AS e construção de uma rede "drug-component-target".
    1. Use o banco de dados GeneCards para recuperar alvos de doenças relacionadas ao AS usando terminologia padronizada da doença.
    2. Use o software Venny 2.1 para identificar os alvos que se cruzam entre SJTMF e AS como potenciais alvos terapêuticos do SJTMF para AS.
    3. Use o Cytoscape 3.9.1 para construir um diagrama de rede "componente-alvo do medicamento".
      NOTA: Para detalhes sobre os bancos de dados mencionados acima, consulte a Tabela de Materiais.

2. Aclimatação

  1. Alojar todos os camundongos em instalações de FPS (24 °C; 50-60% de umidade; ciclo claro/escuro de 12 h). Ofereça comida e água padrão de improviso. Deixe 7 dias para a aclimatação antes dos experimentos.

3. Preparação do SJTMF

  1. Prepare a formulação de 14 ervas contendo: Salvia miltiorrhiza (Dan Shen) 30 g, Artemisia scoparia (Yin Chen) 10 g, Panax notoginseng (San Qi) 10 g, Poria cocos (Fu Ling) 10 g, Amomum villosum (Sha Ren) 10 g, Alisma plantago-aquatica L (Ze Xie) 30 g, Santalum albumL (Tan Xiang) 10 g, casca de Citrus reticulata (Chen Pi) 10 g, Citrus aurantium (Zhi Qiao) 10 g, Whitmania pigra Whitman (Shui Zhi) 10 g, Periostracum cigarra (Chan Tui) 10 g, Bombyx batryticatus (Jiang Can) 10 g, Caulis Bambusae em Taeniam (Zhu Ru) 10 g, e Ophicalcitum (Hua Rui Shi) 30 g.
  2. Descoccionar materiais herbais (1.800 g no total) 3× com 8 volumes de água destilada (1,5 h por extração).
  3. Filtre através de gaze e nylon de 100 de malha.
  4. Concentre o filtrado a 60 °C (densidade: 1,23-1,27). Concentrado seco sob pressão reduzida a 70 °C.
  5. Pulverize o extrato seco através de peneiras de 80 malhas (rendimento: 20,6%).
    NOTA: Após um relatóriopreviamente publicado 7, os camundongos receberam 3,56 g∙kg⁻¹∙day⁻¹ de extrato SJTMF (normalizado pela área da superfície corporal).

4. Estabelecimento de modelos

  1. Induza a SA em camundongos ApoE-/- usando uma dieta rica em gordura de 12 semanas (HFD; 20% de gordura, 1,25% de colesterol). Meça o peso corporal em intervalos de 7 dias para monitoramento metabólico.
  2. Atribua camundongos C57BL/6J ao grupo Controle (Controle com dieta normal + soro fisiológico). Distribuir aleatoriamente os camundongos modelados com sucesso em quatro grupos: grupo modelo, grupo atorvastatina (0,0026 mg/g atorvastatina), grupo SJTMF-L (SJTMF em baixa dose, 3,56 g∙kg-1∙dia-1), grupo SJTMF-H (SJTMF em alta dose, 7,12 g∙kg-1∙day-1)7. Administre todas as intervenções por meio de um gavage padronizado de 0,4 mL pela manhã por 4 semanas.
    NOTA: As soluções padrão do SJTMF foram preparadas de acordo com nosso protocoloestabelecido 7. As intervenções experimentais começaram na semana 9, mantendo o ritmo temporal clínico da dosagem matinal. Os camundongos foram definidos como modelados com sucesso quando placas ateroscleróticas evidentes foram observadas na aorta por coloração grossa de óleo vermelhoO 7.

5. Coleta de amostras, colheita e preservação da Aorta

NOTA: Após 4 semanas de administração intragástrica, jejue todos os camundongos por 12 horas (água ad libitum). Meça o peso corporal final e depois sacrifice-o por meio de deslocação cervical sob anestesia.

  1. Incise o abdômen do camundongo até o processo xifoide.
  2. Isolem a aorta da raiz aórtica até a bifurcação comum da artéria ilíaca.
  3. Remova o excesso de tecido adiposo e transectoque a aorta aproximadamente 1 cm distal ao arco aórtico.
  4. Fixe a aorta em paraformaldeído ou congele rapidamente em nitrogênio líquido.
    NOTA: Colete o soro e armazene os tecidos aórticos a -80 °C para análise futura.
  5. Mancha HE
    1. Coloque seções em xileno em sequência por 20 minutos cada, o dobro no total; Depois transfira para etanol absoluto por 10 minutos cada, o dobro no total. Hidrate as seções passando por uma série descendente de etanol classificado (95%, 90%, 80%, 70%), 5 minutos por concentração.
    2. Tinga em sequência com 0,4% de hematoxilina por 3-8 minutos, depois com solução de eosina a 0,5% por 1-3 minutos.
      NOTA: Enxágue bem com água destilada entre as etapas.
    3. Desidratar seções por meio de uma série crescente de etanol (95% até etanol absoluto), 5 min por concentração. Limpe as seções em xileno por 5 minutos cada, o dobro no total. Deixe secar completamente ao ar e depois monte com resina neutra.
    4. Observe ao microscópio e capture imagens.

6. Preparação total de proteína a partir de amostras de tecido aórtico

NOTA: Proteínas foram isoladas dos tecidos aórticos de cada um dos três grupos experimentais (grupo controle, grupo modelo, grupo SJTMF-H).

  1. Homogeneize os tecidos aórticos em um tampão de lise (1,5% SDS/100 mM Tris-HCl, pH 8,5), depois incube a 95 °C por 15 minutos para alcançar a desnaturação da proteína.
  2. Resfrie as amostras, depois centrifuge-as a 12.000 × g e 4 °C por 5 minutos e colete o sobrenadante. Precipite as proteínas no sobrenadante usando o método de precipitação por acetona.
  3. Redissolva o precipitado proteico (8 M Ureia/100 mM Tris-HCl, pH 8,5), depois prepare o kit de ensaio de BCA conforme as instruções do fabricante e determine a concentração total de proteínas, veja Tabela de Materiais).
    NOTA: Com a mesma quantidade de proteína entre diferentes amostras, a solução redissolvida foi usada para preencher todas as amostras no mesmo volume.
  4. Realizar redução proteica e alquilação com TCEP e CAA a 37 °C por 1 hora.
  5. Adicione tripsina (1:50) à amostra de proteína e incube a 37 °C por 24 horas (veja a Tabela de Materiais).
  6. Use TFA para ajustar o pH para 6,0 e assim terminar a digestão. Centrifuge a amostra a 12.000 × g por 15 minutos, depois purifique os peptídeos do sobrenadante usando uma coluna de dessalinização SDB-RPS feita por você (veja Tabela de Materiais).
    NOTA: O peptídico eluato foi secado a vácuo e armazenado a -20 °C para uso posterior.

7. Cromatografia líquida - espectrometria de massa tandem (LC - MS/MS)

  1. Injete 200 ng de digestão peptídica com volume de injeção de 1 μL em uma coluna de armadilhadora C18 (75 μm × 2 cm, 3 μm, 100 Å). Os peptídeos foram então separados em uma coluna analítica C18 de fase reversa (75 μm × 15 cm, 1,7 μm, 100 Å) a uma vazão de 0,3 μL/min.
  2. Use água contendo 0,1% de ácido fórmico (FA) como fase móvel A e acetonitrila (ACN) contendo 0,1% de FA como fase móvel B (veja a Tabela de Materiais). Aplique um gradiente linear de 12% a 30% B durante 0-12 min, seguido por um aumento de 30% para 80% B em 12-15 min, e mantenha em 80% B de 15-18 min para lavagem da coluna. Ajuste a vazão para 0,300 μL/min de 0 a 15 min, depois aumente para 0,400 μL/min de 16 a 18 min. Ajuste a voltagem capilar para 1500 V.
  3. Adquira espectros MS e MS/MS na faixa de 100 a 1700 m/z.
  4. Varre-se a mobilidade iônica na faixa de 0,6 a 1,6 Vs/cm². Defina o tempo de acumulação e o tempo de rampa para 50 ms.

8. Análise da função proteica

NOTA: Proteínas Diferencialmente Expressas (DEPs) da proteômica foram intersectadas com alvos-chave da farmacologia em rede, e as proteínas-alvo sobrepostas foram selecionadas para anotação funcional da Gene Ontology (GO) e análise de enriquecimento de vias pela Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG). Categorias funcionais e vias com P < 0,05 foram consideradas significativas.

  1. Analise os dados brutos da DIA no modo sem biblioteca.
  2. Pesquise os arquivos de espectros no banco de dados de sequências de proteínas do Mouse.
  3. Defina os principais parâmetros de busca.
    1. Habilitar opções de geração de íons precursores para geração de bibliotecas espectrais previstas in silico.
    2. Especifique a enzima com no máximo 2 clivages perdidos permitidos (veja Tabela de Materiais).
    3. Defina a carbamidometilação da cisteína (C) como uma modificação fixa.
    4. Defina a oxidação da metionina (M) e a acetilação N-terminal da proteína como modificações variáveis.
    5. Ajuste a precisão de massa do precursor e a precisão de massa MS1 para 15 ppm.
    6. Permitir a correspondência entre execuções e inferência heurística de proteínas.
    7. Defina o limite da Taxa de Falsa Descoberta de Precursores (FDR) em 1% para identificação confiável.
  4. Execute a análise DIA-NN (1.8.2 beta 11).
    NOTA: Realize quantificação em nível de proteína usando DIA-NN e realize análise bioinformática e visualização usando R. Significativamente, os DEPs foram determinados pelo valor P do teste t e dos limiares de mudança de dobra de Student.

9. Acoplamento molecular

  1. Baixe a estrutura cristalina tridimensional da proteína alvo do banco de dados RCSB PDB e salve-a no formato PDB; enquanto isso, baixe a estrutura molecular do componente ativo central do SJTMF do banco de dados PubChem e salve-a no formato SDF.
  2. Use o PyMOL 2.6.0 para realizar a remoção de água e hidrogenação na estrutura proteica alvo, remover ligantes endógenos irrelevantes e salvar a estrutura proteica processada no formato PDB; obter os parâmetros do bolso de acoplamento via o Getbox Plugin do PyMOL, com os parâmetros da grade box definidos da seguinte forma: center_x = -7,2, center_y = 53,4, center_z = 30,6, size_x = 73,7, size_y = 85,9, size_z = 67,2, e o número de conformações de acoplamento num_modes = 10.
  3. Importe o arquivo de proteína alvo processada e o arquivo do núcleo composto do SJTMF separadamente para o AutoDock Tools 1.5.6 para converter ambos os arquivos no formato PDBQT, e então realize o acoplamento molecular com o AutoDock Vina 1.1.2 com base nos parâmetros da grade box definidos acima.
  4. Visualize os resultados do acoplamento molecular com PyMOL.

10. Estatísticas

  1. Realize uma análise estatística.
  2. Expresse os resultados como média ± desvio padrão (DS).
  3. Especificar o uso do teste de Diferença Significativa Honesta (HSD) de Tukey para análise post hoc após ANOVA unidirecional quando os dados atingiram normalidade e homogeneidade das variâncias; aplicar o teste de Games-Howell para dados heteroscedásticos. Considere um p < 0,05 estatisticamente significativo.
  4. Visualize os dados usando o GraphPad Prism8.0.2.

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Resultados

O SJTMF suprime a formação de placas ateroscleróticas em camundongos ApoE-/-
Para investigar o efeito inibitório da SJTMF na EA, o modelo de camundongo ApoE-/- foi utilizado para monitorar mudanças no peso corporal e observar alterações histopatológicas na aorta. Comparado ao grupo modelo, a intervenção SJTMF amenizou o ganho de peso corporal em camundongos ApoE -/- alimentados com HFD (

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Discussão

Embora estudos anteriores tenham demonstrado que o SJTMF exerce efeitos anti-inflamatórios e induz polarização de macrófagos em modelos de camundongos ApoE⁻/⁻ 6,7, os mecanismos moleculares específicos subjacentes à sua atividade antiaterosclerótica permanecem incertos. O princípio do "mesmo tratamento para diferentes doenças" na medicina tradicional chinesa ...

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Divulgações

Os autores não têm conflitos de interesse a declarar.

Agradecimentos

Este estudo foi apoiado pela Fundação de Ciências Naturais da Província de Jilin (Nºs YDZJ202401644ZYTS).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
2-Cloroacetamida (CAA)Sigma-AldrichC0627-100G
Solução de Fixação com Paraformaldeído 4%Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.80096618
0,5&ntraço; 10 & micro; Micropipeta Leppendorf4924000029
10 & ndash; 100 & micro; Micropipeta Leppendorf4924000053
20 & ndash; 200 & micro; Micropipeta Leppendorf4924000061
100 & ndash; 1.000 & micro; Micropipeta Leppendorf4924000088
1000 & micro; Ponteiras de L PipeteNEST Life Science Co., Ltd.303216
10 & micro; Ponteiras de L PipeteNEST Life Science Co., Ltd.301016
20 & micro; Ponteiras de L PipeteNEST Life Science Co., Ltd.302106
Tubo de centrífuga de 15 mLNEST Life Science Co., Ltd.601052
Tubo centrífugo de 1,5 mLNEST Life Science Co., Ltd.615601
Um banco de dados guiado por experimentos de alta capacidade e referência da medicina tradicional chinesa (HERB)/http://herb.ac.cn/v2
Acetonitrila (LC-MS)Thermo Fisher ScientificA955-4
Acetona acetonilaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10000418
Água com AmôniaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10011028
AutoclaveShanghai Sanshen Medical Devices Co., Ltd.YM75
Acclaim PepMap (75µ m*2cm, C18, 3µ m, 100Å)Termodinâmica164535
AURORA ULTIMATE (75µ m*25cm, 1,6µ m, 100Å)AURORAAUR3-25075C18-CSI
Kit de Ensaio de Proteína BCASangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.C503021-0500
Centrífuga refrigerada de alta velocidade de bancadaHunan Kecheng Instrument Equipment Co., Ltd.H1 - 16KR
Azul de BromofenolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.71008060
Aquecedor de blocoInstrumentos Miu de HangzhouDKT-100
ClorofórmioSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10006818
Sistema de Imagem de QuimioluminescênciaHangzhou Shenhua Technology Co., Ltd.SH - 523
Supino limpoSuzhou Jinghua Equipment Co., Ltd.SW-CJ-2D
Vidro de CoberturaJiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd.10212450C
Cytoscape v3.9.1//
DIA-NN (V1.8.1)O Instituto Francis Crickgithub.com/vdemichev/DiaNN
Display Digital Banho-maria de temperatura constanteChangzhou Jinnan Instrument Manufacturing Co., Ltd.HH - W600
Shaker de desmanchaWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.TSY-B
Máquina de desaguamentoWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JT-12J
EosinaWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.E8090
Incorporação de ParafinaSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.69019361
Etanol AbsolutoSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10009218
Máquina de EmbeddingWuhan Junjie Electronics Co., Ltd.JB-P5
GraphPad Prisma/8.0.2
Ácido Acético GlacialSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10000218
GeneCards/https://www.genecards.org/
GlicerolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10010618
GlicinaBiofroxx1275GR500
Ontologia Genética (GO)/geneontology.org
HematoxilinaWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.G1140
Horizontal ShakerHaimen Qilinbeier Instrument Manufacturing Co., Ltd., JiangsuTS - 1
Cerca-barreira hidrofóbicaServicebioWG1066-1
HCIFábrica de Reagentes Químicos de XinyangGB622-89
Cromatografia líquida de alta performanceAgilent1200
IsopropanoSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.80109218
Image-Pro PlusCibernética MidiáticaVersão 6.0
Sistema de ImagemNikonDS-Fi3
Tesoura Microdissecadora IRIS-FineRWD Life Science Co., Ltd.S12004-09
Enciclopédia de Genes e Genomas de Kyoto (KEGG)/www.genome.jp/kegg/
Lamina de MicroscópioNantong Mevid Life Science Co., Ltd.PC2-301
Micro-ondasEletrodomésticos de Micro-ondas Galanz Co., Ltd.P70D20TL-P4
Mini centrífugaLaboratório DragãoD1008E
Resina neutraWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.G8590
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10019318
NCBI/www.ncbi.nlm.nih.gov
Pulverizador de célula ultrassônica sem contatoSCIENTZ08-III
n-ButanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.100052190
FornoShanghai Huitai Instrument Manufacturing Co., Ltd.DHG-9140A
PubChem/https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
Pó Tamponador de Fosfato PBSWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.P1010
Microtomo PatológicoLeica Instruments Co., Ltd. (Xangai)RM2016
Centrífuga PortátilWuhan Lingsi Biotechnology Co., Ltd.D1008
R 4.5.1//
Buffer de Lise RIPA (1,5 ML)MeilunbioMA0151
Dodecilsulfato de sódio (SDS)Sigma-AldrichL3771-500G
SpeedVacGemmyCV200
Software SPSSEstatísticas do IBM SPSSVersão 22
Pinças de Amarração de SuturasRWD Life Science Co., Ltd.FC11001R-11
Microscópio Estéreo DissecanteRWD Life Science Co., Ltd.77001S
Colunas de Rotação RMCWBIOCW0597S
Espectrômetro de massa timsTOF ProBruker DaltonicstimsTOF Pro
Banco de Dados e Plataforma de Análise de Sistemas de Farmacologia da Medicina Tradicional Chinesa (TCMSP)/https://tcmspw.com/tcmsp.php
Misturador térmicoInstrumentos Miu de HangzhouMTC-100
Ácido trifluoroacético (TFA)Sigma-Aldrich299537-500G
Tris(2-carboxietil)fosfina cloridrato (TCEP)Sigma-AldrichC4706-10G
TripsinaSigma-AldrichT575-31N-10
Homogeneizador de tecidosInstrumentos Miu de HangzhouMT-30K
Tris(hidroximetil)aminometano (base Tris)Sigma-AldrichT1503-1KG
Sistema UltiMate 3000 RSLCnanoTermo CientíficaUltiMate 3000 RSLCnano
UniProt (03-01-2023)O Instituto Francis Crickgithub.com/vdemichev/DiaNN
UreiaSigma-Aldrich51456-500G
Venny2.1/https://www.bioinformatics.com.cn/static/others/jvenn/example.html
Misturador de vórticesKylin-BellVORTEX-5
Tesouras Vannas com MolaRWD Life Science Co., Ltd.S11001-08
Água (LC-MS)Thermo Fisher ScientificW6-4
XyleneSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10023418

Referências

  1. Mensah, G. A., Roth, G. A., Fuster, V. The global burden of cardiovascular diseases and risk factors: 2020 and beyond. J Am Coll Cardiol. 74 (20), 2529-2532 (2019).
  2. Sampson, U. K., Fazio, S., Linton, M. F. Residual cardiovascular risk despite optimal LDL cholesterol reduction with statins: The evidence, etiology, and therapeutic challenges. Curr Atheroscler Rep. 14 (1), 1-10 (2012).
  3. Katzmann, J. L., Packard, C. J., Chapman, M. J., Katzmann, I., Laufs, U. Targeting rna with antisense oligonucleotides and small interfering RNA: JACC state-of-the-art review. J Am Coll Cardiol. 76 (5), 563-579 (2020).
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